急性心肌梗死患者外周血miR-208 sST2 CLU与左室重构的相关性

王丽娟,关晓燕,张峰波

(新疆医科大学第一附属医院医学检验中心,新疆 乌鲁木齐市 830054)

急性心肌梗死(Acute myocardial infarction，AMI)是指冠状动脉急性闭塞、血流快速性中断所造成的心肌缺血缺氧性坏死，是较严重的心血管疾病之一[1]。主要表现剧烈而持久的心前区及胸骨后疼痛，并伴有心源性休克、恶性心律失常、心力衰竭等并发症。由于心脏射血能力下降和冠状动脉灌注不足，部分患者还可能出现脉搏微弱和血压降低，同时伴有进行性心电图变化及血清心肌酶活性增高，而休息及硝酸酯类药物无法完全缓解[2]。在AMI发病过程中，细胞外基质、胶原纤维网络和心肌细胞的结构(形态、厚度、体积)、功能和表型在神经内分泌系统、炎症因子和力学因子的作用下发生改变，即心室重构(Ventricular remodeling，VR)[3]。当发生左心室重构(Left ventricular remodeling，LVR)时，患者左心室收缩功能常呈进行性下降。AMI起病急且病情发展迅速，已成为国内外重要的公共健康问题。王宙等[4]研究报道，多种细胞因子与心肌损伤后心力衰竭及心肌细胞慢性损伤有关，但关于微小核糖核酸-208(Microrna-208，miR-208)、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(Soluble growth stimulating gene 2，sST2)、簇集蛋白(Clusterin，CLU)与左室重构关系的报道较少。本研究通过检测外周血sST2、CLU在AMI患者体内的水平，旨在探讨其与AMI发病后左室重构的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料:选取2019年1月至2020年2月到本院就诊并首次确诊为AMI的患者62例为AMI组，其中男39例，女23例，年龄41～75岁。纳入标准：①所有AMI患者诊断标准均参照中华医学会心血管病学分会于2019年制定《急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南》[5]；②心前区或胸骨后剧烈压榨性疼痛持续时间≥10～20min，且可向左肩、左上肢、背部及下颌等部位放射；③所有患者均于发病24h内入院。排除标准：①可能引起左室重构的其他疾病(心脏瓣膜病、心肌疾病、心力衰竭、心律失常、先天性心脏病及心肌炎等)；②合并肝肾功能障碍或不全、自身免疫性疾病、血液疾病、肿瘤等。所有AMI患者入院后立即行急性冠状动脉造影检查并给予经皮冠状动脉介入治疗(Percutaneous coronary intervention，PCI)，实现TIMI血流Ⅱ及以上。且于术后无禁忌症的情况下接受阿司匹林、低分子肝素抗凝、他汀类调脂固斑、氯吡格雷抗血小板聚集、ACEI/ARB 类药物及β受体阻滞剂等抑制心室重构治疗。同时选取同时期到本院就诊并经冠状动脉造影检查病变为阴性(狭窄程度<50%)且无任何心脏基础疾病的患者35例作为对照组，其中男21例，女14例。本研究均经所有患者及患者家属同意并签订知情同意书，并通过医院伦理委员会批准。见表1。

表1 AMI组与对照组一般资料比较

1.2方法:超声心动图检查：取左侧卧位，进行超声心动检查，所测超声心动图参数均取3个连续心动周期的平均值，测定左心室收缩末期直径(Left ventricular end systolic diameter ，LVESD)、左心室舒张末期直径(Left ventricular end diastolic diameter，LVEDD)；M型超声检查左心室收缩末期容积(Left ventricular end systolic volume ，LVESV)、左心室舒张末期容积(Left ventricular end diastolic volume，LVEDV)、左心室射血分数(Left ventricular ejection fraction ，LVEF)，并根据Simpson法计算左室心肌质量指数(Left ventricular mass index，LVMI)。并根据LVR标准(LVEDV变化率≥15%)将AMI组分为左室重构组(LVR组)与左室非重构组(No-LVR组)。采用血糖仪(购于上海罗氏诊断产品有限公司)检测空腹血糖(Fasting blood glucose，FPG)水平。采用血液分析仪(美国贝克曼库尔特DxH800血细胞分析仪)检测白细胞(White blood cell，WBC)及血小板(Platelet，PLT)水平。采用酶联免疫法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)(试剂采购于上海酶联生物科技有限公司)检测高密度脂蛋白-胆固醇(High-density lipoprotein ，HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(Low density lipoprotein ，LDL-C)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total Cholesterol ，TC)、sST2 及CLU水平。采用实时荧光定量PCR法测定外周血miR-208水平：取患者外周血，提取RNA，并测定RNA分子浓度，按照miScript Reverse Transcription Kit操作步骤进行逆转录反应，按照miRNA SYBR Green PCR Kit操作步骤进行荧光定量PCR反应，反应体系：总反应体系为25μL，其中PCR Master Mix 浓度为2X，体积为12.5μL；引物F(10uM)浓度为10μM，体积为0.5μL；引物R(10uM)浓度为10μM，体积为0.5μL；探针P(10uM)浓度为10μM，体积为0.5μL；ddH2O体积为2μL；Template(CDNA)体积为2μL；Total体积为25μL。冰浴中充分混匀混合反应体系。反应条件：95℃ 2min变性，95℃ 10sec，60℃ 60ses，共计40个循环。采集荧光贯穿与整个过程，反应结束后对PCR曲线进行分析，使用2-△△Ct法计算目的基因的相对表达量。见表2。

表2 逆转录引物miR-208 内参基因U6序列

2 结 果

2.1三组患者临床特征比较:三组在年龄、性别、体重指数、高血压史、糖尿病史、吸烟史、WBC、PLT、FPG、TG、TC、HDL-C水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组对比，LVR组LDL-C水平明显升高，且LVR组明显高于No-LVR组(P<0.05)，见表3。

表3 三组患者临床特征比较

2.2三组患者外周血miR-208、sST2、CLU比较:与对照组对比，LVR组患者的外周血miR-208、sST2、CLU水平均明显增高(P<0.05)，且LVR组均明显高于No-LVR组(P<0.05)。见表4。

表4 三组患者外周血miR-208 sST2 CLU比较

2.3三组患者超声心动图测量指标水平比较:与对照组对比，No-LVR组与LVR组患者的LVESD、LVEF均明显增高(P<0.05)，且LVR组明显高于No-LVR组(P<0.05)，No-LVR组与LVR组患者的LVEDD、LVESV、LVEDV及LVMI水平明显降低(P<0.05)，且LVR组明显低于No-LVR组(P<0.05)。见表5。

表5 三组患者超声心动图测量指标水平比较

2.4外周血miR-208、sST2、CLU与超声心动图测量指标水平的相关性分析:经Pearson相关性分析，LVESD、LVEF与外周血miR-208、sST2、CLU呈显著正相关(P<0.05)，LVESV、LVEDD、LVEDV、LVMI与外周血miR-208、sST2、CLU呈显著负相关(P<0.05)。见表6。

表6 外周血miR-208 sST2 CLU与超声心动图测量指标水平的相关性分析

3 讨 论

AMI预后差且死亡率高，严重威胁人类的生活质量与生命健康。当发生AMI后，部分心肌缺血坏死，收缩能力丧失，引起左心室壁收缩运动不协调，左室内的血液无法有效的排空射出，加重心室内压力负荷，进而引起整个左室梗死区心肌扩张与非梗死区代偿性肥厚的慢性适应性反应，严重时甚至导致心室容积增大、心力衰竭等[6]。LVR是心脏的一种适应性代偿机制，研究发现，当发生LVR时，患者可出现恶性心律失调、室壁瘤形成、及心脏破裂常等一系列急性并发症，致死率较高且预后较差[7]。因此，积极诊断及治疗AMI、降低LVR发生率、减轻患者死亡率率对改善患者预后具有重要作用。

miRNAs是一类内源性非编码单链RNA，miRNAs可通过靶向特定的标靶对基因进行表达调控，从而参与疾病的发生、发展[8]。miRNAs包含miR-208具有高度的组织特异性。miR-208在心脏重构的心肌中表达水平明显升高[9]。此外，叶茂等[10]研究认为，miR-208表达水平与心肌胶原的堆积、心肌肥大、心律失常等心肌损伤过程具有重要关系，miR-208可以作为预测心脏功能的重要指标。

ST2属于白细胞介素-1受体家族，是心脏生物机械应力诱导产生的心肌蛋白，包括ST2L与sST2两种异构体，具有免疫调节及控制炎症的作用。研究发现，ST2L能够与sST2竞争性结合，从而发挥减少心肌凋亡、改善心功能以及拮抗心肌重构等生物学作用[11]。T2作为一种诱骗受体存在于人体内，当血清中的sST2水平增高时，可阻断ST2L与IL-33结合，并与IL-33/ST2L信号通路发挥的心脏保护作用相拮抗，从而促进AMI患者病情的发生与发展，影响预后恢复[12]。

CLU是一种急性期反应蛋白，主要存在于人体血浆的高密度和极高密度脂蛋白中，并参与构成高密度脂蛋白复合物，有调节脂质代谢、延缓细胞凋亡以及调节血管内皮稳定性等作用。Kropackova Tereza等[13]研究发现，CLU可减轻细胞坏死后周围组织产生的继发性炎症反应，保护组织并促进损伤后的组织修复以及补体抑制等生物学功能。

本研究结果发现，随着患者病情的发展，外周血miR-208、sST2、CLU水平均明显升高，上述指标均可作为反应患者病情发展的重要指标。AMI发病早期及时干预miR-208、sST2、CLU的表达可抑制心室重构的发生发展。目前临床上用于诊断AMI的方法很多，其中超声心动图是一种利用超声波回声探查心脏及大血管并获取相关信息的一组检查方法，其操作简单、安全无创、准确率高，是冠状动脉造影检查的金标准。

综上所述，外周血miR-208、sST2及CLU在AMI患者体内呈高表达状态，且与AMI后LVR关系密切，及时检测这两种因子的水平有助于抑制AMI后LVR情况的发生及发展。本研究样本量较少，抽样误差可能较大，尚需进一步临床研究来证实。