茚二酮显现汗潜指纹后对脱落细胞DNA提取的影响

徐 敏， 薛 静， 郭尉男， 朱 桐， 赵志浩， 邹广发

(1.黑龙江公安警官职业学院， 黑龙江哈尔滨 150025； 2.公安部物证鉴定中心， 北京 100038；3.大庆市公安局， 黑龙江大庆 163000)

0 引言

近年来，随着我国以审判为中心的司法制度改革，指纹和DNA两大个体识别技术在侦查破案和诉讼工作中的作用愈发重要。犯罪嫌疑人在犯罪过程中常常在现场留下指纹，除采用传统的显现方法处理指纹物质进行形态特征鉴定外，利用指纹中含有的脱落细胞进行DNA分析检测也是目前刑事技术人员的研究热点。

由于现场指纹中脱落细胞含量少，往往显现指纹后对后期DNA提取会造成一定影响。虽然目前国内外专家学者在指纹显现方法对后期人类DNA 提取影响研究方面取得了初步的成效[1-12]，但是还有一些指纹显现后提取DNA的技术未被研究。茚二酮作为显现纸张类客体的化学试剂，其显现效果要优于茚三酮和DFO[13]，但是茚二酮显现汗潜指纹后对DNA提取的影响在国内尚未见报道。本文采用博坤全自动96道微量DNA提取工作站进行提取，研究白纸上茚二酮显现汗潜指纹后是否会对DNA检出造成影响。

1 实验材料与方法

1.1 主要试剂和仪器设备

改良的茚二酮显现试剂(公安部物证鉴定中心指纹处研制)、通风橱、加热柜、多波段光源、佳能D5100单反相机(日本Canon公司)，博坤全自动96道微量DNA提取工作站(博坤生物科技有限公司)，IdentifilerTMPlus试剂盒(美国ABI公司)。

1.2 样本采集方法

10名自愿者在A4纸指定位置上分别用左右手的拇指、食指和中指捺印6枚汗液指纹，捺印力度约为1 500 g，捺印时间30 s，以保证捺印的汗潜指纹能够检测到基因位点。将每枚指纹从中间剪开，左半部分用作空白对照，右半部分用茚二酮显现后再进行DNA检测。

1.3 茚二酮操作方法

将制作好的指纹样本置于干净的通风橱内，用一次性滴管吸取改良的茚二酮试剂等量滴于待显样本表面，然后将样本均匀分成3组，分别置于通风橱内常温显现、置于加热柜内80 ℃恒温显现、置于加热柜内130 ℃恒温显现。待显现完毕后，将3组样本分别置于暗房中，采用多波段光源530 nm的绿光激发照射下，用橙色滤光片观察荧光指印并对其进行滤光拍照，如图1所示。

1.4 磁珠法提取DNA

利用磁珠法将提取的脱落细胞进行裂解，并使之与DNA相结合的蛋白质变性，使DNA处于游离状态，磁珠特异性吸附DNA，通过洗涤，去除DNA以外的蛋白质、粘多糖等杂质，最后采用洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA，从而得到纯度、浓度较高的DNA，进而应用在接下来的PCR扩增中。

1.5 STR扩增及产物检测

采用ProFlexTMPCR System、IdentifilerTMPlus试剂盒，master mix 4ul，primer set 2ul，DNA samples 4 μL扩增体系，95 ℃高温11 min使DNA解链成为单链，94 ℃20 sec、59 ℃3 min循环31次，60 ℃10 min使引物延伸完全，使单链产物退火成双链。

2 结果与讨论

2.1 结果

未经茚二酮显现的指纹样本经磁珠法直接提取DNA获得了STR分型；经茚二酮显现的指纹样本经磁珠法直接提取DNA也获得了STR分型，分型结果见图2～4，成功率统计结果见表1。

表1 120例脱落细胞样本显示与未显示指纹DNA提取成功率比较

图2 茚二酮(a：对照组；b：常温显现实验组)

2.2 讨论

实验可见，经茚二酮显现后的指纹样本DNA含量较未经显现的没有显著差异，均能获得较为理想的STR分型，茚二酮试剂未对指纹样本的DNA和含量及检出造成明显影响，但是由于样本中DNA含量低，部分等位基因有不对称扩增现象。

图3 茚二酮(a：对照组；b：80 ℃显现实验组)

图4 茚二酮(a：对照组；b：130 ℃显现实验组)

对照组有40例指纹样本未能全部显现出16个基因座，可能是由于个体差异造成脱落细胞无法完全显现，茚二酮显现后的指纹(实验组)有45例指纹样本未能全部显现出16个基因座，除个体差异的原因外，可能与实验时的操作方法有关。可以采取将带有指纹部分的纸张直接放置到离心管中，增加PCR扩增循环次数等方法，最大限度避免脱落细胞在采集过程中的丢失，提高DNA的检出率。

9个以上的STR基因座具有明显的个体识别能力，从表1可以看出，对照组和实验组的指纹样本检测出9个以上基因座的成功率均达到了90%以上。在实际案例中可将指纹比对和DNA个体识别技术结合运用，这对犯罪现场上的证据采集具有积极的指导意义。