HBV前基因组RNA、甲胎蛋白异质体3和乙型肝炎X抗体水平与HBV所致肝癌的关系及对患者预后的预测*

郭振添，李 飞，莫海兴

东莞市人民医院检验科，广东东莞 523000

肝癌是临床较为常见的恶性肿瘤之一，目前认为肝癌的发病与肝硬化及肝炎病毒相关[1]。目前，在肝癌疾病进展的研究中，缺乏相应的敏感指标。而在对患者的疾病诊断中，常常由于对疾病的预测难度较大，造成疾病的进展。所以在临床治疗中，及时寻找积极有效的指标，对于疾病的诊断及治疗具有积极的意义[2]。在病毒学的研究中发现，乙型肝炎病毒(HBV)主要包括4个编码区，其中，在病毒编码区HBV X基因编码的HBV X蛋白对于病毒的蛋白质具有明显的调控作用[3]。HBV X抗体(HBxAb)被认为是HBV感染的早期标志。同时，HBxAb也可通过与机体的细胞因子及肿瘤坏死因子的相互协同作用，对肿瘤的进展发挥作用。HBV前基因组RNA(HBV-pgRNA)能够反映肝脏组织cccDNA的活性，而cccDNA是HBV感染后最早出现异常的标志物，但是在临床检测中，cccDNA的检测较为困难，而HBV-pgRNA的检测较为便捷，对于病毒导致的癌变具有明显的意义[4]。甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)对于肝癌的预测能力明显优于甲胎蛋白。在众多甲胎蛋白的亚型中，AFP-L3只能由肿瘤细胞进行分泌，被认为是诊断肝癌的高特异性指标[5]。本研究通过对血清HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平与HBV所致肝癌的关系及对患者预后的预测进行分析，为临床诊断提供科学依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2015年1月至2017年6月确诊的HBV所致肝癌患者60例作为肝癌组，其中男36例，女24例；年龄35～59岁，平均(45.66±2.15)岁；体质量指数(24.51±2.09)kg/cm2；TNM分期[6]：Ⅰ～Ⅱ期患者31例，Ⅲ～Ⅳ期患者29例；肝癌组织分化情况：高分化患者22例，中分化患者16例，低分化患者22例。另选择HBV所致肝硬化患者及单纯性乙型肝炎患者各60例作为肝硬化组和乙型肝炎组。肝硬化组中男34例，女26例；年龄35～57岁，平均(45.94±2.68)岁；体质量指数(24.40±2.20)kg/cm2。乙型肝炎组中男35例，女25例；年龄37～59岁，平均(45.78±2.49)岁；体质量指数(24.20±2.10)kg/cm2。3组患者的性别、年龄及体质量指数比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。所有患者均签署知情同意书，并经医院伦理委员会论证通过。纳入标准：(1)符合肝癌诊断标准[6]；(2)预计生存时间>6个月；(3)卡式评分(KPS)[7]≥70分。排除标准：(1)心、肝、肾功能严重不全；(2)存在交流障碍；(3)血常规异常；(4)不配合本研究方案。

1.2仪器与试剂 本研究采用的荧光定量PCR仪主要是由上海罗氏提供，实验试剂来自上海罗氏，操作流程严格按照说明书进行。使用美国Perkin Elmer生产的HBV-pgRNA试剂盒进行HBV-pgRNA水平检测。AFP-L3检测试剂来自北京热景生物技术公司，HBxAb水平检测试剂来自上海朗顿生物技术公司。

1.3方法 采集所有患者静脉血4 mL，6 000 r/min离心后，取上清液，采用亲和吸附离心法对患者的AFP-L3水平进行检测，采用酶联免疫吸附试验法对患者的HBxAb水平进行检测，采用磁珠法对血清的核酸RNA进行提取，采用Dnase Ⅰ酶进行DNA消化，采用荧光定量PCR对病毒核酸及内标进行反转录和扩增。

1.4观察指标

1.4.13组患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较 分别对肝癌组、肝硬化组及乙型肝炎组患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平进行比较。

1.4.2不同分化程度患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较 分别对高分化、中分化及低分化患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平进行比较。

1.4.3不同病理分期患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较 分别对TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平进行比较。

1.4.4不同预后患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较 对所有患者开展为期3年的随访，以患者的死亡作为终点事件，分析截至2020年6月生存患者及死亡患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平之间的差异，并进行比较。

2 结 果

2.13组患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较 3组患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平在3组患者之间两两比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；HBV-pgRNA、HBxAb水平从高到低依次为乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组，AFP-L3水平从高到低依次为肝癌组、肝硬化组、乙型肝炎组。见表1。

表1 3组患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较

2.2不同分化程度患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较 3组患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平在3组患者之间两两比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；HBV-pgRNA、HBxAb水平从高到低依次为低分化组、中分化组、高分化组，AFP-L3水平从高到低依次为高分化组、中分化组、低分化组。见表2。

表2 不同分化程度患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较

2.3不同病理分期患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较 Ⅰ～Ⅱ期患者的HBV-pgRNA、HBxAb水平明显高于Ⅲ～Ⅳ期，Ⅰ～Ⅱ期患者的AFP-L3水平明显低于Ⅲ～Ⅳ期，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 不同病理分期患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较

2.4不同生存情况患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较 生存组的HBV-pgRNA、HBxAb水平明显高于死亡组，生存组的AFP-L3水平明显低于死亡组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 不同生存情况患者的HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平比较

2.5相关性分析 HBV-pgRNA和HBxAb水平与肝癌患者的病理分期、组织分化及生存状态均呈负相关(r=-0.771～-0.441，P<0.05)，AFP-L3与肝癌患者的病理分期、组织分化及生存状态均呈正相关(r=0.339、0.521、0.664，P<0.05)。见表5。

表5 相关性分析

3 讨 论

由于肝癌临床症状较为隐匿，大多数肝癌患者确诊时已发展为中晚期，丧失手术机会，严重影响患者的生命安全。而常规的肿瘤标志物对肝癌患者的诊断缺乏明显的敏感性[8]，所以在临床工作中，及时寻找有效的肿瘤指标，对于提升疾病预后具有积极的意义。而在造成的肝癌患者的疾病进展中，病毒载量的升高势必会造成肝细胞的进一步损伤[9]。

有研究表明，HBxAb是HBV感染机体的早期重要指标，同时在慢性乙型肝炎患者体内持续存在[9]。在对基因水平的分析中，HBV X基因对于肝细胞的凋亡及细胞周期的改变具有指导作用。在本研究中，随着患者的肝细胞功能的不断改变甚至癌变，其HBxAb水平明显降低，而在肝癌患者的体内其水平处于最低。在不同严重程度患者中，随着患者的病理分期及组织分化能力升高，其HBxAb呈现上升趋势。有研究证实，随着肝癌的不断进展，患者机体的免疫功能呈现逐渐下降趋势[10]。随着免疫功能的下降，肿瘤细胞对于机体的免疫细胞的逃逸能力明显提高，可进一步促进肿瘤的发展[11]。段正军等[12]在对肝癌患者的HBxAb水平的分析中发现，随着疾病进展，患者的HBxAb水平明显下降，与本研究结果相互印证。

在HBV的不断感染下，机体的肝脏细胞表现为明显的肝纤维化甚至肝硬化，病毒的持续性复制是造成肝细胞功能改变的重要原因。在HBV的生命周期中，cccDNA的反转录是形成RNA的重要途径。而在对cccDNA水平的检测时，需要对患者进行肝穿刺活检，由于该检测方法的有创性，使其无法在临床中被广泛推广。近年来的研究发现，HBV-pgRNA与cccDNA水平具有明显的相关性[4]。通过对患者HBV-pgRNA水平的检测，可有效对cccDNA水平进行评估。在本研究中，随着患者疾病的进展，患者的HBV-pgRNA水平明显下降，分析认为，在疾病进展过程中，病毒的复制活性明显下降，血清乙型肝炎的表面抗原活性明显下降，分析原因可能是由于HBV对机体的明显性刺激作用，诱导机体产生免疫应答，进而清除表面抗原水平，而在此过程中，均会造成肝细胞的损伤，甚至癌变。潘美晨等[13]在对肝癌患者HBV-pgRNA水平分析中发现，随着患者肝细胞的癌变，其HBV-pgRNA水平明显下降，与本研究结果相互印证。

甲胎蛋白是临床肝癌诊断的重要标志物，有研究报道显示，甲胎蛋白水平的异常改变并不能作为肝癌患者诊断的依据，甲胎蛋白水平的异常改变与胃癌、肺癌及胰腺癌明显相关[14]。同时，在15%～58%的慢性乙型肝炎患者及11%～47%的肝硬化患者中均发现AFP水平异常升高，提示在临床治疗中，AFP对于肝癌的诊断缺乏特异性。AFP-L3在肝癌细胞中特异性分泌，随着机体癌症的不断进展，患者的AFP-L3水平明显升高。丰先明[15]对肝癌患者的AFP-L3水平进行分析，结果显示，随着患者的疾病进展，AFP-L3水平明显升高，与本研究结果相互印证。本研究的创新点在于希望在减少对患者损伤的前提下，提升患者的诊断能力。

综上所述，血清HBV-pgRNA、AFP-L3和HBxAb水平与HBV所致肝癌进展明显相关，同时，以上指标可作为患者生存预测的重要指标。