炮制辅料葡萄醋质量标准初步研究

姚美琪，张丽娟，赵翡翠,3

(1新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830011；2新疆乌鲁木齐市中医医院，乌鲁木齐 830002；3新疆医科大学第四临床医学院，乌鲁木齐 830000)

葡萄醋是以葡萄为原料，利用传统压榨发酵技术酿制的富有新疆地域特色的传统炮制辅料，具有清热燥湿、解毒止泻、驱虫等功效[1]。葡萄醋常用于炮制有毒或刺激性药物，如葡萄醋炒孜然，可调整药物干热之性，降低含油量、减轻对消化系统的刺激作用，增强其驱风散寒，通经，消肿，利尿等疗效[2]。葡萄醋还用作制剂辅料，用于制备蜜膏剂、合剂、糖浆剂等，如斯日坎吉本布祖热合剂，在治疗高脂血症，肝炎，胆囊炎等方面具有较好的疗效[3]。本课题组前期调研发现全疆各地在制作葡萄醋时所用葡萄品种、采集时间、发酵工艺有所不同，得到的葡萄醋成品无质量标准，导致在实际使用过程中无法保证其质量。本研究收集新疆14 批不同产地的葡萄醋样品，参照《中国药典》（四部）pH值测定法（通则0631）、相对密度测定法（通则0601）、固体总量测定法（通则3101 第二法），参照GB 18187-2000《酿造食醋》总酸测定法，采用《中国药典》（四部）HPLC 法（通则0512）法，分别测定14 批葡萄醋样品，从性状、pH 值、相对密度、固体总量及总酸、白藜芦醇和有机酸含量等方面，初步建立葡萄醋质量标准，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器1525 型高效液相色谱仪( 美国Waters 公司) ，Centra-20 型紫外-可见分光光度计( GBC 科学仪器有限公司) ，AG-135 型电子天平( 瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)，电热恒温水浴锅（北京永光明医疗仪器有限公司），电热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）。

1.2 试药白藜芦醇对照品(成都得思特生物技术有限公司，批号B20044），酒石酸对照品(成都得思特生物技术有限公司，批号B25642），琥珀酸对照品(成都得思特生物技术有限公司，批号B20534），苹果酸对照品(成都得思特生物技术有限公司，批号B20937），柠檬酸对照品(成都得思特生物技术有限公司，批号B21313），乙酸对照品(成都得思特生物技术有限公司，批号BWJ4140-2016）。14 批不同产地的葡萄醋样品[1 新疆恩萨尔药业有限公司；2 新疆自治区维吾尔医医院；3新疆麦迪森药业有限公司；4新疆和田市维吾尔医院；5 新疆克州维吾尔医院（克州1 号）；6 新疆克州维吾尔医院（克州2 号）；7 新疆吐鲁番美丽盖娅药店（吐鲁番1号）；8新疆吐鲁番美丽盖娅药店（吐鲁番2 号）；9 新疆阿克陶县维吾尔医院；10 新疆库车县维吾尔医院；11 新疆库车县爱丽西帕药店（库车1号）；12 新疆莎车县中草药药房（莎车1 号）；13 新疆莎车县中草药药房（莎车2号）；14新疆伊犁中草药药房]，以上样品经自治区维吾尔医院阿不都瓦尔·阿布拉克副主任药师鉴定为葡萄醋。

2 方法与结果

2.1 pH 值、相对密度、固体总量和总酸的测定参照2015 年版《中国药典》[4]和GB 18187-2000《酿造食醋》总酸测定法[5]测定14批不同产地葡萄醋的pH 值、相对密度、固体总量和总酸。不同产地葡萄醋样品pH值最高为4.60，最低为3.24，平均为3.29。将pH值标准设定为本实验测定最高pH 值增加10%，即20℃下不超过5.06。不同产地葡萄醋样品相对密度最高为1.024 g/mL，最低为1.002 g/mL，平均为1.013 g/mL。本研究相对密度值设定为本试验测定最高值增加10%，即20℃下不得超过1.126 g/mL。不同产地葡萄醋样品固体总量最高为1.019 g/L，最低为0.976 g/L，平均为1.003 g/L。本研究固定总量设定为本试验测定最高值增加10%，即20℃下不得超过1.121 g/L。不同产地葡萄醋样品总酸最高为8.14%，最低为3.26%，平均为5.97%。本研究总酸设定为本试验测定最低值下浮10%，即本品总酸不得少于2.93%，见表1。

表1 14批不同产地葡萄醋pH值、相对密度、固体总量和总酸测定结果

2.2 白藜芦醇的含量测定

2.2.1 色谱条件[6-9]XTerra C18色谱柱( 4.6 mm×250 mm，5 µm)；流动相：乙腈-水（70∶30）；柱温：30 ℃；检测波长：306 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 µL。

2.2.2 对照品溶液的配制 称取白藜芦醇对照品5 mg，加甲醇制成浓度为1mg/mL 的标准品溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的配制 取5 mL 葡萄醋样品，加甲醇定容至10 mL 棕色容量瓶，超声30 min，测定前经0.45 µm 滤膜过滤，操作过程中注意避光。

2.2.4 线性关系考察 称取白藜芦醇对照品5 mg 于棕色容量瓶中，加甲醇制成浓度为1 mg/mL 的标准品溶液。分别吸取该溶液0.1、0.2、0.4、0.8.、1.6 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，分别吸取上述溶液10 µL，过滤，注入高效液相色谱仪进行测定，以峰面积为纵坐标（Y），对照品溶液的质量浓度为横坐标（X）绘制标准曲线，得到回归方程：Y=16.206 831 5X-5.081 231 5，r=0.999 8，白藜芦醇浓度在0.25～3.00 mg范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度试验 量取葡萄醋样品50 mL，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，每次进样10 µL，连续重复进样6次，测定白藜芦醇峰面积，结果RSD=1.18%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 重复性试验 量取葡萄醋样品6 份，每份50 mL，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，进样10 µL，测定白藜芦醇峰面积，结果RSD=1.42%，表明本方法重复性良好。

2.2.7 稳定性试验 量取葡萄醋样品按“2.2.3”项下方法制备，放置于室温，分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h 进行测定，结果RSD=1.37%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.8 加样回收试验 量取葡萄醋样品按“2.3.3”项下方法制备6 份，各吸取1 mL 溶液，分别定量加入白藜芦醇对照品进行测定，结果平均加样回收率为101.13%，RSD=1.86%，表明本方法回收率较好。

2.2.9 样品含量测定 取14 批不同产地葡萄醋样品，按“2.2.3”项下方法测定，14 批不同产地葡萄醋中白黎芦酸的含量，见表2。根据14不同产地葡萄醋批样品的测定结果，取本试验的最低值下浮10% 左右，暂定葡萄醋中白藜芦醇含量不得低于1.75 mg/L。

表2 葡萄醋样品中白藜芦醇含量测定结果

2.3 有机酸的含量测定

2.3.1 色谱条件[10-14]XTerra C18色谱柱( 4.6 mm×250 mm，5 µm)；以甲醇-0.01 mol/L 磷酸氢二钾缓冲溶液（pH=2.6）(1∶99)作为流动相，柱温30℃，检测波长210 nm，流速1.0 mL/min，进样量10 µL。

2.3.2 对照品溶液的配制 精密称取酒石酸对照品、琥珀酸对照品、柠檬酸对照品、苹果酸对照品、乙酸对照品置于10 mL 容量瓶中，加甲醇配成浓度分别为0.30、0.30、0.50、0.50、5.00 mg/mL的混合对照品溶液。2.3.3 供试品溶液的配制 量取1 mL葡萄醋样品，用水定容至100 mL容量瓶中，用0.45 µm滤膜过滤。

2.3.4 线性关系考察 分别取酒石酸对照品、琥珀酸对照品、柠檬酸对照品、苹果酸对照品、乙酸对照品置于10 mL 容量瓶中，加甲醇配成浓度分别为0.30、0.30、0.50、0.50 、5.00 mg/mL 的混合对照品溶液。分别吸取该溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1 mL，分别置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度并摇匀，吸取上述溶液10 µL，过滤，注入高效液相色谱仪进行测定，以峰面积为纵坐标，对照品溶液的质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到酒石酸回归方程为Y=1.368 2X+0.236 9，（r2=0.999 2）；琥珀酸回归方程为Y=0.283 4X+0.895 7，（r2=0.998 4）；柠檬酸回归方程为Y=1.161 9X+0.304 1，（r2=0.998 0）；苹果酸的回归方程为Y=2.365 8X+0.246 0，（r2=0.999 3）；乙酸的回归方程为Y=8.394 6X+0.304 1，(r2=0.998 7)。

2.3.5 精密度试验 量取葡萄醋样品（1 新疆恩萨尔药业有限公司）50 mL，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，每次进样10 µL，连续重复进样6 次，测定酒石酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乙酸峰面积，结果RSD值分别为1.82%、1.34%、2.58%、1.71%、1.02%，表明仪器精密度良好。

2.3.6 重复性试验 量取葡萄醋样品（1 新疆恩萨尔药业有限公司）6份，每份50 mL，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，每次进样10 µL，测定酒石酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乙酸峰面积，结果RSD值分别为2.42%、1.45%、1.51%、2.55%、1.75%，表明方法重复性良好。

2.3.7 稳定性试验 量取葡萄醋样品（1 新疆恩萨尔药业有限公司），按“2.2.3”项下方法制备，放置于室温，分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h 进行测定测定酒石酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乙酸峰面积，结果RSD值分别为2.93%、2.51%、1.05%、1.92%、1.57%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.3.8 加样回收试验 取已知浓度的葡萄醋样品（1新疆恩萨尔药业有限公司）6 份，按“2.2.3”项下方法制备，分别精密加入酒石酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乙酸3.85、4.80、1.55、2.36、5.82 mg，依法测定，其平均回收率为102.13%，101.74%，101.09%，103.21%，102.99%，RSD 分别为1.86%、1.67%、2.49%、1.70%、1.05%，表明方法回收率良好。

2.3.9 样品含量测定 取14批不同产地葡萄醋样品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液各3份平行样，测定峰面积，根据标准曲线计算样品中各有机酸的含量见表3。根据测定结果，取本试验的最低值下浮10% 左右，暂定葡萄醋中酒石酸含量不得低于0.821 g/L，琥珀酸含量不得低于0.225 g/L，柠檬酸含量不得低于5.165 g/L，苹果酸含量不得低于1.853 g/L，乙酸含量不得低于17.410 g/L。

表3 14批不同产地葡萄醋样品中各有机酸含量/（g/L）

3 讨论

葡萄含有白藜芦醇、鞣质、齐墩果酸、黄酮、β-谷甾醇、SOD 等多种活性物质，具有滋补强壮、软坚驱寒、补肝利胆等作用，能够改善心脑血管循环、抗氧化、抗衰老、抗病毒、抗菌和增强免疫等方面的功效。不同产地、不同品种的葡萄有不同的药用价值。本研究通过对新疆14 批不同产地葡萄醋的研究发现，白藜芦醇属于多酚类化合物，见光易分解，样品前处理过程需避光，否则会造成白藜芦醇的分解，降低测量结果的准确性。在预实验中，将参考物质的标准溶液在200 nm～500 nm 波长范围进行紫外线扫描，确定306 nm 作为检测波长。本研究建立了炮制辅料葡萄醋质量标准，为今后进一步研究葡萄醋炮制机制奠定了理论基础。