液质联用法同时测定葡萄酒中的3种甜味剂

2021-11-24◎肖丹

现代食品 2021年19期

◎ 肖丹

（宁夏建投设计研究总院（有限公司），宁夏银川 750001）

甜味剂是指能赋予软饮料甜味的食品添加剂[1]。随着甜味剂种类不断更新和应用范围的扩大，甜味剂使用后各种问题也开始逐渐显现。甜蜜素，化学名称为环己基氨基磺酸钠；安赛蜜，化学名称为乙酰磺胺酸钾；糖精钠，化学名称为邻苯甲酰磺酰亚胺钠，是常用的3种甜味剂。《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）中对每类食品中甜味剂（以环己基氨基磺酸计）的最大使用量有明确规定，而《葡萄酒》（GB 15037—2006）里规定，葡萄酒不得添加甜味剂[2]。

超高效液相色谱-串联质谱法由于其灵敏度高、选择性好，定量准确。适用于对葡萄酒中3种合成甜味剂同时进行分析[3]。本方法采用超高效液相色谱-串联质谱仪，建立一种可同时测定葡萄酒中3种合成甜味剂的分析方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）（美国Waters公司）；METTLETOLEDO ME204电子天平；超纯水系统（成都唐氏康宁科技发展有限公司）；KQ5200B台式超声波清洗机（江苏昆山市超声仪器有限公司）；微型旋涡混合器（上海跃进医疗器械厂）。

试剂：甲醇、甲酸、乙酸铵，色谱纯；安赛蜜标准溶液、甜蜜素、糖精钠，均为1.0 mg·mL-1。

样品：葡萄酒，宁夏紫尚葡萄酿酒股份有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；动相：A-10 mmol·L-1乙酸铵，B-甲醇，进样体积：10 μL；流速：0.15 mL·min-1；柱温：35 ℃；流梯度洗脱条件如表1所示。

表1 流动相梯度洗脱条件表

1.2.2 质谱条件

离子源：电喷雾离子源，负离子模式（ESI-）；毛细管电压（IS）：-3.50 kV；脱溶剂气温度（TEM）：500 ℃；脱溶剂气体流速：1 000 L·Hr-1；离子源温度：150 ℃；扫描模式：多反应监测（MRM）；3种目标化合物的MRM参数见表2。

表2 3种添加剂的MRM参数表

1.2.3 标准曲线的配制

标准储备液：10.0 μg·mL-1储备液，于4 ℃冰箱中保存。

混合标准溶液：配制安赛蜜、甜蜜素、糖精钠1 μg·mL-1混合标准溶液，于4 ℃冰箱中保存。

混合标准工作液：配制成系列混合标准工作液分别为1 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1，现配现用。

1.2.4 样品处理

移取葡萄酒样品1.00 mL于10 mL容量瓶中，用超纯水稀释定容至刻度，混匀，过0.22 μm水相微孔滤膜后，直接上机进样分析。

2 结果与分析

2.1 仪器条件的优化

2.1.1 质谱条件的优化

通过质谱端口A/B瓶直接进入质谱进行检测优化，调谐液为厂家规定200～500 μg·L-1[5]，配制3种单化合物调谐液分别为500 μg·L-1，通过手动调谐方式进行条件优化，此方法耗时短，优化精确符合性强，先进行母离子优化确定脱溶剂气温度及脱溶剂气流速、锥孔电压后所得的3种甜味剂质谱参数见表2，利用仪器的自动优化功能得到其他离子源参数见1.2.2质谱条件。

2.1.2 色谱条件的优化

本试验通过对液相端进行条件优化，对pH值及溶剂效应进行考虑，分别选取水相0.1%甲酸水溶液、10 mmol·L-1乙酸铵溶液，有机相甲醇、乙腈相。水相0.1%甲酸水溶液对色谱柱极性影响较低，10 mmol·L-1乙酸铵溶液为缓冲盐溶液，流速过高导致压力升高，易产生色谱柱堵塞，对实验结果影响较大，有机相甲醇毒性且极性相对乙腈而言较低，结果表明选取水相0.1%甲酸水溶液、有机相甲醇。