miR-181b在胃癌患者血清中的水平变化及临床意义

段 莎，刘 倩

陕西省人民医院消化内二科，陕西西安 710068

胃癌是危害人类健康的常见恶性肿瘤，近年来，其发病率呈上升趋势[1]。约80%的胃癌患者在初次诊断时就已经处于晚期，胃癌治疗以手术切除为主，但术后患者预后较差，5年生存率不足10%[2]。虽然传统的内镜和微创检查在胃癌的诊断中被广泛应用，但这些方法具有侵入性，不适合定期筛查[3]。及时、准确的早期诊断是降低胃癌病死率的重要手段。微小RNA(miRNA)是一种单链非编码RNA，其易于检测，在血液和细胞中特异性表达，被用于多种疾病的诊断[4]。严庆波等[5]研究发现，微小RNA-181b(miR-181b)在胃癌组织中表达上调，具有较高的诊断及预后评估价值，但胃癌组织学检查具有侵入性，不宜作为常规筛查手段。目前，关于胃癌患者血清miR-181b水平的变化及临床意义研究较少，因此，本研究探讨了miR-181b在胃癌患者血清中的水平及其诊断价值，以期为胃癌临床诊疗提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2018年3月至2020年9月收治的65例胃癌患者作为胃癌组，其中男41例，女24例；年龄27～79岁，平均(50.79±8.35)岁；TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期22例，Ⅲ期25例，Ⅳ期8例。选取28例胃癌前病变患者作为癌前病变组，其中男17例，女11例；年龄25～78岁，平均(52.26±8.95)岁。另选取同期于本院体检的健康者32例作为健康组，其中男20例，女12例；年龄22～81岁，平均(51.44±8.32)岁。纳入标准：(1)胃癌与胃癌前病变的诊断均经胃镜和病理学检查证实[6]；(2)均未接受化疗、放疗和免疫治疗等抗肿瘤治疗。排除标准：(1)合并其他消化系统肿瘤的患者；(2)合并血液病、免疫系统疾病、结缔组织病的患者；(3)原发性肝肾功能损伤患者；(4)近3个月内有手术史、急慢性感染的患者；(5)合并心脏疾病患者。本研究获得本院医学伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1标本采集 于清晨抽取研究对象空腹静脉血8 mL，置于无抗凝剂的采血管中，3 000 r/min离心15 min，收集上层血清备用。

1.2.2血清miR-181b检测 取血清标本，加入1 mL Trizol提取剂，提取总RNA。按照反转录试剂盒(美国Thermo公司)说明书将RNA反转录为cDNA。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清miR-181b水平。miR-181b上游引物：5′-AACATTCATTGCTGTCGGTGGG-3′；下游引物：5′-GCGAGCACAGAATTAATACGACTCAC-3′。以U6为内参，U6上游引物：5′-CTCGCATCGCGTAAGGCACA-3′；下游引物：5′-AACGCTACTCGAATTAGCGT-3′。引物由上海金唯智生物科技有限公司合成。严格依据qRT-PCR试剂盒(美国Thermo公司)说明书进行操作，配制反应物体系。反应条件：96 ℃预变性5 min，96 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35个循环，上机进行PCR扩增。采用2-ΔΔct法计算血清miR-181b水平。

1.2.3血清癌胚抗原(CEA)检测 取血清标本，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测研究对象血清CEA水平。严格按照人CEA ELISA试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)说明书进行操作，采用酶标仪(美国Thermo公司)检测标本在450 nm处的吸光度值，制作标准曲线，计算CEA水平。

1.3观察指标 (1)比较胃癌组、癌前病变组和健康组血清miR-181b、CEA水平；(2)分析胃癌患者miR-181b、CEA水平与临床病理特征(性别、年龄、TNM分期、淋巴结转移、远处转移、组织学分型、病理分型、肿瘤最大径、分化程度)的关系；(3)分析胃癌患者血清miR-181b水平与CEA水平的相关性；(4)分析血清miR-181b、CEA水平对胃癌的诊断效能。

2 结 果

2.1各组血清miR-181b、CEA水平比较 胃癌组血清miR-181b、CEA水平高于健康组和癌前病变组(P<0.05)；癌前病变组血清miR-181b、CEA水平高于健康组(P<0.05)，见表1。

表1 各组血清miR-181b、CEA水平比较

2.2血清miR-181b、CEA水平与胃癌患者临床病理特征的关系 血清miR-181b、CEA水平与胃癌患者TNM分期、有无淋巴结转移、有无远处转移、病理分型、肿瘤最大径、分化程度有关(P<0.05)，与性别、年龄、组织学分型无关(P>0.05)，见表2。

表2 血清miR-181b、CEA水平与胃癌患者临床病理特征的关系

2.3胃癌患者血清miR-181b水平与CEA水平的相关性 Pearson相关分析显示，胃癌患者血清miR-181b水平与CEA水平呈正相关(r=0.554，P<0.001)。

2.4血清miR-181b、CEA对胃癌的诊断价值 血清miR-181b诊断胃癌的曲线下面积(AUC)为0.873，灵敏度为90.6%，特异度为79.1%，均高于CEA，见表3、图1。

表3 血清miR-181b、CEA对胃癌的诊断效能

图1 血清miR-181b、CEA诊断胃癌的ROC曲线

3 讨 论

胃癌是由癌基因和原癌基因突变、DNA甲基化、非编码RNA异常表达等多种因素共同作用的结果[7]。人体液中含有稳定表达的miRNA，可调控人体40%的基因表达[8]。在病理过程中，miRNA异常表达可通过调控相关基因的表达，对疾病的发展和预后产生重要影响。目前，miRNA已被发现在多种肿瘤中具有诊断或预后评估价值[9]。研究表明，胃癌患者血清miR-181b-5p的表达改变，是胃癌诊断的潜在生物标志物[10]。miR-181b在胃癌细胞中高表达，能够抑制胃癌细胞中抑癌基因的表达，上调核因子κB(NF-κB)活性，并最终导致胃癌细胞的恶性转化，参与胃癌的发生、发展[11]。

本研究结果显示，胃癌患者血清miR-181b水平高于健康者与胃癌前病变患者，而胃癌前病变患者血清miR-181b水平高于健康者，表明miR-181b高表达可能与胃癌的发生和发展有关。有研究发现，多种miRNA在胃癌、胰腺癌组织中的水平高于正常组织，且淋巴结转移与miRNA水平呈正相关[12]。miRNA可通过碱基配对与靶基因结合，有效调控基因转录后表达，参与肿瘤的发生。在非小细胞肺癌中，miR-181b表达上调，靶向调控PTEN/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(AKT)信号通路，下调自噬，促进癌细胞生长和转移，并抑制癌细胞凋亡和上皮间质转化，发挥癌基因作用[13]。本研究发现，miR-181b水平与胃癌患者TNM分期、有无淋巴结转移、有无远处转移、病理分型、肿瘤最大径、分化程度有关，与李伟等[14]的研究结果相似，其认为miR-181b可能通过提高PI3K/AKT等相关信号通路活性，促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭，抑制胃癌细胞凋亡、上皮间质转化，并促使胃癌细胞向淋巴结和远处转移。已有研究表明，胃癌细胞分化程度与转移能力呈负相关[15]。本研究证实，低分化的胃癌患者血清miR-181b水平高于中、高分化的胃癌患者，提示miR-181b可能通过抑制胃癌细胞分化，促进胃癌发展。CEA是一种酸性糖蛋白，作为常见的肿瘤标志物，其在胃癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤中高表达，临床上常将CEA与其他肿瘤标志物联合检测用于消化道相关恶性肿瘤的诊断[16-17]。本研究通过ROC曲线评估miR-181b对胃癌的诊断价值，结果显示，其诊断胃癌的灵敏度和特异度分别为90.6%和79.1%，AUC为0.873，明显高于CEA，表明血清miR-181b对胃癌具有较高的诊断价值，可用于胃癌早期诊断。

综上所述，miR-181b在胃癌患者血清中高表达，且与胃癌的发生、发展有关，还可作为胃癌早期诊断的潜在标志物。