LC-MS分析穿心莲内酯的降解产物

★ 许静 彭红 熊贤招（.安徽医科大学附属阜阳医院 安徽 阜阳 36000；.江西中医药大学 南昌 330004）

穿心莲内酯为传统中药穿心莲的有效成分之一［1-2］，被誉为天然抗生素，在临床上具有广泛的应用前景［3］，具有抗炎、抗病毒、保肝利胆、免疫调节、抗肿瘤、治疗心脑血管疾病、抗糖尿病、神经保护、中止妊娠等多种药理作用［4］。采用LC-MS对其降解产物进行分析。

1 仪器与试药

Triple TOF 5600＋型四级杆飞行时间串联质谱仪（美国AB SCIEX公司）；穿心莲内酯（批号：190610，190618，190623）；甲醇、甲酸（色谱纯，美国TEDIA天地试剂公司）；浓盐酸、氢氧化钠、30%过氧化氢（分析纯，西陇科学股份有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Aglient ZORBAX Eclipse Plus C18（2.1 mm×100 mm, 1.8 μm），流动相A为水，流动相B为乙腈，柱温：25 ℃，流速：0.2 mL/min，检测波长：230 nm，进样量：2 μL，流动相梯度见下表1。

表1 色谱参数

2.2 质谱条件 正离子模式扫描；电喷雾离子源（ESI）；GAS1为50 psi；GAS2为50 psi；Curtain Gas为30 psi；源温度为500 ℃；离子喷雾电压（ISVF）为5 500 V；去簇电压为100 V；CES为10 eV；CE为30 eV；产物扫描范围为m/z50～1 000。

2.3 样品的制备

2.3.1 未破坏样品 取本品粉末约50 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3.2 高温破坏样品 取本品粉末约50 mg，精密称定，置50 mL圆底烧瓶中，精密加入甲醇80 mL，100 ℃水浴2 h，取出，放冷至室温，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3.3 强酸破坏样品 取本品粉末约50 mg，精密称定，置50 mL容量中，精密加入1 mol/mL的盐酸1 mL，80 ℃水浴30 min，取出，放冷至室温，加1 mol/mL的NaOH中和至中性，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3.4 强碱破坏样品 取本品粉末约50 mg，精密称定，置50 mL容量中，精密加入1 mol/mL的NaOH 1 mL，80 ℃水浴30 min，取出，放冷至室温，加1 mol/mL的盐酸中和至中性，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3.5 氧化破坏样品 取本品粉末约50 mg，精密称定，置50 mL容量中，精密加入30 % H2O21 mL，25 ℃放置1 h，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3.6 光破坏样品 取本品粉末约50 mg，精密称定，置100 mL容量中，紫外灯下照射10 d，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

3 结果

3.1 LC-MS检测 取穿心莲内酯上述样品，按“2.1”及“2.2”项下LC-MS色谱及质谱条件进行检测。见图1和表2。

表2 穿心莲内酯及有关物质LC-MS检测结果

3.2 图谱解析

穿心莲内酯未破坏样品的主要成分是穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯，杂质含量较少，有11种，可能为降解产物，未破坏样品中主要是杂质3；高温破坏实验生成了新的杂质（杂质7、杂质8），主要是杂质7；强酸破坏实验的主要是杂质3，同时也生成了少量的杂质8、杂质9、杂质10、杂质11；强碱破坏实验生成了新的杂质7和杂质9，主要是杂质1、杂质3、杂质7、杂质9；光照破坏实验生成了少量新的杂质7、杂质8；氧化破坏实验中主要是杂质1和杂质4。

表3 结构分析结果

图1 各样品总离子流图

4 讨论

穿心莲内酯是存在于中草药植物穿心莲中的一种酯类化合物。药理学研究并未发现其在动物体内有明显的毒副作用，与其他药物相具有更好的安全性和治疗效果，在临床应用更加广泛，这也意味着对其质量控制有着更严格的要求。本论文通过LC-MS研究穿心莲内酯的有关杂质，研究方法简便可靠，能够快速分析穿心莲内酯的有关物质，为以后穿心莲内酯有关物质的研究奠定了基础。研究结果显示其在碱性条件和高温条件下非常不稳定，给穿心莲内酯的生产、包装、运输、储存和制剂工艺的研究提供了参考依据。