GC法测定他达拉非残留溶剂

聂忠莉，王海龙，王晓玲，高 华，张 勇，萧茂玲

(1.成都大学 食品与生物工程学院，四川 成都 610106； 2.成都克莱蒙医药科技有限公司，四川 成都 610041)

0 引 言

他达拉非是一种口服磷酸二酯酶V型(PDE5)抑制剂，用于治疗男性勃起功能障碍(MED).他达拉非为白色或类白色结晶性粉末，该化合物的合成路线主要以D-色氨酸和胡椒醛为原料[1]，在合成过程中使用了有机溶剂，包括异丙醇、乙腈、四氢呋喃和三乙胺.根据各溶剂性质和沸点的不同，参照相关标准的要求，本研究采用气相色谱法及残留溶剂测定法对异丙醇、乙腈、四氢呋喃与三乙胺在产品中的残留情况进行了研究[2-5].

1 材料与仪器

1.1 仪 器

7890A型气相色谱仪(安捷伦科技有限公司)；BP-210D型电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司).

1.2 材 料

异丙醇(批号，051180601,HPLC级)，购自上海星可高纯溶剂有限公司；乙睛(批号，LH40T105,HPLC级)，购自北京百灵威科技有限公司；四氢呋喃(批号,2017062001,HPLC级)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(批号，2019071001，HPLC级)，购自成都市诺尔施科技有限责任公司；三乙胺(批号，20170925，HPLC级)，购自天津市密欧化学试剂有限公司；他达拉非(批号，190501S、190502S，190503S)，购自旭辉制药有限公司.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷(或极性相近)为固定液的毛细管柱为色谱柱；柱温在50 ℃保持5min，再以30 ℃/min的速率升至240 ℃，维持5min；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为260 ℃，进样口温度为220 ℃；进样体积1 μL.

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液配制

精密称取异丙醇、乙腈、四氢呋喃和三乙胺适量，用N,N-二甲基甲酰胺定量稀释制成每1 mL约含异丙醇0.5 mg、乙腈0.041 mg、四氢呋喃0.072 mg和三乙胺0.032 mg的溶液，作为对照品溶液.

2.2.2 供试品溶液配制

取他达拉非适量，精密称定，用N,N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀释制成每1 mL约含100 mg的溶液，作为供试品溶液.

2.3 系统适用性试验

精密称取他达拉非约500 mg，加入各有机溶剂适量，再加N，N-二甲基甲酰胺稀释制成每1 mL约含他达拉非100 mg、异丙醇0.5 mg、乙腈0.041 mg、四氢呋喃0.072 mg和三乙胺0.032 mg的混合溶液作为系统适用性溶液.精密量取1 μL直接进样，连续测定6次，结果见表1～表4及图1.

表1 系统适用性试验的峰保留时间/min

表2 系统适用性试验的峰面积

表3 系统适用性试验的分离度

表4 系统适用性试验的拖尾因子

图1 系统适用性试验色谱图

由表1～表4及图1可知，在“2.1”色谱条件下重复测定6次的峰保留时间、峰面积、分离度与拖尾因子的参数均能到达验证要求，表明该条件的系统适用性良好.

2.4 检测限与定量限

取异丙醇、乙腈、四氢呋喃与三乙胺各适量，分别加乙醇溶解并稀释制成一定浓度的溶液，直接进样，记录色谱图，计算异丙醇、乙腈、四氢呋喃与三乙胺的检测限分别为0.468 ng、0.118 ng、0.034 ng与0.171 ng，定量限分别为1.093 ng、0.665 ng、0.327 ng与0.609 ng.

供试品进样浓度为100 mg/mL，异丙醇的限度浓度(0.5%)约相当于其定量限浓度的457倍，乙腈的限度浓度(0.041%)约相当于其定量限浓度的62倍，四氢呋喃的限度浓度(0.072%)约相当于其定量限浓度的220倍，三乙胺限度浓度(0.032%)约相当于定量限浓度的53倍，均满足检测灵敏度要求.

定量限浓度连续进样6次，各溶剂保留时间RSD均小于1.0%，峰面积的RSD均小于10%，表明定量限浓度供试品溶液的精密度实验结果较好.

2.5 线性范围

精密称取异丙醇、乙腈、四氢呋喃与三乙胺各适量，加N，N-二甲基甲酰胺稀释制成系列浓度的混合供试品溶液，精密量取1 μL直接进样，考察各溶剂浓度与峰面积的线性关系，并以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，用最小二乘法计算线性回归图.结果表明，在0.07～748.83 μg/mL范围内，异丙醇(Y=0.488 9X-0.882 5，R2=0.997 8)、乙腈(Y=0.437 9X+0.108 7，R2=0.997 1)、四氢呋喃(Y=0.518 4X+0.434 2，R2=0.999 5)与三乙胺(Y=0.630 8X+0.433 2，R2=0.999 0)的峰面积与浓度呈良好的线性关系.

2.6 回收率

分别精密称取异丙醇、乙腈、四氢呋喃与三乙胺各适量，加N，N-二甲基甲酰胺稀释制成每1 mL约含异丙醇5 mg、乙腈0.41 mg、四氢呋喃0.72 mg与三乙胺0.32 mg的混合储备液.

精密称取他达拉非约500 mg，称取9份，分成3组，每组分别精密加入混合储备液适量，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至5mL，制成各溶剂限度浓度50%、100%和150%的供试品溶液各3份，共9份，摇匀即得.

按照“2.1”色谱条件，精密量取上述各溶液1 μL，直接进样，测定各供试品溶液中溶剂的量.扣除他达拉非原料中溶剂的量，计算测得值与理论值接近的程度(见表5～表8)，结果表明，残留溶剂回收率满足要求.

表5 异丙醇回收率

表6 乙腈回收率

表7 四氢呋喃回收率

表8 三乙胺回收率

2.7 重复性

分别取6份他达拉非约500 mg，并分别加“2.6”项下的混合储备液适量，加N，N-二甲基甲酰胺稀释制成每1 mL约含他达拉非100 mg、异丙醇0.5 mg、乙腈0.041 mg、四氢呋喃0.072 mg与三乙胺0.032 mg的混合溶液，混匀，即得供试品溶液.分别取供试品溶液与“2.2.1”项下的对照品溶液各1 μL进样，记录色谱图，计算出异丙醇、乙腈、四氢呋喃与三乙胺的含量结果的RSD分别为1.00%、0.92%、0.85%与0.87%，表明方法的重复性好.

2.8 稳定性

使用“2.7”项下供试品溶液分别在0、4、8、12、24h进样，记录色谱图，统计异丙醇、乙腈、四氢呋喃与三乙胺的峰面积结果见表9.

表9 溶液稳定性实验结果

由表9可知，在24h内连续进样，成分峰面积在24h内基本无变化，供试品溶液稳定.

2.9 耐用性

取他达拉非各约500 mg ，共11份，精密称定，并分别加“2.6”项下的混合储备液适量，加N，N-二甲基甲酰胺稀释制成每1 mL约含他达拉非100 mg、异丙醇0.5 mg、乙腈0.041 mg、四氢呋喃0.072 mg与三乙胺0.032 mg的混合溶液，混匀，即得供试品溶液.分别取上述供试品溶液与“2.2.1”项下的对照品溶液各1 μL进样，微小改变色谱条件测定，记录色谱图，按外标法计算异丙醇、乙腈、四氢呋喃与三乙胺测得量及回收率，结果表明此方法耐用，结果见表10.

表10 耐用性实验结果/%

2.10 样品测定

分别取3批他达拉非样品，按“2.2”项下的方法配制对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行检测，记录色谱图，按外标法计算样品中异丙醇、乙腈、四氢呋喃与三乙胺的残留量.结果显示，批号190501S、190502S、190503S 3批他达拉非均分别检出约0.004%的异丙醇，约0.01%的四氢呋喃，乙腈与三乙胺均未检出.

3 讨 论

本研究结果显示，气相色谱法及残留溶剂测定法能有效、准确地测出他达拉非的残留溶剂，并规定他达拉非中异丙醇、乙腈、四氢呋喃和三乙胺的残留不得大于0.5%、0.041%、0.072%与0.032%，符合相关标准的规定[2].

他达拉非原料质量标准收载入《美国药典》和《欧洲药典》，但《美国药典》和《欧洲药典》中未对他达拉非残留溶剂进行控制，故在他达拉非原料的质量标准制定时，建议增加对残留溶剂的控制.