γ干扰素释放试验在艾滋病合并结核感染人群中的诊断价值研究

姚正钢，陈勇毅，蓝梦颖

阳江市公共卫生医院感染内科，广东阳江 529566

艾滋病（AIDS）是全球范围内一种危害性较高传染性疾病，引发艾滋病的原因是由于人体感染了人类免疫缺陷病毒（HIV）所致，一旦感染病毒机体各大免疫器官都会受到极大的损伤，所以又将其称之为获得性免疫缺陷综合征[1]。结核病（TB）是一种常见的传染病。相关研究表明，人在感染HIV后并发TB的风险会明显提升，TB是导致AIDS患者死亡的重要危险因素，全球AIDS患者中有25%左右的患者主要死亡原因为TB[2-4]。近些年来，γ干扰素释放试验（IGRA）为艾滋病合并结核感染的早期快速诊断提供了新途径，IGRA在一定程度上弥补了结核菌素试验（PPD）的不足之处，现目前多个国家已将其应用于诊断HIV/TB潜伏感染中，国内外研究结果表明IGRA对艾滋病合并结核感染具有较高的辅助诊断价值，尤其是在一些发达国家[5]。该次方便选择2019年1月—2020年2月该院收治的60例艾滋病合并结核感染患者进行研究，主要旨在探讨针对艾滋病合并结核病患者应用γ干扰素释放试验的诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取该院收治的60例艾滋病合并结核感染患者纳入研究。男性42例，女性18例；年龄24～65岁，平均年龄（39.53±6.53）岁。患者签署相关知情同意书，经该院医学伦理委员会批准进行。

纳入标准：①纳入研究患者符合《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准(WS293-2008)》与《肺结核的诊断标准(WS288-2008)》中相关诊断标准；②均接受IGRA检查；③无精神疾病，认知正常，能有效配合各项检查和治疗。排除标准：①治疗期间曾应用免疫增强剂、免疫抑制剂者；②存在其他免疫功能障碍者；③合并肾脏、心肺、肝脏功能不全等者；④处于妊娠期的女性。

1.2 方法

所有患者均要实施γ干扰素释放试验（IGRA）、结核菌素试验（PPD）、结核抗体（T-SPOT TB）等一系列检查方式进行诊断。

IGRA试验：该试验所应用的结核杆菌特异性细胞免疫反应试剂盒主要是由海口维瑅瑷生物研究院所提供，应用酶联免疫法进行检测。具体步骤为:严格遵循无菌操作原则，应用肝素钠管采集纳入患者新鲜全血，全血采集量应＞3 mL，而后在室温状态下将采集的全血储存、运输，并且需要在16 h内实施样品刺激。其中编号反应管“样品号-N”，提示为阴性对照管，“样品号-P”提示为阳性对照管，“样品号-T”提示为检测管。将刺激剂分别加入3个对照管内，吸取1 mL全血加入相应编号的反应管中并孵育22～24 h，同时将血浆上清向标记好的1.5 mLEP管中转入。并严格根据试剂盒说明书实施操作进行检测，酶标仪读取450 nm处的OD值。计算结果，得出(P-N)和(T-N)值。当N＜0.5 IU/mL时，(T-N)/(P-N)≥0.60时判为阳性，否则为阴性。当N≥0.5 IU/mL，(T-N)/(P-N)≥0.85时判为阳性，否则为阴性(注：当P-N≥10 IU/mL时，按P-n=10 IU/mL计算)。

PPD试验：于患者前臂内侧实施肌肉注射5个单位PPD，72 h后对其硬结大小进行测量。

结核抗体（T-SPOT TB）检测：应用结核分枝杆菌抗体检测试剂盒（国食药监械(准)字2010第3400381号）进行分析，分析步骤与判定方法均参考说明书进行，并严格按照规定的流程操作。

1.3 统计方法

将研究中所记录的数据信息全数导入SPSS 22.0统计学软件中作进一步分析，计数资料以频数和百分比（%）表示，组间差异比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同诊断方式检测结果比较

以T-SPOT TB检验结果为金标准，共计40例阳性患者以及20例阴性患者，IGRA检测结果中，同为阳性的患者共计35例，同为阴性的患者共计15例，PPD检测结果中，同为阳性的患者共计25例，同为阴性的患者共计10例，具体结果见表1。

表1 不同诊断方式检测结果比较

2.2 影响IGRA阳性率相关因素分析

不同性别、不同感染方式以及T淋巴细胞CD4+计数对于患者的IGRA阳性率相较，差异无统计学意义（P＞0.05），但是经抗逆转录病毒治疗后的患者IGRA阴性率，显著较阳性率更高，差异有统计学意义（χ2=4.148，P＜0.05），见表2。

表2 影响IGRA阳性率相关因素分析[n(%)]

3 讨论

肺结核（TB）是临床上一种常见的传染性疾病，近些年来，由于时代发展，人们养成不良生活习惯，导致HIV感染开始慢慢由感染高危人群趋于普通人群发展，HIV感染人群也不断在扩大。机体一旦感染HIV，其病毒会刺激机体中的T淋巴细胞CD4+，长期以往机体免疫功能会受到严重损伤，从而导致结核菌感染逐步发展为活动性结核[6]。相对于非HIV感染的TB患者而言，HIV合并TB患者由于两种疾病不存在典型症状表现，加之相互影响、相互作用，不仅诊断难度高，且容易导致病情迁延不愈，患者随时都可能发生生命危险，因此早期确诊HIV合并TB对于控制患者病情、提高预后效果以及延长其生存期具有至关重要的意义[7]。由于临床诊断HIV合并TB过程中实施PPD实验存在假阴性现象，加之结核病灶所表现的影像学不具特异性，导致诊断具有一定的难度。所以研究一种敏感、有效的检测方式对于临床诊断HIV合并TB具有重要的意义[8-9]。

该次研究中对所有患者实施γ干扰素释放试验（IGRA）、结核菌素试验（PPD）、结核抗体（T-SPOT TB）等一系列检查方式进行诊断，检查结果显示，γ干扰素释放试验（IGRA）检测结果敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确性均明显较结核菌素试验（PPD）结果更高，提示IGRA在HIV感染合并TB患者的诊断过程中具有较为重要的辅助性诊断价值[10-11]。除此之外，我国开始广泛实施卡介苗接种也对PPD试验造成了影响，导致PPD试验存在假阳性，并且HIV感染合并TB患者大多数都是自身免疫力低下的人群，同时也存在假阴性率较高的现象[12-13]。IGRA试验的根本原理是因为TB患者机体内本身就存在特异性较强的T淋巴细胞，而当T淋巴细胞在体外受到ESAT-6和CFP-10等结核杆菌特异抗原的刺激时会导致机体开始分泌IFNγ，所以在对IFN-γ水平进行检测后，可以根据其具体水平对患者机体内是否存在结核感染进行有效判定[14-15]。在相关学者的研究结果显示，IGRA试验在针对TB患者的诊断中其敏感性为90.0%，特异性为98.1%，相对于该次研究结果的显示，患者在实施IGRA试验后，患者敏感性相较结核菌素试验（PPD）明显更高，出现这种情况的根本原因是IFN-γ是因为T淋巴细胞CD4分泌而形成的，所以患者一旦HIV感染就会造成T淋巴细胞CD4+明显下降，由于T淋巴细胞CD8+、γδT细胞也会促使机体分泌少量IFN-γ，所以最终造成该实验T淋巴细胞CD4+的影响并不明显，因此该次研究认为临床上针对HIV感染合并TB患者的诊断中可以应用IGRA试验，其检验方式具有有效性[16]。

为了进一步分析导致患者IGRA出现假阴性现象的相关因素，该次研究将患者的IGRA阳性、阴性患者的临床资料统计后进行了分析对比，结果显示不同性别、不同感染方式及T淋巴细胞CD4+计数在患者的IGRA阳性率相较差异无统计学意义(P＞0.05)，但是经抗逆转录病毒治疗后的患者IGRA阴性率，显著较阳性率更高（P＜0.05）。而从相关学者于2015年在γ干扰素释放试验在AIDS合并结核感染患者中的诊断价值研究中发现，研究结果同样显示性别（男性阳性率71.43%、阴性率40.00%，女性阳性率28.57%，阴性率60.00%）、感染方式（异性接触阳性率14.29%、阴性率10.00%，同性接触阳性率42.86%、阴性率50.00%，注射血液接触阳性率26.19%、阴性率20.00%，其他原因接触阳性率26.19%、阴性率20.00%）以及CD4+T淋巴细胞计数（＜200 mm3阳性率21.43%、阴性率80.00%，≥200 mm3阳性率78.57%、阴性率80.00%）对于IGRA结果影响并不明显（P＞0.05），但是当患者接受抗逆转录病毒治疗后（接受抗逆转录病毒治疗阳性率32.43%、阴性率60.00%）HIV感染合并TB患者IGRA阴性发生率较高，但差异无统计学意义（P＞0.05），陆旭等[17]表明，既往曾患结核的患者接受抗逆转录治疗后发生结核的总比率为14.2%，其中6个月发生结核的病例占比率为9.4%；该次研究中接受接受抗逆转录治疗后，其结核发生率为19.73%，与上述研究结果相似。因此，提示该次研究由于样本量较少的原因可能对研究结果造成了一定影响，同时也可能与患者因抗逆转录病毒治疗后直接影响机体免疫功能的原因相关，所以还需进一步研究。

综上所述，临床上针对艾滋病合并结核感染的诊断中应用γ干扰素释放试验具有较高的应用价值，IGRA试验在艾滋病合并结核感染人群中的诊断中具有一定价值。