可溶性信号素4D水平对急性ST段抬高型心肌梗死高血栓负荷的预测作用

柏 洁, 郑扣龙

(南通大学第二附属医院 心血管内科, 江苏 南通, 226001)

心血管疾病严重威胁着人类健康。急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)因其起病急，病情进展迅速，死亡率高，已成为成年人猝死的主要原因之一[1]。《中国心血管病报告2018》[2]指出: STEMI正处于逐渐年轻化的态势，严重威胁中国人民健康，成为重大的公共卫生问题。信号素4D(Sema4D)又称CD100，是一种150 kDa的I型整膜糖蛋白，由大多数造血细胞表达，包括B和T淋巴细胞、中性粒细胞、血小板等。Sema4D的表达通常在细胞激活后增加，变成具有生物学活性的 120-kDa 片段，并与其受体 plexin-B1结合，通过细胞表面 Met 结构的酪氨酸激酶使下游的相关信号分子发生磷酸化，参与免疫反应、血栓形成、动脉粥样硬化性疾病等[3-5]。目前国内外主要研究[6]报道了血清可溶性信号素4D(sSema4D)水平与慢性心衰的关系，而关于sSema4D水平与急性心肌梗死冠状动脉血栓负荷的研究较少。本研究探讨sSema4D对STEMI血栓负荷的预测价值，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2020年4月—2021年3月收治于南通市第一人民医院心内科住院部的STEMI确诊患者46例(STEMI组)，其中男32例，女14例; 不稳定型心绞痛(UA)患者40例(UA组)，男29例，女11例; 同时选取同时间段冠状动脉造影(CAG)阴性住院患者40例为对照组，其中男25例，女15例。后根据Yip标准[7]划分血栓负荷，将STEMI患者分为高血栓负荷组20例和非高血栓负荷组26例。CAG及手术报告在2名经验丰富的冠状动脉介入医师协助下对患者进行操作。所有患者均经心电图、超声心动图、心肌酶谱检查符合临床确诊标准。本研究经医院伦理委员会批准(2019KN09), 所有患者均签署知情同意书。

纳入标准: 18～75岁符合STEMI诊断标准患者(患者符合中华医学会心血管病学分会等制定的2019年STEMI诊断和治疗指南[8])、UA患者和CAG阴性患者(CAG的阴性标准为冠状动脉主干或其主要分支管腔直径狭窄50%)。所有患者在术前均服用阿司匹林300 mg和替格瑞洛180 mg, 以排除抗血小板药物对实验的影响。排除标准: 合并严重的心脏性疾病者; 合并严重的先天性心脏病者; 存在结缔组织病、创伤、急慢性感染者; 肝功能不全(定义为谷丙转氨酶或总胆红素大于正常上限的3倍)者; 肾功能不全(定义为血肌酐大于正常上限的1.5倍)者; 具有高危出血风险的患者; 活动性消化性溃疡及皮肤溃疡者; 对阿斯匹林、替格瑞洛过敏者; 心源性休克者; 怀孕及哺乳期妇女; 合并恶性肿瘤者; CAG显示左主干病变者。

1.2 方法

入组患者均于入院后次日清晨抽取肘静脉血 2 mL, 置入干燥的肝素锂采血管中，分别送本院实验室、生化室进行检测。所有患者在术前抽取血液3 mL, 置入干燥的肝素锂采血管中，使用离心机于3 000转/min离心15 min, 用移液器仔细收集上清液于EP管中，将EP管进行编号和分组，保存于-80℃冰箱中以备检测时使用。STEMI组患者与对照组各随机选取6例，于术后连续3天抽取肘静脉血 2 mL以提取实验指标。

统一收集血清标本后，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清 sSema4D水平。试剂盒购于上海酶研生物科技有限公司，生产货号各自是 EK-H11846, 严格按照说明书步骤进行操作。统一收集血液标本后检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平，同时用Spearman相关分析比较STEMI组中sSema4D与hs-CRP的相关性。

其他常规化验检查均送至本院生化室，相关分析由全自动血液分析仪(希森美康, XN-9100)、全自动生化分析仪(南京三和仪器有限公司, LAboSPECT008AS)、酶标仪(Therm, Multiskan FC)完成。

1.3 统计学分析

2 结 果

2.1 基本特征

3组年龄、性别、吸烟史、糖尿病、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、肾功能(肌酐)、肝功能(谷丙转氨酶)等临床指标水平比较，差异无统计学意义(P>0.05), 见表1。

表1 3组基本资料比较 M

2.2 sSema4D在STEMI中的作用

sSema4D在STEMI组患者的外周血中相较于UA组和对照组均升高，差异有统计学意义(P<0.05); UA组外周血中的sSema4D与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05), 见图1。STEMI高血栓负荷组(n=20)sSema4D表达量高于STEMI非高血栓负荷组(n=26), 差异有统计学意义(P<0.05), 见图2。

与STEMI组比较, ∗P<0.05。图1 STEMI组、UA组和对照组血清sSema4D水平比较

与非高血栓负荷组比较, ∗P<0.05。图2 STEMI高血栓负荷组与非高血栓负荷组sSema4D水平比较

2.3 sSema4D表达水平随时间衰减

检测STEMI组和对照组患者第1、2、3天的外周血中sSema4D表达水平，发现STEMI组外周血中sSema4D表达水平衰减幅度大于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见图3。

2.4 STEMI患者血清中sSema4D与hs-CRP水平相关性

检测STEMI患者hs-CRP水平(见表1)，并用Spearman相关分析比较STEMI组患者血清中sSema4D和hs-CRP的相关性。根据hs-CRP水平分1.0∶1～10 mmoL/L组、2.0∶10～20 mmoL/L组、3.0∶20～30 mmoL/L组、4.0∶30 mmoL/L组，分析发现sSema4D与hs-CRP呈正相关(P<0.05), 相关系数为0.384, 见图4。

3 讨 论

根据传统观念, Sema4D作用是通过非免疫组织的(神经元、内皮细胞、肿瘤细胞)中的丛蛋白和免疫系统中的CD72介导的。Sema4D和CD72表达于血小板上[9]。在血小板活化过程中, Sema4D和CD72表达增加，随后Sema4D胞外区逐渐脱落。当血栓开始形成时，血小板相关的Sema4D可以与附近血小板上的受体结合，促进血栓形成[10], 提示Sema4D在血小板活化中起重要作用。既往研究[11-13]报道，在心血管疾病中, sSema4D参与了动脉粥样硬化性疾病的形成，与心房颤动存在独立相关性。

本研究采用ELISA试剂盒检测3组患者血清中sSema4D水平，得出STEMI组的sSema4D水平显著高于UA组和对照组，而UA组与对照组之间无明显差异，且这种差异性在STEMI组中的高血栓负荷和非高血栓负荷患者中更能体现。前面提到sSema4D在血小板活化中起重要作用，参与血栓的形成，与本研究结果相一致。

本研究显示, STEMI组表达sSema4D水平的衰减幅度明显大于对照组，说明一方面是由于患者自身代谢因素的影响，另一方面在干预下，患者的炎症反应正在好转，笔者推测sSema4D与患者体内氧化应激反应存在某种相关性[14]。由于本研究只测定了术后连续3天的水平，还需进一步实验探究其存在关联的确切机制。

本研究分析了STEMI组sSema4D和hs-CRP水平之间的相关性，得出两者之间呈正相关，相关系数为0.384(P<0.05)。hs-CRP通过介导炎症反应在STEMI患者中发挥作用，这也更加证实了此前研究结论[5]。本研究推测sSema4D是否也可以同hs-CRP一样成为新型的心肌炎症标志物。sSema4D不仅能调节炎症免疫反应，还参与许多生理和病理过程，包括血管生成[15]、成骨[16]和肿瘤的转化[17], 使其成为许多疾病治疗的干预分子，如抑制Sema4D/Plexin-B1信号通路可以从减少新生血管生成，减轻糖尿病视网膜病变血管功能障碍[18]。笔者推测减少Sema4D与血小板表面Plexin-B1结合可以减少血栓形成，并可以作为急性心肌梗死免疫治疗的潜在靶点。一直以来，心肌标志物对冠状动脉粥样硬化性疾病的诊断、治疗以及预后的判定，降低疾病死亡率起到了关键作用[19]。肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(CTn)是目前心肌损伤的主要标志物，上一代心肌梗死的“金标准”CK-MB, 仍存在特异性不足的缺点，而且并不能诊断到微小的心肌梗死[20]。当血管狭窄导致心肌损伤, CK、CK-MB和CTn会出现阳性反应，在一定程度上反映了心肌损伤程度，但对冠状动脉整体情况的评估不一定灵敏，而且在早起预防疾病发生之前，作用甚微。

研究结果表明, sSema4D在STEMI组患者的外周血中相较于UA组和对照组均显著升高; STEMI高血栓负荷组sSema4D表达量显著高于STEMI非高血栓负荷组，初步反映了sSema4D对急性心肌梗死血栓负荷的预测价值。但本研究存在一些不足，由于纳入标准严格，可入选患者数量有限，结果代表性有限。本研究只探究STEMI组和对照组sSema4D在不同时间段的水平，未将UA组作为实验组，且时间段设置过短，只检测了患者3天内的sSema4D表达水平，需要进一步完善。

综上所述，STEMI患者的外周血中sSema4D表达水平高于UA组和对照组患者，并且在STEMI高血栓负荷组中呈高表达趋势, sSema4D可能对STEMI高血栓负荷具有预测价值，有望作为STEMI的治疗靶点，还可能成为预防冠状动脉粥样硬化的新的炎症指标。