羟苯磺酸钙对肌酐检测的干扰效应评价

潘练华，麦爱芬，吕婉娴，何玉怡，冯振华，梁权辉

佛山市第一人民医院检验科,广东佛山 528000

血肌酐水平是临床用于监测患者肾小球滤过功能状态及进展的重要指标，对慢性肾炎、尿毒症等肾脏疾病的诊断和治疗发挥着重要作用。目前，临床常用的肌酐检测方法有肌氨酸氧化酶法(简称酶法)、碱性苦味酸法、高效液相色谱法等[1]，其中酶法具有测定结果稳定、重复性好、线性范围宽、较苦味酸法特异性好等优势，在临床检验中被广泛应用。但随着酶法的深入应用，研究者发现其检测过程会受一些药物的干扰，如羟苯磺酸钙、抗坏血酸、酚磺乙胺等[1]，其中羟苯磺酸钙作为微血管保护药，被广泛应用于糖尿病肾病、慢性肾功能不全等疾病治疗中。鉴于临床对结果质疑情况频现，且国内对此现象评价实验较少，本文通过添加定值羟苯磺酸钙干扰物到4种医学决定浓度的新鲜血清标本中，探讨新酶法、普通酶法和干化学法的3种不同肌酐检测试剂对不同浓度羟苯磺酸钙抗干扰能力，为临床疾病治疗提供参考[2-3]，避免出现由于方法学缺陷影响检验结果的情况。

1 材料与方法

1.1一般资料 选取本院肾内科及体检中心无羟苯磺酸钙药物用药史且当天完成检测无溶血、无乳糜、无黄疸、符合浓度要求的新鲜人血清标本20份作为待测血清标本。

1.2仪器与试剂 西门子ADVIA2400全自动生化分析仪、强生Vitros4600全自动生化免疫分析仪。中山标佳新酶法肌酐检测试剂(批号192830，试剂盒内配套校准品批号192830)，西门子普通酶法肌酐检测试剂(批号56140，校准品453025A)、强生干化学法肌酐检测试剂(批号153134996628，校准品0190)。羟苯磺酸钙(宁夏康亚药业有限公司，0.25 克/粒，国药准字：003982H00)。

1.3方法 (1)依据WS/T 416-2013干扰实验指南[4]，参考医学决定浓度、定量上下限，选取标本浓度40、141、530、1 000 μmol/L 4种肌酐浓度的新鲜标本。(2)制备羟苯磺酸钙干扰物原液浓度为696.4 mg/L，与生理盐水比例配制为50、100、150、200、250、300、350 mg/L的溶液。(3)在4种浓度的新鲜标本中，分别按9∶1的体积比例配置干扰物浓度，分别为0、5、10、15、20、25、30、35 mg/L。(4)应用3种肌酐检测试剂分别对混合后的血清标本重复检测3次，通过目测及散点图检查是否有缺失值和离群值；用各梯度测定均值减去最低浓度标本均值得出偏差值，以偏差值对干扰物浓度绘图，选定1/3允许总误差(4%)作为最大允许干扰。

1.4统计学处理 采用Excel2019软件和SPSS22.0软件对试验数据进行分析。采用回归方程及干扰效果图分析3种检测试剂对不同浓度梯度羟苯磺酸钙抗干扰的效果。

2 结 果

2.1肌酐浓度在40 μmol/L时的干扰剂量效应 血清标本肌酐浓度为40 μmol/L时，8种浓度梯度羟苯磺酸钙对其检测的干扰效果见图1。血清标本浓度为40 μmol/L时，新酶法试剂负偏差为0.07%～4.00%；干扰物浓度为5 mg/L时，普通酶法试剂最小负偏差为25.00%，干扰物浓度35 mg/L时，普通酶法试剂最大负偏差为64.17%；随着干扰物浓度增加，干化学法试剂负偏差依次为1.34%、5.35%、6.90%、9.13%、11.58%、11.14%、13.81%。新酶法在此浓度有优越的抗干扰能力。

图1 不同羟苯磺酸钙浓度对肌酐浓度40 μmol/L血清标本的剂量效应图

2.2肌酐浓度在141 μmol/L时的干扰剂量效应 血清标本肌酐浓度为141 μmol/L时，8种浓度梯度羟苯磺酸钙对其检测的干扰效果见图2。新酶法、普通酶法和干化学法试剂在羟苯磺酸钙浓度15 mg/L时负偏差分别为3.91%、29.67%、6.53%；只有新酶法试剂结果尚在最大允许干扰限内，普通酶法试剂结果已超过允许总误差。

图2 不同羟苯磺酸钙浓度对肌酐浓度141 μmol/L血清标本的剂量效应图

2.3肌酐浓度在530 μmol/L时的干扰剂量效应 血清标本肌酐浓度为530 μmol/L，8种浓度梯度羟苯磺酸钙对其检测的干扰效果见图3。干扰物浓度为5 mg/L时，新酶法试剂最小负偏差为0.76%，干扰物浓度为20 mg/L时，负偏差为3.75%；干扰物浓度为5 mg/L时，普通酶法试剂最小负偏差已达5.63%；干扰物浓度为5 mg/L时，干化学法试剂最小负偏差为0.31%，干扰物浓度为35 mg/L时，干化学法试剂最大负偏差为5.95%。

图3 不同羟苯磺酸钙浓度对血清肌酐浓度530 μmol/L的剂量效应图

2.4肌酐浓度在1 000 μmol/L时的干扰剂量效应 血清标本肌酐浓度为1 000 μmol/L时，8种浓度梯度羟苯磺酸钙对其检测的干扰效果见图4。随着羟苯磺酸钙浓度的增加，新酶法试剂的负偏差依次为1.27%、2.19%、3.21%、4.37%、5.74%、6.83%、8.45%；普通酶法试剂依次为3.21%、6.69%、9.09%、11.66%、14.29%、16.62%、18.60%，唯一一点在最大允许干扰限内；干化学法试剂依次为0.36%、1.40%、2.39%、3.02%、1.86%、4.40%、5.71%。在1 000 μmol/L肌酐浓度下，干化学法试剂展现良好的抗干扰能力。

图4 不同羟苯磺酸钙浓度对肌酐浓度1 000 μmol/L血清标本的剂量效应图

3 讨 论

在临床检测过程中，检测结果会受多重因素的影响，如检测试剂的性能、检测仪器稳定性及患者服用的药物等，识别特定物质对临床常见检测方法产生的偏差显得尤其重要。临床上，在全自动生化分析仪应用酶法检测血清肌酐时，发现羟苯磺酸钙会影响检测结果，出现结果假性下降的情况[5]，石文等[6]研究通过配对差异实验确认此干扰物质，肌酐水平的假性下降严重影响临床对患者病情进展的判断，为临床诊断带来困惑。检测方法的总分析误差可有3种主要来源：不精密度、方法特异性偏差、样品特异性偏差。本文中的羟苯磺酸钙对于酶法检测肌酐过程中造成负偏差的影响，是属于样品特异性偏差，目前大致有3种观点[7-9]：(1)酶法检测肌酐是基于肌酐酶、肌酸酶和肌氨酸氧化酶降解肌酐及其反应产物，然后通过偶联终点比色法反应检测肌氨酸氧化产生的H2O2，而羟苯磺酸钙的基本结构是二羟基苯环，它具有还原性，可能会消耗H2O2，从而产生负干扰；(2)羟苯磺酸钙可能与偶联终点比色法反应中的其他成分发生反应，从而减少生色基团的形成，使检测结果假性降低；(3)羟苯磺酸钙可能会影响生色基团的稳定性。血清肌酐水平可反映肾小球滤过功能，是衡量和监测肾功能最常用的指标之一[9]，内源性干扰如溶血、脂浊、黄疸等容易被检验人员关注，但外源性干扰如抗坏血酸、酚磺乙胺、羟苯磺酸钙等药物干扰较难被发现，探究其干扰机制、寻求更优检测方法是临床一线工作者的重任。

本文依据WS/T 416-2013干扰实验指南[4]，探讨羟苯磺酸钙药物对于新酶法、普通酶法和干化学法检测血清肌酐水平试剂的干扰剂量效应，旨在为临床提供干扰参考依据。作为一种常见的改善微循环血管保护药物[10-11]，羟苯磺酸钙药物稳态谷浓度为6.64 mg/L；服药500 mg后，药物浓度在2～3 h达峰值，峰浓度为15.00 mg/L[12-15]。以15.00 mg/L作为最大干扰物浓度进行剂量效应实验，新酶法试剂在检测过程中出现的负干扰控制在1/3总误差内；干化学法试剂对其负干扰效应控制在1/2总误差附近，且对于高浓度肌酐水平的标本，展现的抗干扰能力甚至优于新酶法；对于慢性肾炎、尿毒症等肾脏疾病患者，干化学法可作为首选检测方法。本研究结果显示，作为目前临床上常用的检测方法，普通酶法试剂基本无羟苯磺酸钙抗干扰能力，与之前国内研究结果是一致[14-15]，仅在肌酐浓度1 000 μmol/L和干扰物质5 mg/L下负偏差低于参考限。实验结果表明，对于羟苯磺酸钙带来严重的负性干扰，普通酶法检测试剂无法具备临床可接受的抗干扰能力，导致临床无法准确判断患者治疗效果；本院曾收到临床反馈同一时间抽取的血清检测肌酐，普通酶法和干化学法结果相差200 μmol/L，而患者有服用羟苯磺酸钙类药物史，这高度提示临床医生特别是肾内科医生在送检血肌酐时，应关注患者是否服用羟苯磺酸钙类药物，并应结合血尿素、胱抑素C、肾小球滤过率等指标[16]综合判断病情；同一医疗机构若可同时采用干化学法检测，应以干化学法结果为准。

新酶法试剂之所以具备抗干扰能力，在于试剂中添加了特殊物质如硫酸联氨、过氧乙酸、过氧丙酸等高分子过氧酸或碳酸钠，可针对性地与羟苯磺酸钙等药物进行反应，有效减少该类物质在后续显色反应中的干扰作用；而干化学自动生化分析仪使用干片试剂拥有多层膜结构，其扩散层可过滤大分子物质，将干扰效应降低。本研究结果提示，临床检验工作者除应关注饮食、标本采集、试验方式、实验条件等影响临床检验结果因素外，更应关注另一个非常重要的干扰因素：药物干扰，且需要了解不同干扰物剂量对不同检测系统和检测方法之间检验结果的差异性，逐步提高临床检验质量的重视程度。

综上所述，新酶法和普通酶法检测原理均为肌氨酸氧化酶法，但前者增加抗药物干扰能力，在临床服用羟苯磺酸钙血药峰浓度下检测肌酐浓度所产生负干扰效应在最大允许干扰限内，普通酶法肌酐试剂基本不具备抗干扰能力，容易造成使用类似药物史的患者出现肌酐结果假性下降的情况，阻碍临床对病情的正确判断，干化学法试剂在高肌酐浓度检测中抗干扰能力更为优越。