山西某鸡棚改造育肥猪场腹泻病因诊断

郑龙龙 潘国梅 张 黎*谈小龙

（1山西农业大学动物医学学院，山西太谷 030801；2云南省楚雄州禄丰县动物卫生监督所，云南禄丰 652100；3安徽省六安市畜牧发展中心，安徽六安 237000）

轮状病毒感染仔猪后常导致呕吐、腹泻、脱水和酸碱平衡紊乱[1]。病原体除轮状病毒外，儿童及其他幼龄动物体内分离的轮状病毒也可感染仔猪[2]，引起不同程度的发病症状，轮状病毒是幼儿和多种新生动物重要的肠道病毒，为人兽共患病；轮状病毒能侵害人和许多家畜，给人类健康和畜牧业的稳定带来巨大威胁[3]。目前尚无治疗轮状病毒感染的有效药物，当环境温度下降和继发大肠杆菌病时常使症状加重和幼畜死亡率增高[4,5]。

成年猪与育成猪多在晚秋、冬季和早春季节发病，多为隐性感染，是引起猪胃肠炎的常见病因。本病最早于1943年在患腹泻儿童身上发现，1975年首次从猪体内分离出轮状病毒，目前本病呈世界性流行[6]。轮状病毒在我国呈全国性流行，其抗体阳性率最高可达95.7%，病毒阳性率最高可达68.4%，且在腹泻和非腹泻猪群中均可检测到[7]。当前从各大洲分离到的轮状病毒最流行的毒株仍是OSU，其基因型组合为G5P，我国主要流行的也是该类毒株的轮状病毒[8]。

2020年11月晋中市太谷区2个养殖户从同一商品母猪场分别采购500头同批次50～70日龄12 kg仔猪，出现不同程度的腹泻症状，使用抗生素效果差，猪群中40%出现脱水、昏迷症状，最终造成15%的伤亡率。为了探讨该疾病的发生原因与相应的防控工作，开展本研究。

1 材料与方法

1.1 样品来源

无菌棉签分别取A、B养殖户80～100日龄架子猪肛拭子样品各20份，置于1.5 mL EP管中4℃备用。

1.2 试验材料

轮状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪瘟病毒荧光RT-PCR核酸检测试剂盒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬野毒gE基因荧光PCR核酸检测试剂盒，以上试剂盒均购自北京明日达科技发展有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 细菌分离培养与药敏试验

取肛拭子样品加入1 mL无菌生理盐水混匀，使用麦康凯、SS培养基划线分离培养；分离菌株培养物涂片，进行革兰氏染色，镜检。采用纸片扩散法涂抹在药敏培养基上，测定抑菌圈直径。

1.3.2 Q-PCR鉴定病毒

取1.3.1剩余样品稀释物4℃静置30 min，10 000 r·min离心5 min，取上清液0.1 mL，提取总RNA或DNA；使用Q-PCR核酸检测试剂盒分别检测猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、轮状病毒和猪伪狂犬野毒。

2 实验结果

2.1 细菌鉴定

40份样品接种于伊红美蓝培养基培养24 h后，培养基上出现了大小不等、带有金属光泽的紫黑色圆形菌落和无色半透明菌落。通过革兰氏染色镜检，显微镜下观察培养基上的2种形态相似的菌体，紫黑色菌落为革兰氏阴性着色均匀的直杆菌、无芽孢、两端钝圆，菌体两端偶尔略呈深染，与大肠杆菌染色特性相符[9]；无色半透明菌落为红色短小杆菌，与沙门氏菌的染色特性相符[10]。

2.2 药敏结果

大肠杆菌分离株对万古霉素、头孢曲松敏感，对阿莫西林、新霉素、粘杆菌素、四环素、氨苄西林、丁胺卡那霉素、恩诺沙星、大观霉素不敏感。沙门氏菌对大观霉素、万古霉素敏感，而对阿莫西林、新霉素、粘杆菌素、恩诺沙星、丁胺卡那霉素、四环素、氨苄西林、林可霉素、头孢曲松钠不敏感。

2.3 Q-PCR结果

Q-PCR相关试剂盒对猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、轮状病毒和猪伪狂犬野毒gE基因进行了检测，结果显示，40份样品中轮状病毒核酸100%呈阳性，猪圆环病毒2型核酸30%为阳性；猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬野毒均为阴性。

3 讨论

仔猪腹泻是由多种因素引起的一种肠道疾病，如果要诊断腹泻病的病原，兽医工作者除了需要有丰富的临床经验外，还需要借助实验室仪器的检测。本研究对仔猪腹泻中类似猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、轮状病毒和猪伪狂犬野毒等5种病毒及大肠杆菌、沙门氏菌混合感染时的发病情况、临床症状病例进行实验室诊断，为病原的诊疗方向提供借鉴。腹泻猪场的架子猪在发病的3 d前更换了饲料，这可能是引发本次猪腹泻的诱因，造成本次仔猪腹泻的病毒性病原主要是轮状病毒、肠炎型猪圆环病毒2型，细菌性病原是多重耐药性大肠杆菌和沙门氏菌，多种细菌和病毒的混合感染造成猪只的巨大伤亡。此外，该猪场是由鸡棚改造而成的，在生物安全方面存在消毒不彻底，存在鸡源耐药性大肠杆菌和沙门氏菌感染猪群的可能性。提示鸡棚改造成猪舍后需要多次彻底的清洗和消毒，并采样进行实验室检测并评价消毒效果。

成年猪血清中轮状病毒的抗体阳性检出率达40%～100%，且猪只一旦感染轮状病毒，就会终生带毒，难以净化，且极易造成垂直传播，带毒仔猪受到应激因素作用时随时可能发病[11,12]。轮状病毒在含有机物的外环境中非常稳定，有过发病史的猪场常年存在，造成即便仔猪不携带病毒，也很容易被环境中的病毒所感染[13]。人工接种试验发现，单独接种轮状病毒或溶血性大肠杆菌，只引起断奶仔猪短暂的轻度腹泻甚至呈亚临床症状表现。但如果先接种轮状病毒再接种溶血性大肠杆菌，则可发生类似自然病例的持续性严重腹泻[14-16]，与本病例临床症状相同。我国有关轮状病毒流行病学方面的研究数据相对较少且重视程度不足，虽然已经有商品化疫苗可用，母猪免疫接种可以保护新生仔猪免受感染[17,18]，但在致病机理方面的研究仍有待深入。