铁皮石斛多糖软膏制备工艺及其质量标准研究

朱朋艳 乔 妙 刘海杨 张莹霜 朱强强 袁文娟1,* 王宣军1,

1.云南农业大学 普洱茶学教育部重点实验室，昆明 云南 650201；2.云南农业大学理学院，昆明 云南 650201；3.云南农业大学食品科学技术学院，昆明 云南 650201

铁皮石斛是兰科草本植物，集药用、食用、美容于一身的名贵中药材，可单方和配伍使用，与“雪莲、人参、首乌、茯苓、野灵芝、珍珠、冬虫夏草、苁蓉”并称为中华九大仙草[1]，主要分布在我国安徽、浙江、福建、云南等地[2]。目前，铁皮石斛收载于《中国药典》2020年版一部，具有益胃生津，滋阴清热之功效。用于热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软[4-5]。文献[3]报道其主要成分包括多糖、生物碱、联苄类、菲类化合物、黄酮类物质、氨基酸及微量元素等，其中铁皮石斛多糖类物质占41.1%[6]，除了增强免疫力和抗肿瘤作用外[7-8]，还具有清除自由基和抗脂质过氧化作用[9]、保湿[10]以及抑菌消炎等护肤功效[11]，可用于化妆品的开发[12-14]。

软膏剂是皮肤科常用制剂之一，具有良好的附着性、涂展性，使用方便，安全可靠[15]。本文利用铁皮石斛多糖为原料，以PEG400和PEG3350为基质，制备含铁皮石斛多糖的软膏，建立其质量控制方法，并对药物的稳定性进行了考察，为铁皮石斛多糖应用于化妆品提供前期基础。

1 仪器与材料

1.1 材料 铁皮石斛多糖(批号20190427，实验室自制)、PEG400(山东优索化工科技有限公司)、PEG3350(北京索莱宝科技有限公司)、硬脂醇(化妆品级)、甘油(北京索莱宝科技有限公司)、无水葡萄糖(分析纯)、苯酚(分析纯)、浓硫酸(分析纯 重庆川东化工有限公司)、三乙醇胺(分析纯)、苯氧乙醇(日化级)、薄荷油(日化级)；其他辅料均为药用规格或分析纯。

1.2 仪器 HITACHI/U-2910紫外分光光度计(天美中国科学仪器有限公司)，PHS-2F型pH计(上海力辰仪器科技有限公司)，HH-ZK4恒温水浴锅(巩义市予华仪器有限责任公司)，BSA224S-CW电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)，SIGR/3-18KS离心机(北京科誉兴业科技发展有限公司)，KBF-P240恒温恒湿箱(德国BINDER)。

2 方法与结果

2.1 软膏剂所用基质配比的研究

2.1.1 外观性状检测标准 软膏剂应均匀，细腻，具有适当的黏稠性，宜涂布于皮肤上或黏膜上并且无刺激性。均匀性是指取软膏约 1 g，置于表面光洁的玻璃板中间，小心再盖上同样大小的玻璃板，夹紧四周，对着日光观察，应无颗粒状，色泽均匀、细腻。

2.1.2 pH值测定 将1 g软膏稀释至10 mL去离子水中，用PHS-2F型pH计测量pH值。根据中国药典二部附录ⅥH规定的乳剂型基质pH要求，W/O型乳剂基质pH应小于8.5，由于此次配制的铁皮石斛软膏剂用于体表的涂抹，其基质pH值应与人体组织液pH值(7.0～7.4)相符合，故进行软膏剂配方筛选pH值应控制在7.0 ～ 7.4内。

2.1.3 黏度测定 使用NDJ-1型旋转黏度计，检测软膏剂的黏度。铁皮石斛多糖软膏用体表的涂抹，适宜黏度控制在102～105 mpas范围内。

2.1.4 软膏基质配比 选择改变PEG400和PEG3350的配比，按“2.2”项下软膏剂的制备方法制备。按上述检测方法检测软膏剂的各项指标。由表1所给出各组软膏剂各项指标结果，可知当两者比例为2∶1时，软膏黏度适宜，易于涂抹，因此确定该比例用于软膏的制备。

表1 软膏制备各项指标

2.2 软膏的制作 主药：铁皮石斛多糖浓缩粉；油相：PEG3350、PEG400、硬脂醇；水相：甘油、0.1%苯氧乙醇、0.02%三乙醇胺、0.5%薄荷脑、纯化水(自制)。在70 ℃恒温水浴条件下，将油相缓慢的加入水相中，以乳化机均质乳化1 h后，以少量多次的方式加入铁皮石斛多糖浓缩粉，搅拌至多糖完全溶解，充分搅拌均匀，紫外灭菌2h分装，即得，成品如图1所示。所得多糖软膏，质地细腻，涂展性好，稠度适宜，气味清香。

图1 铁皮石斛多糖软膏成品图

2.3 软膏多糖含量的测定

2.3.1 葡萄糖标准曲线的绘制 精密称取105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.0010 g至10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，制成100 μg/mL溶液储备液。分别精密量取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于具塞试管中，各自加水补至 1 mL，精密加入1 mL 5%苯酚(现配现用)，摇匀，再精密加入5 mL浓硫酸，摇匀，置沸水浴 30 min，取出放至室温，于488 nm波长测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得标准曲线方程为：y=0.0101x+0.0971，r2=0.9997。如图2所示测定的吸光度与葡萄糖浓度呈良好的线性关系。

图2 葡萄糖标准曲线

2.3.2 稳定性试验 取本品约1g(批号：20201223)，精密称定，于25 mL量瓶中，分别加乙醇20 mL，使完全溶解，加水定容至刻度，冷藏30 min 后，全部置于离心管中，10000 rpm离心 20 min，小心弃去上清液，沉淀加水溶解后，少量多次转移至100 mL容量瓶加水定容至刻度，摇匀；精密量取1 mL置于具塞试管中，精密加入1 mL 5%苯酚(现配现用)，摇匀，再精密加入5 mL浓硫酸，摇匀，置沸水浴30 min，取出，放冷至室温，置紫外分光光度计488 nm 波长测定吸光度值。结果RSD为3.4%，表明样品溶液在24 h内稳定。结果见表2。

表2 稳定性试验

2.3.3 重复性试验 分别同一批号软膏样品(批号20201223)约1.000 g，6份，精密称定，置 25 mL 容量瓶中，分别加乙醇20 mL，使完全溶解，其余操作同“2.3.2”项下，置紫外分光光度计488 nm波长测定吸光度值；计算DOP多糖含量平均值为4.7 mg/g；RSD为4.37%(n=6)，重复性实验符合要求。结果见表3。

表3 重复性试验 (n=6)

2.3.4 回收率试验 取同一批号软膏样品(批号：20201223)约0.500 g，6份，精密称定，置25 mL容量瓶中，精密加入1 mg/mL葡萄糖对照品溶液(2.5 mL)，氮气流下吹干，加20 mL乙醇，使完全溶解，其余操作同“2.3.2”项下，置紫外分光光度计488 nm 波长测定吸光度值；测得DOP多糖平均含量为107.8%，RSD为2.09%(n=6)表明该法回收率较好，符合要求。其结果见表4。

表4 回收率试验 (n=6)

2.4 软膏的稳定性考察

2.4.1 加速试验 取3批铁皮石斛多糖软膏样品(批号：20201103、20201107、20201113)置于恒温恒湿加速箱中，分别进行高温(60±2℃)、高湿(相对湿度90%±5%)和强光照射试验(人工光源；强度：4500±500lx)，于0 d、5 d、10 d取样进行测定DOP多糖含量测定。如图3所示，测定结果表明在高温、强光、高湿条件下，铁皮石斛多糖软膏中的含量无明显差异，表明该软膏具有较好的稳定性。

图3 不同条件下铁皮石斛软膏中多糖的稳定性

2.4.2 长期试验稳定实验 制备3批铁皮石斛多糖软膏(批号：20201103、20201107、20201113)置于恒温恒湿箱中进行加速试验，温度为30 ±2 ℃、相对湿度为65%±5%放置3个月，于0 d、30 d、60 d取样测定DOP含量，结果表明在该实验条件下，含量测定结果无明显差异，表明软膏该较稳定。其结果如图4所示。

图4 高温高湿下铁皮石斛软膏中多糖的稳定性

3 讨论

本研究以制剂外观性状、稳定性、pH、黏度及有效成分含量等作为考察指标，对制剂工艺的辅料等进行筛选，得到DOP软膏的最佳制备工艺条件；继而采用加速实验及稳定性实验考察制备所得软膏的稳定性。

3.1 检测波长的确定 铁皮石斛多糖在浓硫酸的作用下，水解、脱水成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，在488 nm处有最大吸收，吸收度与浓度成线性关系，可用于定量测定。

3.2 基质的选择 制备铁皮石斛多糖软膏时，考虑以PEG为基质的软膏成分简单，且操作方便。PEG稳定、不易变质，即使在高温状态也较稳定，且是良好的保湿剂。PEG3350水溶性好，比传统的油脂基质刺激小；且石斛多糖在这两种基质中有较好的溶解度；选用这两种基质制作的软膏具有良好的附着性、涂展性，使用方便，安全可靠。

3.3 pH的确定 研究中发现，当多糖软膏pH在6～8之间时，多糖含量具有较好的稳定性。pH较低或较高时，DOP含量会随之降低；考虑在酸性条件下，多糖容易发生水解反应；在碱性条件下，多糖可能存在烯醇化、异构化反应。且此次制备的铁皮石斛软膏用于体表的涂抹，其pH应与人体组织液的pH相近，因此，研究加入三乙醇胺调节软膏pH至7.0～7.5之间。

铁皮石斛多糖软膏最初的成品存在DOP分散不匀、颗粒较粗的现象，直接影响药物的吸收效果。故在制备时将DOP加少量乙醇溶解后配制，取得了较好的效果。成品均匀、细腻、无颗粒感。在处方中加入甘油起保湿作用，同时也有一定的防腐作用，保证了药品质量。此次研究制备的铁皮石斛多糖软膏，提供一种抑菌、抗氧化的护肤软膏，便于人们使用；并以铁皮石斛多糖含量作为此软膏剂的质量检测指标，采用分光光度法对其进行含量测定，快速准确，重现性好，为铁皮石斛软膏质量控制提供了有效的方法。