活动性巨细胞病毒感染DNA载量与2型糖尿病患者T淋巴细胞亚群的关系

蔡丽娟 任 妹 刘剑荣 潘 幸

江西省萍乡市人民医院检验科，江西萍乡 337000

巨细胞病毒属于疱疹病毒亚科，是引发人类疾病的常见病原体，可通过密切接触、输血、性行为、器官移植及母婴途径等方式传播。而2 型糖尿病（type 2 di abetes mellitus，T2DM）作为一种常见的慢性疾病，多发病于35～40 岁之后，其患者数量占糖尿病患者90%以上[1]。有研究指出，T2DM 患者体内产生胰岛素的能力并未完全丧失，部分患者体内胰岛素水平过高[2]，但其胰岛素作用效果较差，患者表现为胰岛素抵抗或胰岛素分泌相对不足等情况[3]。目前已有研究指出，巨细胞病毒感染与1 型糖尿病存在一定相关性[4]，但巨细胞病毒感染与T2DM 的相关性还未得到证实。基于此，本研究探究活动性巨细胞病毒感染DNA 载量与T2DM 患者T 淋巴细胞亚群的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2019年10月至2020年5月萍乡市人民医院收治的80 例T2DM 患者的临床资料，按照活动性巨细胞病毒感染情况将其分为观察组（巨细胞病毒感染阳性，n=18）和对照组（巨细胞病毒感染阴性，n=62）。观察组中，男10 例，女8 例；年龄25～83 岁，平均（53.72±18.54）岁；病程7～24 个月，平均（15.63±6.24）个月。对照组中，男35 例，女27 例；年龄26～80岁，平均（45.69±16.33）岁；病程9～24 个月，平均（14.18±6.77）个月。两组的一般资料比较，差异有统计学意义（P＜0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准。纳入标准：①符合T2DM 诊断标准[5]；②临床资料完整；③均进行巨细胞病毒DNA、T 淋巴细胞亚群、胰岛功能相关检查。排除标准：①严重器质性病变者；②长期服用免疫抑制剂者；③恶性肿瘤者；④免疫功能缺陷者。

1.2 方法

巨细胞病毒DNA 载量检测[6]：应用荧光定量PCR方法检测尿HCMV DNA，严格按试剂盒说明书操作，PCR 试剂盒为中山大学达安基因股份有限公司产品，PCR 扩增反应在ABI VIIA7 PCR 仪上进行，当其样本浓度≤500 拷贝数/ml 时判定为巨细胞病毒感染阴性，＞500 拷贝数/ml 时判定为巨细胞病毒感染阳性。

T 淋巴细胞亚群检测：抽取患者空腹静脉血5 ml，使用以1500 r/min，离心半径15 cm，离心10 min，去除上层清液，采用梯度离心法分离淋巴细胞，并制成悬液，使用贝克曼库尔特商贸有限公司生产的Gallios流式细胞仪检测CD4+T 淋巴细胞、CD8+T 淋巴细胞含量，并计算CD4+/CD8+比值。

胰岛功能检测：抽取患者空腹静脉血5 ml，使用以1500 r/min 离心10 min，收集血清，离心半径15 cm，使用默沙克生物酶联免疫试剂盒测量空腹C 肽（fasting C-peptide，FCP）、餐后2 小时C 肽（fasting 2 h Cpeptide，F2CP）水平。

1.3 观察指标

比较两组T淋巴细胞亚群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）、胰岛功能（FCP、F2CP）水平，分析活动性巨细胞病毒感染DNA 载量与T 淋巴细胞亚群水平和胰岛功能的相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，组间比较用t 检验；计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，采用Pearson 相关分析模型分析相关性，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组T 淋巴细胞亚群的比较

观察组的CD4+、CD4+/CD8+低于对照组（P＜0.05），CD8+高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 两组T 淋巴细胞亚群的比较（±s）

表1 两组T 淋巴细胞亚群的比较（±s）

观察组对照组t 值P 值18 62 35.31±2.63 37.26±3.17 2.379 0.019 29.81±5.42 27.14±3.99 2.296 0.024 1.18±0.32 1.37±0.31 2.273 0.025组别 例数 CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+

2.2 两组胰岛功能的比较

观察组的FCP、F2CP 水平低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2 两组胰岛功能的比较（ng/ml，±s）

表2 两组胰岛功能的比较（ng/ml，±s）

观察组对照组t 值P 值18 62 1.21±1.36 2.05±1.76 5.234＜0.001 2.18±1.47 2.76±2.53 2.336 0.022组别 例数 FCP F2CP

2.3 巨细胞病毒感染DNA 载量与T 淋巴细胞亚群水平和胰岛功能的相关性分析

巨细胞病毒感染DNA 载量与CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈负相关，与CD8+水平呈正相关（P＜0.05）（表3）。

表3 巨细胞病毒感染DNA 载量与T 淋巴细胞亚群水平和胰岛功能的相关性分析

3 讨论

大量研究表明，1 型糖尿病的发生发展与巨细胞病毒感染有极为密切的联系，病毒感染可直接或间接攻击胰岛细胞，导致胰岛细胞分泌胰岛素功能下降[7]。但与1 型糖尿病胰岛β 细胞严重受损不同，T2DM 胰岛细胞功能尚存，二者发病机制存在一定差异，病毒感染对T2DM 的作用有待考证。

巨细胞病毒为线性双链DNA 病毒，在人类中普遍易感，能对新生儿及免疫机能低下个体造成较为严重的并发症，且经原发感染后，病毒会长期潜伏于体内[8]。T 淋巴细胞亚群主要为CD4+和CD8+细胞，当病毒侵犯机体时，CD4+、CD8+细胞相互作用，发挥特异性免疫，抵抗病毒感染[9]。本次研究中，巨细胞病毒感染阳性患者CD4+细胞水平、CD4+/CD8+低于阴性患者，CD8+细胞水平高于阴性患者，差异有统计学意义（P＜0.05），提示巨细胞病毒激活状态会加重T2DM 患者机体免疫功能失衡，这与曹洁等[10]所研究结论相类似，其原因可能是巨细胞病毒基因复制活跃，患者体内发生免疫应答反应，在病毒抗原识别过程中，CD8+细胞大量复制，CD4+细胞大量消耗，从而引起T 淋巴细胞亚群数量发生变化。

巨细胞病毒感染会导致机体免疫失衡，免疫细胞分泌白介素-6、肿瘤坏死因子等因子，诱导机体发生胰岛素抵抗作用，降低胰岛素敏感性[11]。本研究结果显示巨细胞病毒感染阳性患者FCP、F2CP 水平低于阴性患者，差异有统计学意义（P＜0.05），提示巨细胞病毒会影响FCP、F2CP 水平，这与王柳明等[12]所研究结论相类似，其原因可能是巨细胞病毒感染胰岛β 细胞，并在胰岛β 细胞中潜伏、复制和增殖，其合成的蛋白质会引起胰岛β 细胞凋亡，同时巨细胞病毒感染胰岛β 细胞后通过交叉免疫作用引起特异性T 细胞产生抗体，这种抗体能够攻击胰岛β 细胞，造成胰岛β细胞损伤，并且在巨细胞病毒感染胰岛β 细胞后，会引起淋巴B 细胞、粒细胞、单核细胞富集，形成炎症微环境，释放出的细胞因子，会引起胰岛β 细胞功能失调，从而影响患者胰岛功能[13]。

本研究结果显示，巨细胞病毒感染DNA 载量与CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈负相关，与CD8+水平呈正相关（P＜0.05），提示T2DM 患者巨细胞病毒越活跃，患者免疫功能和胰岛功能越受影响，与刘春梅等[14]所研究结论相类似，这说明当T2DM 患者感染巨细胞病毒后，巨细胞病毒能通过直接损伤胰岛β 细胞和长期病毒感染导致患者自身免疫失衡，并影响其胰岛β 细胞正常功能，造成患者体内胰岛素分泌含量减少，加重T2DM 患者病情[15-16]。

综上所述，活动性巨细胞病毒感染DNA 载量与T2DM 患者CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈负相关，与CD8+水平呈正相关，故采取有效措施抑制患者免疫失衡状态，对治疗巨细胞病毒感染有利。