1，3-β-D葡聚糖检测与半乳甘露聚糖抗原检测试验诊断侵袭性真菌感染的临床价值分析

韩卓婷，黄 妹，林小菊，李木珍

广东医科大学附属第二医院，广东 湛江 524000

侵袭性真菌感染是指人体受到侵袭性真菌入侵，在器官、组织或血液中生长繁殖，并引起炎症反应的疾病和组织损伤，因早期缺乏诊断手段，临床诊断难度较大，病死率高达55%～80%［1-3］。病理学检查是诊断侵袭性真菌感染的金标准，虽诊断准确度较高，但因其为有创性检查，风险较大，易增加患者痛苦，患者及其家属难以接受，临床应用存在一定的限制。半乳甘露聚糖抗原检测（GM试验）与1，3-β-D葡聚糖检测（G试验）是快速诊断侵袭性真菌感染的实验室指标，具有无创、特异、敏感度等优势［4］，研究如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年2月—2019年7月广东医科大学附属第二医院接诊的84例疑似侵袭性真菌感染患者为研究对象，女28例，男56例；年龄20～86岁，平均年龄（56.78±2.34）岁。研究经医院伦理委员会审核批准。入组患者均签署知情同意书且临床资料完整。

1.2 试剂与仪器

GM试验：重庆恩鸣医疗设备公司的Senrise酶标仪，试剂盒购买自美国BioRad公司。G试验：Tol智能恒温仪GKT-10MSet动态真菌检测试剂盒和质控品、MB-80微生物动态快速检测系统，均购买自北京金山川科技发展公司。

1.3 方法

（1）G试验。使用一次性无热源、无菌真空采集管采集受检者3 ml静脉血，行10 min的3 000 r/min离心操作，取上清液。取0.1 ml上清液，放入含有0.9 ml样品处理液中，混匀后，孵育10 min，温度为70℃。用无热源的吸头取0.1 ml血清样品，加入无热平底试管（9 mm×65 mm）中，再加入反应主剂溶液0.1 ml，混匀，插入MB-80微生物快速动态检测系统中反应，自动检出1，3-β-D葡聚糖含量。严格按照试剂说明书进行操作。检测结果为＞100 pg/ml，则评定为阳性。（2）GM试验。在待测对照血清和300μL离心血清分别加入1.5 ml聚丙烯管中，并分别在试管中加入样本处理液100μL，充分混匀，在120℃温度下加热6 min，随后放入离心机中处理10 min，获取上清液。在GM抗体包被的微孔板中加入待测样本，孵育90 min后洗涤，术后加入四甲基联苯胺底物显色，加50μL终止液终止反应，在450 mm波长下用酶标仪测定样本与对照孔的OD值，换算血清学指数。样本OD值与临界值血清OD值比值为血清学指数。血清学指数I＞0.5，则评定为阳性。

1.4 观察指标

以病理学检查为金标准，分析GM试验、G试验以及并联（两项实验任一一项为阳性）检测、串联（两项试验均为阳性）检测侵袭性真菌感染效能：特异度、敏感度、准确度。以n表示总例数，a表示真阳性，b表示假阳性，c表示假阴性，d表示真阴性。准确度=（a+d）/n，敏感度=a/（a+c），特异度=d/（b+d）。

1.5 统计学方法

应用SPSS 21.0软件分析数据，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病理学检查

84例患者经病理学检查显示侵袭性真菌感染37例（44.05%），非侵袭性真菌感染47例（55.95%）。

2.2 侵袭性真菌感染、非侵袭性真菌感染患者G试验、GM试验结果

侵袭性真菌感染组G试验、GM试验的检测值高于非侵袭性真菌感染组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 侵袭性真菌感染、非侵袭性真菌感染患者G试验、GM试验结果对比（±s）

表1 侵袭性真菌感染、非侵袭性真菌感染患者G试验、GM试验结果对比（±s）

组别侵袭性真菌感染组（n=37）非侵袭性真菌感染组（n=47）tP G试验结果（pg/ml）243.68±68.26 23.10±8.65 21.966 0.000 GM试验结果0.55±0.21 0.25±0.10 8.638 0.000

2.3 G试验、GM试验诊断侵袭性真菌感染效能

G试验、GM试验并联检测的准确度和敏感度高于G试验、GM试验单一检测和串联检测，差异有统计学意义（P＜0.05）；G试验、GM试验并联检测特异度高于串联检测，差异有统计学意义（P＜0.05），而G试验、GM试验并联检测的特异度略高于G试验、GM试验单一检测，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2和表3。

表2 G试验、GM试验诊断侵袭性真菌感染结果 例

表3 G试验、GM试验诊断侵袭性真菌感染效能分析

3 讨论

近年来，因细胞毒性药物、广谱抗菌药物、糖皮质激素、免疫抑制剂的广泛应用以及大剂量X线照射、器官移植、侵入性检查和恶性肿瘤、尿毒症等慢性消耗性疾病的增加，侵袭性真菌感染患病率呈明显上升趋势［5］。侵袭性真菌感染早期无典型性症状体征，病情复杂且隐匿，诊断难度较大，易延误病情，预后较差。组织活检、影像学和真菌培养是检测侵袭性真菌感染的常用方式。组织活检为侵入性检查，而真菌培养耗时长，阳性率较低，具有滞后性，同时易受到环境污染，影响诊断准确性；影像学典型表现出现较晚，临床应用受到一定限制［6］。

1，3-β-D葡聚糖为丝状真菌和酵母菌，占真菌细胞壁成分超50%。除接合菌外，1，3-β-D葡聚糖存在于所有真菌细胞壁上，当真菌进入机体深部组织或血液后，经吞噬细胞的消化、吞噬等处理后，1，3-β-D葡聚糖可由细胞壁释放至血液及脑脊液、胸水、腹水等体液中，增加体内1，3-β-D葡聚糖含量，其是检测真菌感染的有效指标，可反映真菌感染情况［7］。半乳甘露聚糖是曲霉菌细胞壁的重要组成成分，当机体受到曲霉菌感染后，其能从菌丝顶端释放入血，其抗原可在血液中持续存在1～8周。半乳甘露聚糖抗原释放量与机体内菌量成正相关，可反映机体感染程度。本研究结果显示，侵袭性真菌感染组G试验、GM试验的检测值高于非侵袭性真菌感染组，提示G试验、GM试验均是诊断侵袭性真菌的有效手段。G试验、GM试验并联检测的准确度和敏感度高于G试验、GM试验单一检测和串联检测，检测特异度高于串联检测，而G试验、GM试验并联检测的特异度略高于G试验、GM试验单一检测，但无明显差异，提示G试验、GM试验联合检测可提高诊断准确度，指导治疗。G试验、GM试验检测物质与原理存在差异，且代谢规律不同，联合检测可起到优势互补作用，提高诊断准确性。

综上所述，G试验、GM试验均可有效鉴别侵袭性真菌感染，联合检测具有高敏感度和准确度，可指导治疗，改善预后，值得临床推广。