实时荧光人乳头瘤病毒检测联合液基薄层细胞学检查在宫颈癌筛查中的应用价值

罗轶硕

江西省赣州市章贡区妇幼保健院 (江西赣州 341000)

宫颈癌是临床常发的妇科恶性肿瘤，一旦发病，将严重威胁女性的生命安全。该病发病是一个渐进的过程，从感染人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)到进展为宫颈癌可能需要8～10年甚至更长的时间，因此，采取有效的措施及早筛查宫颈癌及癌前病变对防治宫颈癌具有重要的意义。液基薄层细胞学检查(thin prep cytologic test，TCT)是利用液基薄层细胞检测系统对宫颈细胞进行细胞学分类，从而诊断宫颈癌及癌前病变的一项检查技术，已被应用于宫颈癌的临床筛查中[1]。但经临床实践发现，单一实施TCT筛查宫颈癌仍存在漏诊及误诊风险，需联合其他检查方法以提升筛查价值。有研究表明，持续感染HPV是引起宫颈病变的重要原因，采取实时荧光HPV检测可准确检测HPV感染情况，可辅助诊断宫颈癌[2]。基于此，本研究分析实时荧光HPV检测与TCT联合筛查宫颈癌的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月至2020年12月于我院行宫颈癌筛查的1 600例患者作为研究对象，年龄25～64岁，平均(45.31±4.33)岁；体质量指数(body mass index，BMI)19～28 kg/m2，平均(23.07±0.56)kg/m2；未婚725例，已婚875例。本研究方案通过江西省赣州市章贡区妇幼保健院医学伦理委员会审核批准。纳入标准：有性生活史；有完整子宫；月经干净5 d后，经影像学检查明确存在宫颈病变。排除标准：近期有宫颈病变药物治疗史；48 h内有性生活及阴道操作；近1周内有阴道用药、物理治疗史；近3个月内有急性生殖道炎症、宫颈手术及盆腔治疗史；半年内接受过免疫调节剂或免疫抑制剂相关治疗。

1.2 方法

所有受检者均先行TCT操作，即利用一次性宫颈刷采集受检者宫颈外口、宫颈管处脱落细胞，然后将其置于甲醛保存液中进行多次漂洗操作，将漂洗后的脱落细胞置于全自动制片机中实施人工制片操作，处理后予以人工巴氏染色，并使用光学显微镜进行观察，参考伯塞斯达(The Bethesda System，TBS)分级[3]标准诊断宫颈癌发生情况；在完成TCT后，对受检者实施实时荧光HPV检测，即利用一次性宫颈刷采集受检者宫颈外口、宫颈管处脱落的细胞，将其置于细胞存储液中，在1.5 ml离心管中置入洗脱液，使用美国贝克曼公司提供的TG16-WS型离心机以3 000 r/min的离心速率、15 cm的离心半径离心处理10 min，采集沉积的细胞放于裂解液中，使用罗氏Roche公司生产的cobas4800系统自动进行细胞裂解、DNA提取与纯化等操作，然后使用美国BioRad伯乐公司提供的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)仪进行基因扩增操作，扩增条件为50 ℃下反应2 min，经94 ℃变性2 min后进入循环，循环温度及时间分别为93 ℃、15 s，50 ℃、90 s，共进行40个循环，在50 ℃时检测标本荧光信号，确定HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73、HPV82感染情况，1种HPV-DNA≥1.0 ng/L即为阳性；最后实施阴道镜宫颈活检，并以此检查结果为诊断金标准。

1.3 评价指标

将阴道镜宫颈活检结果作为诊断金标准，对TCT联合实时荧光HPV检测筛查宫颈癌的价值进行分析。

1.4 统计学处理

采用SPSS 24.0统计软件进行数据分析，计数资料以率表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 阴道镜宫颈活检结果

1 600例行宫颈癌筛查的患者，经阴道镜宫颈活检明确49例(3.06%)为宫颈癌。

2.2 TCT、实时荧光HPV检测单一及联合筛查宫颈癌的价值

以阴道镜宫颈活检结果为金标准，TCT联合实时荧光HPV检测筛查宫颈癌的准确度、灵敏度、特异度均高于TCT、实时荧光HPV检测单一筛查，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1～4。

表1 TCT筛查宫颈癌结果(例)

表2 实时荧光HPV检测筛查宫颈癌结果(例)

表3 TCT联合实时荧光HPV检测筛查宫颈癌结果(例)

表4 TCT、实时荧光HPV检测单独及联合筛查宫颈癌的效能比较(%)

3 讨论

阴道镜宫颈活检是筛查宫颈癌的金标准，虽诊断准确度较高，但其属于创伤性操作，可引起感染、出血等并发症，应用于临床筛查具有一定的局限性，因此，寻求一种准确、无创的检查方法辅助筛查宫颈癌十分必要。TCT是以脱落细胞制片技术为基础的检测方法，是诊断宫颈细胞是否存在病变的重要方法[4]。其只需收集较少的样本细胞便可呈现较清晰的结构图像，通过分析细胞核的异型、细胞质的形态或染色情况便可有效评估上皮细胞的病变程度，进而筛查宫颈癌[5]；但在取样过程中，仍有漏取病变处宫颈上皮细胞的风险，且在对细胞形态特征进行观察时，检查者的主观判断也会影响TCT诊断宫颈癌的准确度[6]。有研究表明，持续感染高危型HPV是导致宫颈癌的独立危险因素，定性及定量分析HPV感染情况可辅助筛查宫颈癌[7]。

本研究结果显示，以阴道镜宫颈活检结果为金标准，TCT联合实时荧光HPV检测筛查宫颈癌的准确度、灵敏度、特异度均高于TCT、实时荧光HPV检测单一筛查，差异有统计学意义(P<0.05)。经分析，其原因为，实时荧光HPV检测是基于PCR技术发展而来的新型核酸检测技术，可通过计算机控制实时动态检测PCR扩增产物，并可自动给出结果，且无需对PCR进行后处理，可定性及定量分析HPV感染情况，通过实时荧光HPV检测可评估宫颈上皮细胞HPV-DNA的扩增情况，直观反映宫颈上皮细胞病毒种类及病毒载量，辅助筛查宫颈癌[8]，但该检测方法无法准确提供病毒活动度与整合度的有关信息，且针对一过性HPV感染患者临床检测的准确度欠佳；联合TCT，可优势互补，进而提高筛查的准确度、灵敏度、特异度。

综上所述，TCT联合实时荧光HPV检测筛查宫颈癌的效能均高于单一诊断，具有较高的诊断价值。