血清婆罗双树样基因-4联合AFP在原发性肝癌诊断中的应用价值*

袁小笋 张 蕾 马慧利 薛永飞 李长生 张敬伟 任中海

南阳市中心医院肿瘤内科二病区 (河南 南阳， 473000)

原发性肝癌(PHC)发病率居全球恶性肿瘤第4位，肿瘤相关死亡率居第2位[1]，PHC患者大多起病隐匿，患者往往因缺乏特异性临床症状而难以及时确诊和治疗，50%以上的患者确诊时已进展为晚期肿瘤，且大多伴有远处脏器转移，预后往往较差，5年生存率低于30%[2，3]，因此，对PHC患者早期诊断和及时干预至关重要。甲胎蛋白(AFP)是目前临床上用于诊断PHC的血清学标志物，研究显示，AFP单独诊断PHC的特异度在90%左右，但敏感度较低，尚不足70%，故而临床上亟需寻找一种诊断PHC具有较高敏感度和特异度的血清学标志物[4，5]。近年来发现婆罗双树样基因-4(SALL4)与肿瘤细胞的增殖、侵袭及远处转移等有关[6]。本研究调查PHC患者血清中SALL4的表达水平及其相关影响因素，进一步探讨SALL4单独及联合AFP用于诊断PHC中的临床效能。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 纳入2019年1月至2019年12月于南阳市中心医院就诊的70例PHC患者、40例乙型肝炎肝硬化(LC)患者和35例健康体检者作为研究对象。PHC组患者经过术后病理诊断，符合PHC诊疗规范(2017年版)[7]，临床资料完善，近3个月内未经过手术、化疗或靶向生物制剂治疗，且未合并其他原发性恶性肿瘤。LC组患者诊断符合既往乙型肝炎肝炎病史多年，通过肝脏B超或CT确诊。另选取我院体检中心无肝炎、肝硬化及恶性肿瘤的健康体检者作为对照组。3组研究对象在性别、年龄上比较差异无统计学意义，具有一定的可比性，见表1。所有研究对象及家属均知情同意，且签署知情同意协议书，本研究经过我院伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 临床及病理特征资料 PHC患者的临床资料如性别、年龄、HBsAg状态、肿瘤细胞分化程度、TNM分期、肿瘤大小、Child-Pugh分级和有无淋巴结转移及远处转移等信息均来源于住院病历。血清AFP、CEA和CA19-9水平均在我院检验科检测。

1.2.2 血清SALL4表达水平的检测 于清晨空腹抽取3组研究对象外周静脉血5 ml于抗凝管中，在常温下离心收集上层血清，并置于-80℃冰箱中保存。采用ELISA法检测3组研究对象血清SALL4的表达水平。血清SALL4检测试剂盒由北京博迈斯科技发展有限公司提供。所有操作步骤均严格按照ELISA试剂盒中的说明书执行，由南阳市中心医院检验科完成。

2 结果

2.1 研究对象一般资料比较 见表1。

表1 一般资料在研究对象中的比较

2.2 PHC患者血清SALL4水平与临床特征的关系 单因素分析结果显示，PHC患者血清SALL4水平与肿瘤细胞分化程度、TNM分期、Child-Pugh分级及是否存在淋巴结转移有关。见表2。

表2 PHC患者血清SALL4水平与临床-病理特征的相关性分析

2.3 PHC患者血清SALL4水平的多因素分析 Logistic回归分析结果显示，TNM分期、淋巴结转移、Child-Pugh分级均是PHC患者血清SALL4水平升高的危险因素。见表3。

表3 PHC患者血清SALL4表达水平的影响因素分析

2.4 血清SALL4联合AFP诊断PHC的临床效能 以PHC和LC两组患者SALL4及AFP水平为检验变量，以PHC患者SALL4及AFP水平为状态变量绘制ROC曲线，结果发现，血清SALL4表达水平诊断PHC的AUC为0.836(95%CI0.753～0.872)，当截断值为104.23 pg/ml时，敏感度和特异度分别为92.51%和76.94%；血清AFP表达水平诊断PHC的AUC为0.744(95%CI0.623～0.791)，当截断值为168.72 ng/ml时，敏感度和特异度分别为93.24%和63.16%；SALL4联合AFP诊断PHC的AUC为0.915(95%CI0.863～0.957)，敏感度和特异度分别为95.18%和90.04%。见图1。

图1 血清SALL4联合AFP诊断PHC的ROC曲线

3 讨论

人类SALL4基因主要位于第20号染色体q13.13-q13.2，长度约为18 000 bp，SALL4可通过调控肿瘤细胞中的关键致病基因及诱导相关信号通路的活化而参与多种肿瘤细胞的生长及局部侵袭[6]。鉴于目前国内关于PHC患者血清中SALL4表达水平的临床报道较少，本研究回顾性纳入我院PHC患者，检测PHC患者血清中SALL4表达水平及其影响因素，进一步探讨SALL4是否可作为PHC的一项血清学肿瘤标志物。本研究结果发现，与对照组和LC组相比，PHC组血清中SALL4表达水平显著升高，肿瘤细胞分化程度越低、TNM分期越高、Child-Pugh分级越高及存在淋巴结转移的患者血清中SALL4表达水平相对较高，提示SALL4可能在PHC的病情进展中扮演了重要作用。Han等[8]通过ELISA法证实，相对于LC及乙型肝炎肝炎患者，PHC患者血清中SALL4表达水平显著升高，且术后SALL4表达水平较术前显著降低；此外，Wang等[9]证实PHC患者癌组织中SALL4表达水平与癌旁组织相比同样显著升高，且与肿瘤细胞分化程度、TNM分期、肿瘤大小等有关，这一结论与本研究结果基本一致。在发病机制上，SALL4过表达可引起Wnt/β-catenin信号通路的活化而间接促进肝癌细胞的增殖与迁移，而当通过小干扰RNA抑制SALL4的表达后能显著诱导癌细胞的凋亡[10]；另一方面，刘海荣等[11]发现LINC00654mRNA表达水平在PHC癌组织中显著升高，且与不良预后密切有关，进一步采用生物信息学法证实SALL4参与PHC的发病机制可能与上调癌组织中的LINC 00654 mRNA的高表达有关。存在淋巴结转移、TNM分期及Child分级较高均是PHC预后不良的危险因素[7]，而本研究中采用Logistic回归分析证实TNM分期越高、存在淋巴结转移及Child-Pugh分级越高均是PHC患者血清SALL4水平升高的危险因素，提示SALL4高表达与PHC的不良预后有关。

为明确SALL4诊断PHC的临床效能，我们采用ROC曲线分析后证实SALL4在鉴别PHC和LC患者的临床效能显著，AUC为0.836(95%CI0.753～0.872)，当截断值为104.23 pg/ml时，敏感度和特异度分别为92.51%和76.94%，提示通过检测血清中SALL4蛋白表达水平对LC是否进展到肝癌具有显著的意义，我们认为SALL4可作为诊断PHC的一项血清学标志物。AFP是临床上用于诊断PHC的常用血清学标志物，但存在敏感度较低的缺陷。我们发现进一步采用SALL4联合AFP诊断PHC的临床效能更为显著，AUC为0.915(95%CI0.863～0.957)，敏感度和特异度分别为95.18%和90.04%，因此，SALL4联合AFP诊断PHC具有较高的价值。

综上所述，PHC患者血清中SALL4表达水平显著升高，SALL4可作为PHC的一项血清学标志物，SALL4高表达也与患者的不良预后显著相关，本研究提示SALL4可作为治疗PHC的一个靶向位点，然而SALL4在PHC中的作用及其如何调控下游基因、蛋白的表达尚不完全清楚，这也是日后我们进一步研究的方向。