两种冷沉淀凝血因子制备方法的比较

赵艳梅 李丹慧 祝凯捷

冷沉淀凝血因子是采用特定的方法将保存期限内的新鲜冰冻血浆在1～6℃的密闭条件下融化后,分离出大部分血浆,并将剩余的冷不溶解物质在1 h 内速冻呈固态的成分血［1］。冷沉淀的功能是用来补充Ⅷ因子、因子、血管性血友病因子(vWF)、Fgb 和纤维结合蛋白,主要适用于Fgb 缺乏引起的出血,也可用于无特异性浓缩制剂使用时的Ⅷ因子缺乏症、因子缺乏症、血管性血友病、纤维蛋白异常及Fgb 缺乏症；也可用于大量输血、DIC 以及其他治疗方法无效的尿毒症出血［2］。随着临床输血技术的不断发展,冷沉淀制品已经在临床多个学科中应用,其临床价值愈显重要,其临床使用量呈现明显增多趋势［3-6］。手工制备冷沉淀凝血因子在融化、分离、称重、热合、工作效率的个体差异等诸多环节存在无法控制的人为因素,易造成冷沉淀凝血因子制备过程冷链不稳定和时间链过长,从而导致冷沉淀凝血因子质量不符合标准［7］。2017 年本站引进了ZBK-LCD-A1 型冷沉淀凝血因子制备仪,采用全自动水浴融化虹吸法制备冷沉淀凝血因子,与2～6 ℃储血冷藏箱过夜融化离心法进行分析比较,现将情况报告如下。

1 材料与方法

1.1材料 选取本血站于2017 年6 月～2020 年4 月,用400 ml 去白细胞采血袋采集的符合《献血者健康检查要求》的400 ml 全血244 袋,按照新鲜冰冻血浆制备操作规程制备而成。将新鲜冰冻血浆随机分为冷藏箱过夜融化离心法组与全自动水浴融化虹吸法组,各122 袋。

1.2方法

1.2.1试剂与仪器 F Ⅷ因子(批号/效期：N0972303/201910),活化部分凝血活酶时间(APTT)液体试剂(批号/效期：N0972597/201909),CaCl2(批号/效期：N0972432/201909),凝血酶试剂(批号/效期：N1072925/201910)；质控品(批号/效期：N0972598/202009),以上试剂由Instrumentation Laboratory Company 提供,均在有效期内使用。2～6℃储血冷藏箱(青岛海尔,HXC-936)、冷沉淀凝血因子制备仪(山东中保康医疗器具有限公司,ZBK-LCD-A1 型),全自动血凝分析仪(Instrumentation Laboratory Company,ACL ELITE PRO,美国)。

1.2.2冷藏箱过夜融化离心法制备冷沉淀 将新鲜冰冻血浆置2～6℃储血冷藏箱过夜融化。当血浆基本融化时,在离心力为4303 g、4℃的条件下离心10 min。将大部分上层冷上清移至空袋,将留下的30～40 ml 血浆与沉淀物混合,制成冷沉淀凝血因子。

1.2.3全自动水浴融化虹吸法制备冷沉淀 使用前设置制备仪水浴温度5℃和开机时间。将新鲜冰冻血浆袋置于冷沉淀凝血因子制备仪的水浴装置中,另一空袋悬于水浴装置外,位置低于血浆袋,两袋之间形成的高度落差约20 cm。血浆融化后随时被虹吸至空袋中,当融化至剩下40～50 ml 血浆与沉淀物时仪器自动闭合导管,阻断虹吸。将血浆与沉淀物混合,制成冷沉淀凝血因子。

1.2.4检测 用全自动血凝分析仪检测凝血因子Ⅷ活性(F Ⅷ ∶C) 和Fgb 浓度,分别乘以其容量得Ⅷ因子含量和Fgb 含量。

1.3观察指标 观察比较两组冷沉淀凝血因子的F Ⅷ、Fgb 含量及合格率。

1.4统计学方法 采用SPSS26.0 统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差()表示,采用t检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P<0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

全自动水浴融化虹吸法组F Ⅷ含量高于冷藏箱过夜融化离心法组,Fgb 含量低于冷藏箱过夜融化离心法组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组F Ⅷ、Fgb 合格率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组冷沉淀凝血因子的F Ⅷ、Fgb 含量及合格率比较［,n(%)］

表1 两组冷沉淀凝血因子的F Ⅷ、Fgb 含量及合格率比较［,n(%)］

注：与冷藏箱过夜融化离心法比较,aP<0.05

3 讨论

目前临床已广泛应用成分输血,其中冷沉淀凝血因子为常用成分血。冷沉淀内含凝血成分较多,可有效治疗甲型血友病、血管性血友病及先天性或获得性Fgb 缺乏症等,还可有效预防血友病手术出血情况。因此,冷沉淀制备自采集至临床输注均需最大程度减少活性凝血成分,以免破坏Fgb、凝血因子F Ⅷ。其中,Fgb 较为稳定,为凝血过程中具备蛋白水解活性的一连串凝血因子相继激活的最终底物,即凝血酶形成作用于Fgb 使其转为纤维蛋白,其含量升高可改变血小板聚集情况,还可经多种方式结合生物组织,起到止血、填充作用。凝血因子F Ⅷ即抗血友病球蛋白,为冷沉淀内最主要凝血因子,主要功能为参与因子Ⅸa 对因子X 的激活,进而促使凝血酶原转为凝血酶,使纤维蛋白经交联成为稳固血栓而起到止血作用,其较不稳定,半衰期约为8～12 h,较易失活,即含量可随制备时间延长而不断降低,有数据统计显示,制备时间在12 h 其含量可减少约40%,制备时间在24 h 其含量可减少约42%,因此在制备时更需要注意制备方法的选择,以提高凝血因子F Ⅷ含量与合格率。

本文结果显示,全自动水浴融化虹吸法制备冷沉淀凝血因子的Ⅷ因子含量高于冷藏箱过夜融化离心法,其含量提高了32.5%,而Fgb 含量却降低了17.0%。分析其原因,冷沉淀从开始制备到速冻成固态,采用冷藏箱过夜融化离心法制备冷沉淀大约要18～19 h,全自动水浴融化虹吸法制备时间大约为1.5 h,两种方法的制备时间相差约17 h。Ⅷ因子为不稳定的凝血因子,其活性极易衰减,有文献报道,体外4℃条件下保存,24 h 衰减情况从33.3%～58.1%［8,9］。Fgb 为稳定的凝血因子,在1～6℃以不溶物状态存在时其含量受制备时间的影响小,而受分离方法的影响大。王飞等［7］研究显示在相同的水浴融化条件下,离心法制备的Fgb 含量比虹吸法提高了20.0%。

全自动水浴融化虹吸法的特点为［10］：①可预约开机时间,自动注水、排水,制备时间短；②每个袋子均有称重盒智能称重,制备效率高,冷链稳定,冷沉淀凝血因子容量变异系数小；③制备过程信息化,可追溯。冷藏箱过夜融化离心法的特点为：①可批量制备,但制备的冷沉淀凝血因子的质量受冷链、时间链、分离、称重、工作效率、工作人员业务素质等因素影响而不稳定；②冷沉淀凝血因子容量变异系数大；③制备过程只有离心部分信息化。此外,在行冷沉淀凝血因子制备时还需要注意以下几点,即：确保静脉穿刺顺利,整个采血过程快且无误,以便血液及抗凝剂尽早充分混合,从而确保冷沉淀内F Ⅷ呈高度活性状态。同时,在完成血液采集后,应立即存储至冰箱,并经专用血液运输箱运输血液,行制备时须以低温工作台进行操作,确保血液采集后存储、运输及制备均处于2～8℃下,以防凝血因子降解而影响成分血质量。此外,应于4～6 h内完成新鲜冰冻血浆制备,且宜越短越好,以提高F Ⅷ因子回收率。行冷沉淀凝血因子制备时应确保新鲜冰冻血浆澄清、无异常颜色、无蛋白、乳糜析出等。本站从2018 年1 月开始使用冷沉淀凝血因子制备仪至今,仪器运行性能和稳定性方面表现为偶尔出现血浆融化后虹吸速度过快或不虹吸。

综上所述,全自动冷沉淀凝血因子制备仪制备冷沉淀具有便捷、高效、冷链稳定、时间链短、可信息化等特点,但是制备仪的性能、稳定性有待提高。冷沉淀凝血因子的质量受影响因素较多,除了配备更专业的设备外,还需要有完善的流程,工作人员需具备较强的业务素质,严格执行操作规程,才能制备出高质量的冷沉淀凝血因子。