数字化流式形态学尿液分析仪复检规则建立的探讨

李 敏，杨斯桀，谢 楠，陈才艺，张 琛，孟庆昊，吴 霞，赵 飞，张为民，高 选，李 婷

山东大学附属生殖医院医学检验科/国家辅助生殖与优生工程技术研究中心/生殖内分泌教育部重点实验室(山东大学)/山东省生殖医学重点实验室，山东济南 250001

尿液分析是泌尿系统疾病早期诊断、病情评估及预后判断的重要检测项目。随着检测技术的不断提高，尿液分析方法不断升级，目前大部分有条件的医院选择全自动尿液分析仪进行尿液干化学和有形成分分析[1]。数字化流式形态学尿液分析仪因具有对尿液成分进行实时成像的功能而在医疗机构检验实验室中被广泛应用,但是其对尿液有形成分的识别结果与人工镜检的结果是否存在误差是实验室关注的重点,因此在数字化流式形态学尿液分析仪应用于临床前均应对其检测尿液有形成分的准确率进行验证。本实验室通过尿液分析复检规则的建立，纠正FUS2000全自动尿液分析仪(以下简称FUS2000)的结果误判，以提高其对尿液有形成分的检测准确性，减少漏诊率。

1 材料与方法

1.1标本来源 随机选取本院2020年3月1日至8月11日收治的接受辅助生殖技术助孕的不孕不育患者的尿液标本682份，排除泌尿系统疾病患者的尿液标本，要求标本均为新鲜中段尿，标本量大于12 mL，并在采集后2 h内完成检测。

1.2仪器与试剂 FUS2000及配套质控品、配套试剂及试纸条，奥林巴斯相差显微镜、盖玻片、载玻片、移液器。

1.3方法

1.3.1检测方法 首先确认FUS2000性能稳定，当日干化学质控及配套红细胞微粒质控合格(变异系数为6.5%)，然后再进行标本检测。每份尿液标本先采用FUS2000进行检测，并记录检测结果，人工分析FUS2000拍摄的尿液有形成分分类图像,根据有形成分的形态学特点、图像质量及杂质干扰等判断图像分类是否正确，对分类错误的图像进行纠正，记录纠正后的检测结果。取10 mL尿液标本，400×g离心5 min，去上清后留取0.2 mL沉渣混匀，用移液器取30 μL滴于载玻片上，加盖盖玻片后进行人工镜检。先用低倍镜观察全片，再用高倍镜观察细胞；细胞检测观察10个高倍视野，管型、结晶检测观察20个低倍视野。人工镜检采用双盲法，由2位有经验的检验人员同时进行，镜检项目包括红细胞、白细胞、管型、上皮细胞、结晶，以2名检验人员计数的平均值作为最终结果。

1.3.2结果判断 干化学潜血及白细胞阳性即判断为阳性。尿液有形成分阳性判断标准：红细胞>17个/μL，白细胞>28个/μL，上皮细胞>28个/μL，管型>1个/μL，结晶>28个/μL。人工镜检阳性判断标准：红细胞>3个/高倍视野，白细胞>5个/高倍视野，上皮细胞>8个/高倍视野，管型>1个/低倍视野，结晶>1个/低倍视野[2-3]。

1.4统计学处理 采用SPSS21.0软件进行数据分析，计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1FUS2000检测结果与人工镜检结果比较 FUS2000纠正前、后检测结果与人工镜检结果见表1。以人工镜检结果为“金标准”，FUS2000纠正前检测红细胞、白细胞、上皮细胞、管型及结晶的真阳性率分别为70.3%、40.9%、70.7%、42.9%、30.8%；FUS2000纠正后检测红细胞、白细胞、上皮细胞、管型及结晶的真阳性率分别为83.8%、84.8%、81.3%、28.6%、35.9%，纠正后检测红细胞、白细胞、上皮细胞及结晶的真阳性率较纠正前提高。见表2。

表1 FUS2000纠正前、后检测结果与人工镜检结果(n)

表2 FUS2000纠正前、后检测各项目的效能(%)

2.2FUS2000纠正前、后结果比较 FUS2000纠正前、后的红细胞、白细胞、上皮细胞、管型及结晶的检测结果比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 FUS2000纠正前、后检测结果比较(n)

2.3不同方法下尿液红细胞及白细胞检测阳性率 单独采用干化学进行检测时，红细胞阳性率为13.3%，白细胞阳性率为25.4%；干化学与有形成分分析联合时纠正前红细胞阳性率为18.9%，白细胞阳性率为25.5%，纠正后红细胞阳性率为15.0%，白细胞阳性率为25.4%；人工镜检红细胞阳性率为5.4%，白细胞阳性率为9.7%。见表4。

表4 不同方法下尿液红细胞及白细胞检测阳性率[n=682,n(%)]

2.4FUS2000复检规则的初步建立 根据人工镜检结果及FUS2000检测的准确率，制订FUS2000的复检规则，复检规则制订充分考虑干化学与有形成分分析不符的情况，FUS2000对不同成分的检测准确率，以及仪器采集图像清晰度是否影响判断3个方面，共制订出8条复检规则,见表5。

表5 触犯规则及处理措施

2.5尿液复检率 按照复检规则计算尿液各有形成分的复检率，其中红细胞由于假阳性率较高及与干化学结果不符的标本数量较多，复检率为28.3%，高于其他有形成分；白细胞、管型及结晶的复检率分别为9.1%、5.9%及6.7%，4种有形成分综合复检率为10.0%。

3 讨 论

《医学实验室质量和能力认可准则在体液学检验领域的应用说明：CNAS-CL02-A002》和《尿液物理学、化学及沉渣分析：WS-T 229-2002》中规定实验室应制订尿液有形成分分析仪的显微镜复检程序，实验室应根据尿液分析仪的原理、患者的人群分布制订合适的复检规则。本研究在实验过程中干化学质控和配套红细胞微粒质控品质控均在控，变异系数为6.5%，符合尿液有形成分分析仪(数字成像自动识别)行业标准要求(变异系数≤15%)[4]，这说明本实验室使用的FUS2000性能稳定。FUS2000对尿液有形成分实时拍照，通过计算机屏幕可直观地看到有形成分图像，但仪器识别分类是否准确，目前尚没有合适的质控品，仍然需要人工镜检来判断。

本研究中，以人工镜检结果为“金标准”，采用FUS2000检测682份临床尿液标本时其识别不同有形成分的真阳性率高低不一,纠正前原始结果的真阳性率低于弓长丽[5]报道的同型设备。FUS2000纠正前、后红细胞、白细胞、上皮细胞、管型及结晶的检测结果比较，差异有统计学意义(P<0.05)，说明FUS2000存在对尿液有形成分的误判，这些误判可通过人工审核仪器的分类图像进行纠正。红细胞误判发生率较高的原因是将体积较小、边缘规则或细胞内颗粒较少的白细胞误判为红细胞，草酸钙结晶和尿酸钙结晶与红细胞体积相似也容易被误判为红细胞，还有部分真菌孢子体积和轮廓与红细胞相似也容易误判为红细胞，这些误判导致了红细胞的假阳性率较高。纠正前FUS2000检测白细胞的真阳性率仅为40.9%，经人工纠正后真阳性率提高至84.8%，除了少部分白细胞因为体积较小、颗粒较少被误判为红细胞外，大部分白细胞由于形状不规则或细胞模糊不容易判断而被归入未分类区，但由于这部分标本原始图像中白细胞数量已经达到阳性判断标准，所以即使较多白细胞未被准确分类也并未影响白细胞阳性标本的最终检测结果。上皮细胞由于特征比较明显，FUS2000识别准确率相对较高，经人工纠正后基本可达到准确分类。FUS2000对管型的识别能力较低，纠正前真阳性率仅为42.9%，且人工纠正也未能提高识别能力，造成管型检测结果为假阳性的主要原因为上皮细胞的折叠或黏液丝会干扰人工判断，因此仪器的识别能力不会因人工纠正得到改善。纠正前，FUS2000检测结晶的真阳性率最低，仅为30.8%，其判断为阳性的结晶主要为方形草酸钙结晶，其余形状的结晶均被归类为红细胞或未分类区；此外，纠正前FUS2000检测结晶的假阳性率为4.7%，造成假阳性结果的主要原因是尿液中的药物残渣及成堆的杂质被误判为结晶，这种误判基本可以通过人工识别进行纠正。本研究发现，FUS2000对以上有形成分的误判原因与相同检测原理的IQ200尿沉渣分析仪的误判原因较为相似，而且误判的类型存在较高的一致性[6-7]。本研究所有的标本同时进行尿液干化学和有形成分分析，其中尿液干化学检测出的红细胞阳性率高于有形成分分析的阳性率(纠正前、后)；干化学检测出的白细胞阳性率明显高于有形成分分析的白细胞阳性率(纠正前、后)，考虑可能与干化学检测的是白细胞酯酶，不仅包含完整的白细胞，还可检测到白细胞破裂后释放的白细胞酯酶，所以导致干化学检测时白细胞阳性率较高；其次是因为白细胞的识别误判，将不规则的白细胞、白细胞碎片等归入未分类区，间接造成白细胞有形成分分析的阳性率降低。综合以上问题，建立数字化流式形态学尿液分析仪复检规则时应联合干化学和有形成分分析的结果，并充分考虑仪器误判和图片模糊的问题，将人工纠正和沉渣镜检同时作为复检的方法，这不仅可以保证结果的准确性，而且还可以充分利用仪器的优势提高检测效率[8]。

本研究的尿液标本来源于不孕不育患者，存在其他基础疾病的患者非常少，这部分患者的诊疗流程相对单一，患者按照医嘱在进入助孕周期前进行生理状态下的尿液检测，不受患者助孕周期促排卵药物的影响。所有患者进行尿液检测前临床医生均对其生理周期及用药情况进行取样前指导，以排除这些因素对尿液成分的影响[9]，所以本研究中尿液检测结果有形成分含量非常低，真阴性率高，这类标本与综合医院各类不同疾病患者的尿液标本相比，经FUS2000检测后复检率相对较低，仪器检测效率高。本研究由于纳入研究对象的特殊性，阳性数据少，所以分析有形成分识别准确性时存在一定的局限性。尿液分析作为主要的疾病筛查基础项目，结果的准确与否会影响疾病的诊断、鉴别及严重程度判断，不同原理的尿液有形成分分析仪各有利弊，实验室应该根据检测仪器的不同和检测人群的不同制订合适的复检规则，以提高灵敏度，减少漏检率，从而满足临床大样本检测需求。