血清LncRNA MEG3、SNHG5水平与慢性阻塞性肺疾病全球倡议分级及预后的相关性分析

石 赟, 陈艳蓉, 张 净, 罗 佳

(首都医科大学附属北京友谊医院 老年医学科, 北京, 100050)

长链非编码RNA(LncRNA)是一种转录长度>200 bp, 但无蛋白编码功能的核苷酸序列。大量研究[1-3]证实, LncRNA与细胞增殖、凋亡、侵袭等生理过程密切相关。慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种以不完全气流受限为特征的进展性疾病，有效评估COPD急性加重期(AECOPD)患者病情并预测其预后在AECOPD治疗中具有重要意义[4-6]。徐建光等[7]研究发现, COPD患者外周血单个核细胞中长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因3 (LncRNA SNHG3)表达水平下降，且推测LncRNA SNHG3表达量降低可能是COPD发病的重要原因。由此推测, LncRNA水平的改变可能与COPD患者病情及预后存在一定关系。本研究将长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)及小核仁RNA宿主基因5(SNHG5)纳为研究指标，通过检测87例AECOPD患者血清LncRNA MEG3、SNHG5水平分析其在判断患者病情及预后中的应用价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将2017年6月—2020年6月收治的87例AECOPD患者纳为急性组，将急性组中经治疗1个月后病情恢复稳定的46例患者纳为稳定组，同期50例健康志愿者纳为对照组。① 急性组入选标准: 患者符合《慢性阻塞性肺病全球倡议慢性阻塞性肺病指南(2013更新版)》[8]中相关诊断标准，具有呼吸困难、慢性咳嗽咳痰症状，持续性气流受限，短期内咳嗽、喘息、咳痰等症状加重，需改变治疗方案。② 稳定组入选标准: 上述AECOPD患者经治疗后病情基本恢复至急性加重前状态，病情稳定1个月以上。③ 健康志愿者入选标准: 健康志愿者无COPD病史，无慢性咳嗽、咳痰、喘息等病史。排除标准: 入院前2周内使用糖皮质激素或抗菌药物治疗者、合并其他部位感染者、合并恶性肿瘤者、合并严重免疫缺陷性疾病者和认知障碍者。急性组男71例，女16例; 年龄59～88岁，平均(72.56±12.62)岁; 合并高血压者22例，合并糖尿病者13例。稳定组男36例，女10例; 年龄56～85岁，平均(71.58±13.57)岁; 合并高血压者10例，合并糖尿病者7例。健康对照组男40例，女10例; 年龄58～87岁，平均(70.58±15.36)岁; 合并高血压者9例，合并糖尿病者6例。

1.2 血液样本采集

分别在COPD患者急性加重期及稳定期采集外周静脉血，对照组采用体检废弃血清。采用促凝管采集被研究者静脉血5 mL, 室温下静置30 min, 1 500转/min离心10 min, 收集上层液体置于EP管内, -80 ℃冰箱中保存待用。

1.3 实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测血清LncRNA表达

采用TRIzol提取血清中总RNA, 利用Thermofisher公司生产的NanoDrop ND1000分光光度计检测RNA浓度与纯度。总RNA进行反转录处理得到cDNA。RT-qPCR法检测血清SNHG5与内参基因磷酸脱氢酶(GAPHD)的表达，反应体系为: Mix 10 μL, 上下游引物各1 μL, cDNA 2 μL, 焦碳酸二乙酯(DEPC)水6 μL。PCR扩增条件: 第1阶段95 ℃,5 min, 第2阶段95 ℃, 30 s, 持续35个循环，每组样品重复3次。基因相对表达量采用2-△△α法计算。引物序列见下: GAPHD正向引物为5′-CTCTTCCAGCCTTCCTTCCT-3′; GAPHD反向引物为5′-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3′; MEG3正向引物为5′-CTGCCCATCTACACCTCACG-3′; MEG3反向引物为5′-CTCTCCGCCGTCTGCGCTAGGGGCT-3′; SNHG5正向引物为5′-TACTGGCTGCGCACTTCG-3′; SNHG5反向引物为5′-CAGTAAAAGGGGAACACCA-3′。

1.4 COPD患者病情及预后相关指标检测

① 检查患者病情相关指标: 收集患者一般资料，包括吸烟史、COPD病程、住院时间、白细胞(WBC)计数、用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1), 计算第1秒用力呼气容积与用力肺活量的比值(FEV1/FVC)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%预计值)。② GOLD分级参考《慢性阻塞性肺病全球倡议慢性阻塞性肺病指南(2013更新版)》标准[8], 共分为4级，分级越高说明患者病情越严重。COPD多维分级评分系统 (BODE)指数包含体质量指数、气流阻塞程度、呼吸困难程度及运动能力等指标，得分与病情严重程度呈正相关。③ AECOPD患者预后评估: 将住院期间死亡的AECOPD患者纳为预后不良组。

1.5 统计学方法

2 结 果

2.1 3组临床资料比较

急性组、稳定组及对照组男女占比、年龄、FEV1%预计值水平比较，差异无统计学意义(P>0.05); 3组吸烟史、WBC及FEV1/FVC水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。急性组住院时间长于稳定组，差异有统计学意义(P<0.05); 急性组和稳定组COPD病程比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3组临床资料比较

2.2 3组血清LncRNA MEG3、SNHG5水平比较

急性组及稳定组血清LncRNA MEG3、SNHG5水平均低于对照组，且急性组血清LncRNA MEG3、SNHG5水平低于稳定组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 3组血清LncRNA MEG3、SNHG5水平比较

2.3 急性组及稳定组GOLD分级及BODE指数得分比较

急性组GOLD分级与稳定组比较，差异有统计学意义(P<0.05); 急性组BODE指数得分高于稳定组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 急性组及稳定组GOLD分级及BODE指数得分比较

2.4 血清LncRNA MEG3、SNHG5水平与COPD患者不良预后的关系分析

87例AECOPD患者住院期间共死亡18例，被纳入预后不良组，其余69例被纳入预后良好组。预后不良组血清LncRNA MEG3、SNHG5水平低于预后良好组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 血清LncRNA MEG3、SNHG5水平与COPD患者不良预后的关系分析

2.5 血清LncRNA MEG3、SNHG5水平与COPD患者其他指标间的相关性分析

相关性分析提示, COPD患者血清LncRNA MEG3与吸烟史、GOLD分级、BODE指数得分呈负相关(P<0.05), 与FEV1/FVC水平呈正相关(P<0.05)。LncRNA SNHG5水平与吸烟史、住院时间、GOLD分级及BODE指数得分呈负相关(P<0.05), 与FEV1/FVC呈正相关(P<0.05)。见表5。

表5 血清LncRNA MEG3、SNHG5水平与其他指标的相关性分析

3 讨 论

COPD是全球患者死亡的主要病因，但关于COPD的致病机制目前尚不清楚。研究认为, COPD与炎症反应、氧化应激、自噬、细胞凋亡等相关。随着全球分子研究的不断进展, LncRNA被证实是一种与细胞增殖、凋亡等生理过程密切相关的物质，成为了目前研究[9-10]的焦点。

本文通过查阅文献发现, MEG3、SNHG5 2种LncRNA与肺部病变有关。郑志刚等[11]研究发现，肺癌组织中LncRNA MEG3表达低于癌旁组织，且其表达量影响患者生存时间，可作为肺癌预后判断的潜在分子标志物。薛明强等[12]通过体外实验发现, LncRNA MEG3能调节肺癌H1299细胞对放射的敏感性。陈刚等[13]研究发现，血清LncRNA SNHG5水平在诊断非小细胞肺癌(NSCLC)中具有良好的灵敏性及特异性。以上研究证实, LncRNA MEG3及SNHG5可能参与肺癌的发生及发展，推测2种指标可能与COPD也存在一定的关联性。

本研究比较3组血清LncRNA MEG3、SNHG5水平发现，急性组、稳定组血清LncRNA MEG3、SNHG5水平均低于对照组，且急性组患者血清LncRNA MEG3、SNHG5水平低于稳定组患者，提示LncRNA MEG3、SNHG5可能参与AECOPD的发生过程。相关性分析发现，血清LncRNA MEG3、SNHG5水平与COPD患者GOLD分级及BODE指数得分均呈负相关，与FEV1/FVC呈正相关，提示血清LncRNA MEG3、SNHG5在反映患者病情严重程度中也具有良好的应用价值。

研究[14-15]表示，烟草中有害物质会损伤气道上皮细胞与纤毛运动，降低气道净化能力，并促进支气管黏液腺与杯状细胞增生肥大，分泌更多黏液，同时刺激副交感神经，促进平滑肌收缩。此外，尼古丁等有害物质还能促使自由基的生成，诱导中心粒细胞释放蛋白酶，破坏肺纤维弹力，诱导肺部病变。本研究发现，COPD患者血清LncRNA MEG3、SNHG5水平与患者吸烟史密切相关，推测LncRNA MEG3、SNHG5可能参与了COPD的进展。

本研究87例AECOPD患者中共18例住院期间死亡，将其纳入预后不良组。预后不良组与预后良好组治疗前血清LncRNA MEG3、SNHG5水平比较结果发现，预后不良组血清LncRNA MEG3、SNHG5水平低于预后良好组，提示血清LncRNA MEG3、SNHG5在反映COPD患者预后中也具有一定的临床应用价值。

综上所述, COPD患者血清LncRNA MEG3、SNHG5水平较健康者下降，且与患者肺功能及病情严重程度有关，在判断AECOPD患者短期内再次急性复发中也具有一定价值。