血清MMP-3在RA诊断中的应用价值研究*

姚晓阳，蒋秀娣△，李志兰，薛 苗，杨哲军

1.上海中医药大学附属第七人民医院医学检验科，上海 200137；2.上海市长海医院检验科，上海 200433；3.上海市浦东新区高行社区卫生服务中心检验科,上海 200137

类风湿关节炎(RA)的发生率较高，在各个年龄段均可发生，病情严重者会造成终生残疾[1-2]。RA患者早期无明显临床特征，而抗环瓜氨酸多肽抗体(抗CCP抗体)、类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)等常规诊断指标仍存在灵敏度或者特异度低的问题，因此亟待发现能提升RA诊断准确率的指标。RA会产生基质金属蛋白酶-3(MMP-3)，MMP-3水平与RA活动性存在密切关联，MMP-3参与炎性反应过程并且造成关节损伤[3-5]。本研究旨在分析血清MMP-3与传统指标联合使用对RA诊断的影响，为RA的临床诊断优化提供思路。

1 资料与方法

1.1一般资料 在2019年10月至2020年10月上海市长海医院接收的RA确诊患者中随机抽取259例RA患者以及同期46例骨关节炎(OA)确诊患者为研究对象展开研究。所有抽取的RA患者中男208例，女51例；年龄34～45岁，平均(41.22±3.32)岁；病程为6～15 d，平均(9.13±1.20)d；吸烟198例；合并糖尿病123例。OA患者中男35例，女11例；年龄35～46岁，平均(41.25±3.31)岁；病程为6～17 d，平均(9.11±1.18)d；吸烟38例；合并糖尿病24例。

纳入标准：(1)RA患者符合《2018中国类风湿关节炎诊疗指南》[6]中的相关诊断标准，OA患者符合 《骨关节炎诊疗指南(2018年版)》[7]中的相关诊断标准，并且RA、OA患者的临床特征以及实验室指标检查结果与诊断标准相符，确诊为RA或者OA；(2)年龄不低于16岁；(3)了解本研究各个环节的操作与意义，已与家属一起签署同意书；(4)具备完整的临床数据，不会影响研究数据数据完整性；(5)无精神疾病，可准确反馈自身感受与相关信息。排除标准：(1)心脏、肝脏、肾脏等重要脏器以及神经系统出现明显的功能障碍或者衰退问题；(2)正在进行肿瘤相关治疗；(3)下肢偏瘫；(4)膝关节曾受过外伤或者进行过手术治疗；(5)膝骨关节发育异常；(6)存在沟通障碍，不能与医护人员进行有效沟通；(7)除本研究外还参与其他研究、试验。

1.2方法 针对抗CCP抗体、RF指标制订单独诊断RA与联合诊断RA的临床方案，具体分别为抗CCP抗体、RF、RF+MMP-3、RF+抗CCP抗体、抗CCP抗体+MMP-3、RF+抗CCP抗体+MMP-3。

应用日立全自动生化分析仪(LABOSPECT 008 AS)检测血清MMP-3水平，方法为胶乳增强免疫比浊法，试剂购自上海惠中生物科技有限公司。采用上海科新生物技术股份有限公司生产的试剂盒测定血清抗CCP抗体水平，方法为间接ELISA法。应用特定蛋白检测仪(IMMAGE800)检测血清RF水平，方法为速率散射免疫比浊法，试剂购自Beckman Coulter公司。

1.3观察指标 参考临床诊断，比较RF、抗CCP抗体、RF+MMP-3、RF+抗CCP抗体、抗CCP抗体+MMP-3、RF+抗CCP抗体+MMP-3检测诊断RA的准确率。

1.4统计学处理 应用SPSS22.0进行数据分析。计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验；绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)并应用曲线下面积(AUC)、95%CI评估MMP-3及其他指标在RA中的诊断价值。采用Fisher确切概率法计算各指标诊断RA的灵敏度、特异度。采用双尾检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1不同检测方案在RA、OA中的检出情况对比 RF单独检测诊断RA、OA的准确率高于抗CCP抗体单独检测，但差异无统计学意义(P>0.05)；抗CCP抗体单独检测与抗CCP抗体+MMP-3联合检测诊断RA、OA的准确率一致，差异无统计学意义(P>0.05)；相比于RF单独检测，RF+MMP-3联合检测诊断RA、OA的准确率更高，差异有统计学意义(P<0.05)；相比于RF+抗CCP抗体联合检测，RF+抗CCP抗体+MMP-3联合检测诊断RA、OA的准确率明显更高，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1、2。

表1 不同检测方案在RA、OA诊断中的检出情况(n)

续表1 不同检测方案在RA、OA诊断中的检出情况(n)

2.2不同检测方案诊断RA的临床效能分析 与抗CCP抗体单独检测相比，抗CCP抗体+MMP-3联合检测的特异度与AUC均明显更高(P<0.05)；与RF+抗CCP抗体联合检测相比，RF+抗CCP抗体+MMP-3联合检测的灵敏度、特异度与AUC均明显更高(P<0.05)。见表3。

表2 不同检测方案在RA、OA诊断中的准确性

表3 RF、抗CCP抗体、MMP-3单项及联合检测诊断RA的效能分析

3 讨 论

RA可能会破坏患者的关节，增加患者发生关节畸形的风险，对患者的生活以及身体健康造成严重影响[8-9]。因此应用更敏感、精准的指标诊断RA对患者及时确诊、治疗以及控制病情具有重要意义。李昊隆等[10]研究指出，RA及早诊断是临床的热点研究方向。临床诊断指标研究案例较多，先后发现了多个在RA诊断中具有良好诊断效能的指标，例如RF、抗CCP抗体、抗突变性瓜氨酸波形蛋白(抗MCV)抗体、抗氨基甲酰化蛋白(CarP)抗体[11]等。

软骨细胞、成纤维样滑膜细胞是MMP-3的主要表达场所。MMP-3可对细胞外基质(ECM)成分的蛋白酶进行降解，参与患者炎性反应、血管生成、创面愈合以及肿瘤发生、发展等病理生理过程[12]。刘梦珂等[13]研究表明MMP-3能够破坏胶原，同时使关节软骨降解，与肾脏疾病、心血管疾病、肿瘤以及RA等多种疾病有关，但相关临床实验尚未获取明确性进展。杨勇等[14]研究指出，相比于健康对照组，RA轻度活动期组的血清MMP-3水平明显升高，该组MMP-3的AUC为0.906，轻度活动期RA患者应用MMP-3诊断的灵敏度、特异度均超过75.00%，而MMP-3诊断RA稳定期的AUC仅有0.644，说明RA轻度活动期以上患者应用血清MMP-3诊断具有较好的诊断效能。该研究数据说明RA患者中MMP-3阳性者具有更高的DAS28评分，血清MMP-3水平与红细胞沉降率(ESR)、CRP、DAS28存在密切关联，学者得出的结论是可将MMP-3作为RA临床评估的新指标，有助于减轻医务工作者的负担。MMP-3已成为RA诊断的临床热点研究方向。

唐笛娇等[15]研究后指出RF是临床诊断RA的最早抗体类型，具有较高的诊断灵敏度。本研究结果显示常用的RA诊断指标中，RF单独检测诊断RA、OA的准确率高于抗CCP抗体单独检测，但差异无统计学意义(P>0.05)，说明RA患者诊断中应用RF定量检测方案具有较高的诊断参考价值，与以上报道的结论一致。但是RF诊断RA的不足在于缺乏一定的特异性，并且RF诊断RA时极易受到干燥综合征、肺疾病以及感染性疾病的影响，从而造成假阳性率、误诊率、漏诊率上升，因此单独检测RF在RA临床早期诊断中仍存在不足。相比于RF单独检测，RF+MMP-3联合检测诊断RA、OA的准确率的诊断效能更高，差异有统计学意义(P<0.05)。说明在检测RF的基础上增加MMP-3进行联合检测，可提升RA诊断的灵敏度，有利于发现更多的患者并尽早进行干预。

血清瓜氨酸是人工合成CCP的主要来源。相比于应用RF诊断RA，抗CCP抗体诊断的灵敏度明显更高，由此可知抗CCP抗体在早期RA病情诊断中具有较高的参考价值[11,16]。彭力阳等[17]研究显示，RA组的血清NO、MMP-3以及关节液NO、MMP-3水平高于OA组，并且ROC曲线结果显示联合检测血清和关节液中的NO、MMP-3及结合MRI所获得的诊断效能明显高于单独应用各检查指标。本研究结果中，相比于抗CCP抗体单独检测，抗CCP抗体+MMP-3联合检测诊断RA的AUC明显更高，与以上研究结论相符，说明在抗CCP抗体单独检测基础上联合MMP-3可有效提高临床诊断效能，有助于准确、有效鉴别诊断RA、OA。而本研究结果中，抗CCP抗体单独检测与抗CCP抗体+MMP-3检测诊断RA、OA的准确率一致，差异无统计学意义(P>0.05)，与以上研究结论存在较大差异，可能是因为研究样本量纳入较少以及RA、OA病例样本差异较大有关，后续应进一步扩大样本量进行深入研究。

孙艳艳等[18]研究中指出，虽然应用抗CCP抗体和RF诊断RA具有较高的灵敏度，但不能完全反映人体的炎症状态和疾病活动情况。本研究结果显示，RF+抗CCP抗体+MMP-3联合检测诊断RA的诊断效能及诊断RA、OA的准确率均明显高于RF+抗CCP抗体联合检测，与以上研究结论相符，可以说明在RF+抗CCP抗体联合检测基础上辅助应用MMP-3，可有效提升RA、OA诊断的准确率与灵敏度。其原因可能是MMP-3可作为RA的活动性判断标志物，对RA患者骨骼系统的受累情况进行评估，有利于进行早期RA诊断和治疗监测，能弥补抗CCP抗体和RF无法反映炎症状态的缺陷，因此应用MMP-3在RA的辅助早期诊断中的价值越来越明显。

总之，在抗CCP抗体、RF传统指标联合诊断RA的基础上辅助使用MMP-3，可以提升临床诊断的准确率与诊断效能，值得临床推广应用。