TRPM7和GATA6蛋白在卵巢浆液性腺癌中的表达及意义*

刘 怡，奚 卫，许 鹏，谈宗国，薛佩佩△

1.重庆市人口和计划生育科学技术研究院/国家卫生计生委出生缺陷与生殖健康重点实验室，重庆 400020；2.重庆大学附属三峡医院，重庆 404000

卵巢癌是一种常见的恶性肿瘤，多发于不孕不育、有家族史及绝经后女性。近年来，对卵巢癌的发病机制及诊断治疗已有较多研究，但由于人口基数大，以及生活环境、生活压力等改变，卵巢癌发病率和病死率仍保持较高水平[1]，其中卵巢浆液性腺癌是卵巢癌中最常见的组织学类型[2]。探讨新的卵巢浆液性腺癌生物标志物对提高治疗效果及改善患者预后有重要意义。LEE等[3]研究报道，膀胱癌组织中瞬时受体电位M7通道(TRPM7)蛋白表达明显高于癌旁组织，与患者复发、肿瘤转移等预后显著相关，TRPM7下调在膀胱癌细胞凋亡中起重要作用。DENG等[4]研究发现，GATA结合蛋白6(GATA6)在胆管癌中高表达，可促进癌细胞转移，与肿瘤淋巴结转移和远处转移有关。由于TRPM7与GATA6在卵巢浆液性腺癌中表达水平及相关性研究鲜有报道，本研究通过检测卵巢浆液性腺癌组织中TRPM7与GATA6蛋白表达水平，并分析二者的相关性，探讨二者在卵巢浆液性腺癌进展中的意义，以期为临床提高患者生存率提供一定的帮助。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2012年3月至2015年7月重庆大学附属三峡医院收治的卵巢浆液性腺癌患者79例为卵巢浆液性腺癌组，患者年龄33～75岁，平均(50.36±16.32)岁。根据国际妇产科联盟(FIGO)分期标准[5]，将入组卵巢浆液性腺癌患者分为Ⅰ～Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期48例；根据病理分级分为低级别27例，高级别52例；根据是否发生大网膜转移分为无大网膜转移33例，有大网膜转移46例；根据是否发生淋巴结转移分为无淋巴结转移31例，有淋巴结转移48例；根据是否发生远处转移分为无远处转移60例，有远处转移19例。纳入标准：(1)经病理组织切片及临床检查，确诊为卵巢浆液性腺癌；(2)临床及随访资料完整。排除标准：(1)继发性肿瘤患者；(2)合并患有其他部位肿瘤者；(3)心、肾、肝脏功能严重不足及精神疾病患者。另选取同期因子宫肌瘤或子宫腺肌病行子宫及卵巢切除术的患者56例为对照组，经病理切片证实无癌变。对照组年龄32～73岁，平均(49.82±14.73)岁。两组年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经重庆大学附属三峡医院伦理委员会批准同意。所有患者及家属均签署知情同意书。

1.2主要试剂与仪器 免疫组织化学染色试剂盒(货号：GMS80101.2，美国Genmed公司)；鼠抗人TRPM7多克隆抗体、鼠抗人GATA6多克隆抗体(货号：H00054822-A01、H00047627-A09，台湾Abnova公司)；羊抗鼠IgG二抗(货号：170-6516，深圳市安提生物科技有限公司)；光学显微镜(型号：DMI3000，德国徕卡公司)。

1.3方法

1.3.1标本采集 分别于术中收集卵巢浆液性腺癌组患者癌组织和对照组正常卵巢组织，经10%甲醛溶液固定后常规石蜡包埋，制成4 μm厚切片，备用。

1.3.2组织中TRPM7和GATA6蛋白表达水平检测 采用免疫组织化学染色法检测组织中TRPM7和GATA6蛋白表达水平。严格按照免疫组织化学染色试剂盒说明书进行操作。最终所得切片在400倍光学显微镜下观察，并采集图像信息。选取5个视野进行阳性细胞计数。细胞核或细胞质中呈棕黄色或棕褐色细胞为TRPM7、GATA6阳性表达细胞。

根据阳性细胞百分比和染色强度进行评分。阳性细胞百分比：<5%计0分，5%～25%计1分，>25%～50%计2分，>50%～75%计3分，>75%计4分。染色强度：无染色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。两种记分相乘为染色指数，据此进行分级：0分为阴性(-)；1～4分为弱阳性(+)；5～8分为阳性(++)；9～12分为强阳性(+++)。其中，定义-、+为低表达，++、+++为高表达。

1.4随访 所有入组的卵巢浆液性腺癌患者经治疗出院后，以电话或复查形式对其进行5年随访，每3个月1次，随访时间截止至2020年7月。随访期间观察并记录患者生存情况。随访期间有2例患者失访，随访率为97.47%。

2 结 果

2.1两组患者TRPM7和GATA6蛋白表达情况比较 TRPM7蛋白主要表达在细胞质中，GATA6蛋白主要表达在细胞核中。卵巢浆液性腺癌组织中TRPM7、GATA6蛋白高表达率均明显高于正常卵巢组织(P<0.05)。见表1、图1。

表1 两组患者TRPM7和GATA6蛋白表达情况比较

2.2TRPM7、GATA6蛋白表达与卵巢浆液性腺癌患者临床病理特征的关系 不同年龄的卵巢浆液性腺癌患者癌组织中TRPM7、GATA6蛋白表达情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)。FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分级高级别、有大网膜转移、有淋巴结转移、有远处转移的患者癌组织中TRPM7、GATA6蛋白高表达率分别明显高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、病理分级低级别、无大网膜转移、无淋巴结转移、无远处转移的患者(P<0.05)。见表2。

表2 TRPM7、GATA6蛋白表达与卵巢浆液性腺癌患者临床病理特征的关系[ n(%)]

注：A显示正常卵巢组织中TRPM7蛋白呈阴性；B显示卵巢浆液性腺癌组织中TRPM7蛋白呈阳性；C显示正常卵巢组织中GATA6蛋白呈阴性；D显示卵巢浆液性腺癌组织中GATA6蛋白呈阳性。

2.3卵巢浆液性腺癌组织中TRPM7、GATA6蛋白表达水平相关性 卵巢浆液性腺癌组织中TRPM7蛋白表达与GATA6蛋白表达呈正相关(r=0.427，P<0.001)。

2.4TRPM7、GATA6蛋白表达与卵巢浆液性腺癌患者预后关系 TRPM7蛋白高表达组患者5年累积生存14例，死亡38例，失访2例；TRPM7蛋白低表达组患者5年累积生存15例，死亡10例。TRPM7蛋白高表达组患者的5年总生存率为26.92%，明显低于TRPM7蛋白低表达组患者的5年总生存率(60.00%)，差异有统计学意义(χ2=5.830，P=0.016)。GATA6蛋白高表达组患者5年累积生存13例，死亡43例，失访1例；GATA6蛋白低表达组患者5年累积生存16例，死亡5例，失访1例。GATA6蛋白高表达组患者的5年总生存率为23.21%，明显低于GATA6蛋白低表达组的患者5年总生存率(76.19%)，差异有统计学意义(χ2=16.150，P<0.001)。见图2。

图2 卵巢浆液性腺癌组织中TRPM7、GATA6蛋白不同表达患者Kaplan-Meier生存分析

2.5卵巢浆液性腺癌患者不良预后危险因素分析 Cox回归模型单因素分析结果显示，病理分级高级别、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、有远处转移、TRPM7蛋白高表达、GATA6蛋白高表达是影响卵巢浆液性腺癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。多因素分析结果显示，FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、有远处转移、TRPM7蛋白高表达、GATA6蛋白高表达是卵巢浆液性腺癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

表3 卵巢浆液性腺癌患者不良预后的危险因素分析

3 讨 论

卵巢癌患者早期无明显症状，可出现腹围增大、便秘、间歇性腹胀、背痛等症状。当患者出现持续性腹痛、腹胀和消瘦时，卵巢癌多已进展至中晚期，而此时多已转移至其他盆腹腔器官，使其他器官功能异常，严重影响患者生活质量和威胁患者生存[6]。故而探寻预后标志物有助于患者病情评估和临床治疗方案的确定。

Mg2+是一种在肿瘤发生、进展和转移中起重要作用的阳离子。研究表明，TRPM7作为Mg2+转运体，能够促进结肠癌细胞转移，可作为结直肠癌治疗靶点[7-8]。也有研究发现，肺癌组织中较高的TRPM7表达与较大肿瘤直径、淋巴结转移和较高肿瘤恶性程度有关[9]。本研究结果显示，卵巢浆液性腺癌组织中TRPM7蛋白高表达率明显高于正常卵巢组织，且与FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分级高级别、有大网膜转移、有淋巴结转移、有远处转移相关，与LIU等[9]研究结果相似，提示TRPM7蛋白可能参与卵巢浆液性腺癌的发生、发展。SONG等[10]研究发现，TRPM7激酶抑制剂TG100-115能显著减少乳腺癌细胞迁移和侵袭，但对癌细胞增殖影响不大。但TRPM7在肾细胞癌细胞中过表达，可能通过影响AKT/FOX1信号转导途径促进癌细胞生长、增殖[11]。这提示卵巢浆液性腺癌中TRPM7亦可能影响癌细胞转移，促进肿瘤进展。

GATA6蛋白属于GATA蛋白家族，有研究报道，结肠癌组织中GATA6蛋白表达水平明显高于癌旁组织，可能影响肿瘤发生、发展[12]。刁艺等[13]研究显示，GATA6在垂体瘤组织中的阳性率高于正常组织，与TNM分期、病理分级、浸润深度、转移等临床病理特征明显相关。本研究结果显示，与正常卵巢组织相比，卵巢浆液性腺癌组织中GATA6蛋白呈高表达，推测GATA6高表达与卵巢浆液性腺癌发生有关。本研究分析其与临床病理特征的关系显示，癌组织中GATA6蛋白高表达率与FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分级高级别、有大网膜转移、有淋巴结转移、有远处转移相关，结果提示GATA6蛋白高表达可能预示FIGO分期和病理分级升高、肿瘤转移。

上皮间充质转化过程是影响癌细胞转移的关键因素[14-15]。对前列腺癌的研究显示，转化生长因子-β(TGF-β)可诱导TRPM7蛋白在前列腺癌细胞和组织中表达，TRPM7缺乏可通过影响Mg2+水平和逆转上皮间充质转化状态，抑制癌细胞的迁移和侵袭[16]。还有研究发现，胃癌中GATA6表达水平升高，过表达GATA6可增加上皮间充质转化，与癌细胞转移呈正相关[17]。本研究结果发现，卵巢浆液性腺癌组织中TRPM7蛋白表达与GATA6蛋白表达呈正相关，提示TRPM7与GATA6蛋白表达可能均与TGF-β诱导有关，二者可能通过促进上皮间充质转化过程，影响癌细胞转移，参与卵巢浆液性腺癌的进展。

国内外研究显示，TRPM7、GATA6在肺癌中高表达，是影响患者预后的危险因素，可作为肺癌患者预后的标志物[18-19]。本研究结果显示，TRPM7、GATA6蛋白高表达组患者5年总生存率均低于二者的低表达组，提示临床应密切关注TRPM7、GATA6蛋白高表达患者的异常表现，以采取有效治疗措施，改善预后。研究进一步分析显示，FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、有远处转移、TRPM7蛋白高表达、GATA6蛋白高表达是卵巢浆液性腺癌患者不良预后的独立危险因素。这充分提示TRPM7、GATA6蛋白高表达可能与卵巢浆液性腺癌进展有关，可能作为预后标志物，为临床评估患者预后提供一定理论依据。但二者在该肿瘤中的具体作用机制尚需进一步实验验证，且本研究未选取癌旁组织作为对照，后续将进一步开展研究。

综上所述，卵巢浆液性腺癌组织中TRPM7、GATA6表达上调，与FIGO分期升高、淋巴结转移、远处转移及患者不良预后有关，TRPM7、GATA6可作为卵巢浆液性腺癌患者预后评估的生物标志物。