2016-2020年北京市某医院金黄色葡萄球菌药敏结果分析
2021-11-01刘志远安屹然康利新张婷菊
刘志远,安屹然,康利新,张婷菊,赵 娟,潘 健*
(1.中国中医科学院广安门医院 检验科，北京100053；2.北京世青国际学校，北京100012)
金黄色葡萄球菌(S.aureus)是医院感染的常见病原菌之一,可引起肺炎、菌血症、心内膜炎、创口感染、泌尿系统感染等，严重时可危及患者生命，在老年患者、免疫力低下及长期住院患者中多见[1]。本研究回顾了2016-2020年中国中医科学院广安门医院分离金黄色葡萄球菌的临床标本情况、抗菌药物耐药情况，并观察了木犀草素对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的体外抗菌作用。
1 资料与方法
1.1 菌株收集2016-2020年期间中国中医科学院广安门医院分离的非重复S.aureus 254株(将7天内同一病人同一标本来源的分离株视为同一株菌)。质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC29213、大肠埃希菌ATCC8739。
1.3 木犀草素最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)随机选择16株MRSA菌株观察木犀草素的抗菌活性。将木犀草素以灭菌 M-H 肉汤倍比稀释32、16、…0.25 mg/mL 8个浓度于96孔板中，加菌液至最终菌液浓度5×105CFU/mL，放置在微量震荡仪震荡3 min,35℃过夜培养。能抑制细菌生长的最低浓度为MIC;每孔取菌液，划线法接种于血平板，无细菌生长的最小浓度即为药物MBC。
1.4 联合药敏试验将不同浓度的木犀草素和不同抗菌药物(庆大霉素、左氧氟沙星、头孢西丁)分别按棋盘法设计，两两组合加入 96 孔平板中，加菌液至最终菌液浓度5×105CFU/mL，35℃过夜培养，观察结果。记录单独应用两药的最低抑菌浓度MIC A和MIC B，并选择最佳组合效应时两药联合时各自的 MIC A+B，计算部分抑菌浓度指数(FICI),FICI=MIC A药联用/MIC A药单用+MIC B药联用/MIC B药单用。FICI≤0.5，协同作用；0.5
2 结果
2.1 不同标本来源金黄色葡萄球菌分离情况近5年S.aureus主要分离自痰、脓液、伤口分泌物等标本，见表1。
表1 金黄色葡萄球菌样本类型分布
2.2 2016-2020年金黄色葡萄球菌耐药率2016-2019年MRSA阳性率呈上升趋势，2020年则出现明显下降。除红霉素外，2020年其他抗菌药物的耐药率也有不同程度下降，见表2。
表2 2016-2020年金黄色葡萄球菌耐药率
2.3 木犀草素微量稀释法药敏结果ATCC29213最小抑菌浓度为0.25 mg/mL，16株临床分离S.aureus中，15株菌的木犀草素的最小抑菌浓度为0.25 mg/mL，1株为0.5 mg/mL。木犀草素对16株MRSA的最小杀菌浓度2株为0.5 mg/mL，6株为1 mg/mL,8株为2 mg/mL。
2.4 联合药敏试验随机选择了3株MRSA菌株，进行木犀草素和左氧氟沙星、木犀草素和庆大霉素、木犀草素和头孢西丁的联合药敏试验，木犀草素和左氧氟沙星、庆大霉素为无关作用，木犀草素和头孢西丁为相加作用(表3)。
表3 联合药敏试验结果
3 讨论
S.aureus是临床常见的病原菌之一，可引起多种感染。由于传统的微生物标本送检习惯，痰标本仍然是送检最多的标本，所以S.aureus以分离自痰标本居多[1-2]，本院情况类似，2016-2020年 S.aureus分离自痰液居多，其次是脓液、伤口分泌物。随着院感防控意识、抗菌药物规范使用意识的提高，标本送检结构逐步改进，伤口分泌物中的S.aureus所占比重逐年提高，中国细菌耐药监测研究2017-2018年的数据中，分泌物标本已经成为S.aureus的主要来源，其次是血液和痰液[3]。
随着抗生素的大量使用，导致S.aureus的耐药性升高，尤其是 MRSA 的出现，对临床的抗感染治疗带来挑战。但近年来我国抗菌药物管理日益严格，临床使用抗菌药物趋于规范，MRSA阳性率出现了下降的趋势[4]。我院MRSA分离情况2016-2019年呈上升趋势，2019年达到最高34.8%，2020年下降到22.7%(表2)，与CHINET中国细菌耐药监测数据MRSA下降的趋势一致。2020年S.aureus对其他抗生素如庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、复方新诺明、克林霉素、四环素的耐药率也明显下降。
近几年来，随着细菌耐药问题日益严峻，研究者开始探索可能替代或补充抗菌药物的一些制剂或方法，如抗生物膜活性的制剂生物表面活剂、磁性纳米颗粒、细菌素、组蛋白及一些天然药物成分等[5-6]。木犀草素是野菊花的有效成分之一，具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化等多种药理活性[7]。本研究通过微量肉汤稀释法也观察到木犀草素对临床分离MRSA菌株具有良好的抗菌作用，16株MRSA除1株MIC为0.5 mg/mL外，其他15株MIC 均为0.25 mg/mL，最小杀菌浓度在0.5-2 mg/mL之间。同时本研究中联合药敏试验结果提示木犀草素与庆大霉素、左氧氟沙星、头孢西丁均没有协同作用，其中与前两者表现为无关作用，仅与头孢西丁表现为相加作用。
综上所述，随着抗菌药物管理、使用的规范，S.aureus耐药率呈现下降趋势，在耐药性控制方面取得了一定的成效，提示加强细菌耐药性监测，结合医院感染预防控制措施，对控制耐药细菌的流行播散是行之有效的[4]。木犀草素对S.aureus的体外抗菌活性，直接证实了野菊花通过煎汤外洗或制膏外涂治疗疔疮痈肿的可行性、有效性。未来包括植物性药物在内的抗菌药物替代性疗法在解决细菌耐药问题上可能发挥重要作用。
