外周血miR-183、miR-27b-3p联合智能染色胃镜早期诊断胃癌的价值

郭佳念 徐扬志 谢婷婷 贾琳

胃癌是常见消化道恶性肿瘤，据统计，我国胃癌发病率、死亡率仅次于肺癌，居恶性肿瘤第2位［1］。早期胃癌术后5年生存率可达90%，但由于胃癌早期表现不明显，多数患者诊断时已属肿瘤进展期［2］。胃镜检查是公认胃癌诊断“金标准”，而智能染色胃镜的应用使胃癌早期诊断率得到显著提高［3］。但胃镜检查属侵入性操作，大多数患者无法接受反复诊断，且对操作者要求较高，对胃癌早期诊断价值有限［4］。因此，寻找简便、快速且具有较高敏感度与特异度的胃癌早期诊断指标，是胃癌防治相关研究的重点之一。微小RNA（micro RNA，miRNA）是一类非编码小RNA，参与生物体生长、发育调节及多种疾病发生、发展。研究显示，胃癌中miR-183、miR-27b-3p 显著异常表达，可能成为胃癌早期诊断生物标志物［5-6］。基于此，本研究尝试分析外周血miR-183、miR-27b-3p 联合智能染色胃镜在胃癌早期诊断中的价值。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取广州医科大学附属第二医院2018年1月至2021年1月胃癌患者78 例作为研究组，另选择胃良性疾病患者39 例作为对照组。纳入标准：均经胃镜活检确诊；入组时未进行任何放化疗、内分泌治疗等；肝肾功能正常；患者及家属知情同意。排除标准：合并其他恶性肿瘤；近期使用抗生素、胃黏膜保护剂、抑酸药；哺乳或妊娠期女性；精神异常，无法配合研究。研究组女31例，男47 例，年龄平均（46.85±7.94）岁，TNM 分期：Ⅰ期29 例、Ⅱ期49 例。对照组女17 例，男22 例，年龄平均（48.02±8.35）岁。两组年龄、性别差异无统计学意义（P＞0.05），且本研究经本院伦理委员会审批通过。

1.2 方法

①智能染色胃镜检查：检查前10 min 服用泡剂，在清醒状态下行智能染色胃镜检查，若检查中未发现明显病变，在胃体、胃窦、胃底部，将变焦调整为0～9 档，观察胃小凹并拍照，若发现黏膜糜烂、溃疡、色泽异常，以清水反复清洗，再通过电子染色检查获取照片，在染色的情况下进行活检，部分病灶需手动调大变焦，观察病变情况，完成活检后以清水彻底冲洗。胃镜活检组织经甲醛固定后，行石蜡包埋、切片和苏木精-伊红染色，行病理诊断。②外周血miR-183、miR-27b-3p 及胃蛋白酶原检测：治疗前取空腹静脉血5 mL，离心（3 000 r/min，5 min，离心半径5 cm），取血清，加入RNA 酶混匀，裂解（酚-氯仿法），提取总RNA，逆转录为cDNA，行实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR），反应条件：95℃10 min；95℃10 s，60℃1 min，40 个循环，采用2-ΔΔct法计算miR-183、miR-27b-3p 水平；以酶联免疫吸附法检测胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）、PGⅠ/PGⅡ比值（PGR），必欧瀚生物技术公司试剂盒。

1.3 观察指标

①两组智能染色胃镜检查结果。②两组智能染色胃镜检查阳性率、外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原水平。③研究组智能染色胃镜检查与外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原相关性。④研究组外周血miR-183、miR-27b-3p 与胃蛋白酶原相关性。⑤智能染色胃镜检查、外周血miR-183、miR-27b-3p 对胃癌早期诊断价值。⑥智能染色胃镜检查、外周血miR-183、miR-27b-3p 联合对胃癌早期诊断价值。

1.4 统计学方法

采用统计学软件SPSS 22.0 处理数据，计数资料以n（%）描述，行χ2检验；计量资料以（）描述，两组间用t检验；采用Spearman、Pearson 分析相关性；诊断价值采用受试者工作特征（ROC）曲线，获取AUC，联合预测实施Logistic 二元回归拟合，返回预测概率logit（p），将其作为独立检验变量。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组智能染色胃镜检查结果

研究组经智能染色胃镜检查显示，胃窦可见多个浅表性溃疡，周围黏膜呈明显充血水肿状态。对照组以慢性萎缩性胃炎为例，智能染色胃镜检查显示，胃窦前壁隆起，中央凹陷。见图1。

图1 智能染色胃镜图（×20）Figure 1 Intelligent staining gastroscopy（×20）

2.2 智能染色胃镜检查阳性率、外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原水平

研究组智能染色胃镜检查阳性率、外周血miR-183 相对表达量高于对照组，miR-27b-3p 相对表达量、血清PGⅠ、PGR 低于对照组（P＜0.05），两组血清PGⅡ差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 两组外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原水平比较（±s）Table 1 Comparison of the positive rate of peripheral blood miR-183，miR-27b-3p，and pepsinogen levels between 2 groups（±s）

表1 两组外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原水平比较（±s）Table 1 Comparison of the positive rate of peripheral blood miR-183，miR-27b-3p，and pepsinogen levels between 2 groups（±s）

组别研究组对照组χ2/t 值P 值例数78 39智能染色胃镜检查阳性率50（64.10）6（15.38）24.729＜0.001 miR-183 相对表达量4.72±1.85 0.94±0.46 12.543＜0.001 miR-27b-3p 相对表达量（×10-2）1.88±0.62 5.31±2.04 13.688＜0.001 PGⅠ（μg/L）68.14±22.65 135.28±43.18 10.052＜0.001 PGⅡ（μg/L）24.51±6.29 23.26±5.37 1.062 0.291 PGR 2.78±1.01 5.82±1.75 11.906＜0.001

2.3 研究组智能染色胃镜检查与外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原相关性

Spearman 相关性分析，研究组智能染色胃镜检查与外周血miR-183 相对表达量呈正相关，与miR-27b-3p 相对表达量、血清PGⅠ、PGR 呈负相关（P＜0.05）。见表2。

表2 研究组智能染色胃镜检查与外周血miR-183、miR-27b-3p、胃蛋白酶原相关性Table 2 The correlation between smart staining gastroscopy and peripheral blood miR-183，miR-27b-3p，and pepsinogen in the study group

2.4 智能染色胃镜检查、外周血miR-183、miR-27b-3p 对胃癌早期诊断价值

ROC 曲线分析，智能染色胃镜检查、外周血miR-183、miR-27b-3p 早期诊断胃癌的AUC 分别为0.744、0.860、0.845，联合诊断的AUC 为0.963，95%CI 为0.911～0.989，诊断敏感度为85.90%，特异度为97.44%，显著高于单独诊断（P＜0.05）。见表3、图2。

图2 ROC 曲线分析结果Figure 2 ROC curve analysis results

表3 智能染色胃镜检查、外周血miR-183、miR-27b-3p 对胃癌的早期诊断价值Table 3 The value of intelligent staining gastroscopy，peripheral blood miR-183，miR-27b-3p in the diagnosis of early gastric cancer

3 讨论

早期胃癌通常指病灶局限且深度未达到粘膜下层的胃癌，研究指出，早期胃癌患者5年生存率可达85%～100%，而晚期胃癌患者5年生存率仅10%～20%［7］。因此，早期诊断、及时治疗是提高患者生存率的关键。

目前，胃镜活检仍是胃癌最主要诊断方法。研究发现，早期胃癌病灶区颜色变化与血管密度、解剖结构相关，常表现出正常血管网被新生血管取代，呈现胃小凹细小化、模糊不清、变平甚至消失，解剖结构及血管大小不整、排列紊乱［8］。智能染色胃镜可使用同一根胃镜观察，发现疑似病灶后切换至智能染色，可通过“色调变化”的多通道多颜色进行比较，有效显示病灶区界线，对病灶内细微血管及腺管形态进行观察，显著提高胃癌早期诊断率。本研究结果提示智能染色胃镜对胃癌诊断具有重要价值。但胃镜检查对技术要求较高，且侵入性操作给患者带来较大不适感，无法反复诊断，极易导致诊断结果偏差［9］。

研究显示，miRNA 通过发挥癌基因或抑癌基因作用，调节恶性肿瘤发生、发展［10］。研究证实，胰腺癌、胃癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中均存在miRNA 表达失调［11］。miRNA 谱的特异性为恶性肿瘤诊治提供了新思路。miR-183 属保守进化的miRNA 族，位于第7 对染色体，在恶性肿瘤中多发挥原癌基因作用。孙颖等［12］研究显示，胃癌患者血清miR-183 水平上调，且与病理特征及患者预后相关，可能成为胃癌诊断及预后评估的分子标志。miR-27b-3p 属miR-23b/27b/24-1 簇，位于9 号染色体，在口腔癌、前列腺癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤中发挥抑癌基因的作用［13］。本研究结果发现胃癌患者外周血miR-183 相对表达量明显升高，miR-27b-3p 相对表达量明显降低，推测胃癌中miR-183 可能发挥原癌基因的作用，miR-27b-3p 可能发挥抑癌基因的作用，通过控制分化、凋亡基因参与胃癌发生。

大量研究证实，胃蛋白酶原在胃粘膜病变发生、发展中发挥重要作用，是胃部疾病和胃癌筛查的重要指标［14-15］。胃蛋白酶原是胃蛋白酶的无活性前体，可分为PGⅠ、PGⅡ两种亚群，研究指出，检测PGⅠ、PGR 可发挥胃底腺黏膜“血清学活检”的作用，对胃癌早期诊断具有重要价值［16］。本研究数据显示，智能染色胃镜检查、外周血miR-183、miR-27b-3p均与血清PGⅠ、PGR 相关，进一步显示了二者在胃癌早期诊断中的应用价值。此外，智能染色胃镜检查与外周血miR-183 相对表达量呈正相关，与miR-27b-3p 相对表达量呈负相关。本研究创新性采用智能染色胃镜检查，结果提示临床可同时进行智能染色胃镜检查及外周血miR-183、miR-27b-3p检测，为胃癌诊断提供更全面、可靠的参考信息。

综上可知，外周血miR-183、miR-27b-3p 联合智能染色胃镜可提高胃癌早期诊断价值，实现早期诊疗。目前，miR-183、miR-27b-3p 调控胃癌的分子机制尚不明确，相关靶基因及信号通路是后续研究重点。