亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与血栓弹力图在胎儿不良妊娠结局中的应用价值*

伦瑞花，乔 静，张 欣，张晓科，田 军，王仁存，庞新丰

河南省焦作市妇幼保健院：1.检验科；2.儿科一区；3.医学遗传与产前诊断科；4.产科一区；5.输血科，河南焦作 454000

胎儿不良妊娠结局主要包括流产、死胎、早产、低出生体质量儿、巨大儿、新生儿先天性异常及死亡等。导致胎儿不良妊娠结局的原因包括父母双方或一方外周血染色体异常，孕产妇生殖系统或功能异常，妊娠期高血压、糖尿病、甲状腺功能异常等妊娠期合并症，以及孕妇血液高凝状态等[1]。亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是人体内叶酸代谢和同型半胱氨酸代谢作用酶，与脱氧核糖核酸甲基化关系紧密[2]。MTHFR基因多态性可使MTHFR的生理活性减低，发生同型半胱氨酸代谢异常[3]，引起体内叶酸水平减少，并发生高同型半胱氨酸血症，高凝状态下，引起微血管栓塞、胎儿发育受限，诱发不良妊娠结局[4]。目前，关于MTHFR基因多态性与高凝状态导致胎儿不良妊娠结局的相关研究甚少。本研究对发生胎儿不良妊娠结局的孕产妇进行MTHFR基因多态性与血栓弹力图指标检测，并分析其临床意义，以期为临床诊治提供理论依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年5月至2020年10月于本院就诊的发生胎儿不良妊娠结局的孕产妇100例作为研究组，年龄22～35岁。纳入标准：无近亲结婚；外周血染色体核型正常。排除标准：孕产妇生殖系统结构或功能异常；合并妊娠期高血压、糖尿病、甲状腺功能异常等妊娠期合并症。选取同期本院60例健康体检育龄期女性(有正常妊娠史)作为对照组，年龄21～35岁。

1.2方法

1.2.1MTHFR C677T、A1298C基因多态性检测 采用荧光定量PCR检测MTHFR C677T、A1298C基因单核苷酸多态性。反应体系为10 μL，包含1 μL基因组DNA(20 ng/μL)，5 μL Taqman Universal Master Mix，0.5 μL Taqman-MGB探针，3.5 μL去离子水。反应条件：95 ℃预变性10 min，92 ℃变性15 s，60 ℃延伸1 min，20个循环；89 ℃变性15 s，60 ℃延伸90 s，30个循环。反应完成后，在ABI 7900荧光定量PCR 仪上读取样品孔中的终点荧光，利用分析软件确定基因分型结果。

1.2.2血栓弹力图检测 采集外周静脉血1.8 mL，加入含3.2%枸橼酸钠抗凝剂0.2 mL的真空管中，轻柔混匀后送检，检测在2 h内完成。检测方法为粘度测定法，采用宝锐生物BVCA-1型血栓弹力图仪及配套的试剂及质控品，模式设置为普通杯检测，按照试剂说明书进行操作。血栓弹力图参数包括反应时间(R)、凝固时间(K)、凝固角(α角)、血凝块形成的最大振幅(MA)。

1.2.3常规凝血指标检测 采用希森美康CS5100全自动凝血检测仪及配套试剂检测常规凝血指标[凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)]，检测前进行室内质控，检测过程按试剂说明书进行操作。

2 结 果

2.1两组MTHFR C677T、A1298C基因型分布情况比较 纳入研究对象的基因型、等位基因频数分布符合哈迪-温伯格平衡定律。研究组与对照组C677T基因型中TT型所占比例比较，差异有统计学意义(P<0.05)，而CC、CT型比较，差异无统计学意义(P>0.05)。A1298C基因型中AA、AC、CC型所占比例比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组MTHFR C677T、A1298C基因型分布情况比较[n(%)]

2.2两组MTHFR C677T、A1298C等位基因分布情况比较 研究组与对照组C677T T、C等位基因所占比例比较，差异有统计学意义(P<0.05)；研究组与对照组A1298C A、C等位基因所占比例比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 两组MTHFR C677T、A1298C等位基因分布情况比较[n(%)]

2.3研究组MTHFR C677T基因型与胎儿不良妊娠结局的关系 C677T基因型中，TT型与CC+CT型携带者出现低出生体质量儿、早产的比例比较，差异无统计学意义(P>0.05)；发生流产、死胎、新生儿先天性异常的比例比较，差异有统计学意义(P<0.05)。TT型携带者的胎儿不良妊娠结局发生率明显高于CC+CT型携带者，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 研究组MTHFR C677T基因型与胎儿不良妊娠结局的关系[n(%)]

2.4研究组MTHFR C677T基因型与血栓弹力图及常规凝血指标的关系 C677T基因型中，TT型与CC+CT型携带者PT、APTT、FIB水平及R比较，差异无统计学意义(P>0.05)，K、α角、MA比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 研究组MTHFR C677T基因型与血栓弹力图及常规凝血指标的关系

2.5血栓弹力图各参数诊断MTHFR C677T基因TT型携带者发生胎儿不良妊娠结局的价值 ROC曲线分析结果显示，MA诊断MTHFR C677T基因TT型携带者发生胎儿不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)为0.856，高于R、K及α角的AUC，具有较高的诊断效能。见表5。

表5 血栓弹力图各参数诊断MTHFR C677T基因TT型携带者发生胎儿不良妊娠结局的效能

3 讨 论

C677T突变是MTHFR基因最常见的错义突变[5]，其能使MTHFR活性降低，导致叶酸代谢受到影响。有研究发现，MTHFR基因多态性与妊娠10周后的胎儿不良妊娠结局有关，特别是与妊娠20 周后的非复发性流产之间存在相关性[6]。高同型半胱氨酸血症增加了妊娠期胎盘微血管血栓的形成风险。通常认为血液流速低容易造成母胎连接处血栓形成，引起胎盘出现相应改变，常见的不良妊娠结局有早产、流产、妊娠期高血压合并子痫前期、胎儿生长受限及胎盘早剥等[7]。本研究结果显示，研究组与对照组C677T基因型中TT型所占比例比较，差异有统计学意义(P<0.05)，说明TT型与胎儿不良妊娠结局有关；进一步分析两组等位基因分布情况发现，研究组与对照组C677T T、C等位基因所占比例比较，差异有统计学意义(P<0.05)。研究显示，携带T等位基因可能是导致胎儿不良妊娠结局的原因[8]。进一步分析C677T基因多态性与胎儿不良妊娠结局间的关系，结果显示，TT型携带者发生流产、死胎、新生儿先天性异常的比例高于CC+CT型携带者；TT型携带者的胎儿不良妊娠结局发生率明显高于CC+CT型携带者，差异有统计学意义(P<0.05)。提示C677T基因TT型可能是导致胎儿不良妊娠结局的重要因素。

发生胎儿不良妊娠结局的孕产妇血液通常为高凝状态，容易形成血管微血栓，导致胎盘血液循环异常，造成早产、胎盘发育停止、胎盘早剥、胎死宫内等情况[9]。孕产妇血液高凝状态的程度与胎儿不良妊娠结局的发生率呈正相关[10]。在发生胎儿不良妊娠结局的孕产妇中，MTHFR C677T基因TT型与CC+CT型携带者PT、APTT、FIB水平及R比较，差异无统计学意义(P>0.05)，而K、α角、MA比较，差异有统计学意义(P<0.05)，说明常规凝血指标水平与发生胎儿不良妊娠结局孕产妇的MTHFR C677T基因多态性无明显关系;而血栓弹力图参数更能有效反映孕产妇因MTHFR C677T基因多态性而引起的凝血功能异常[11]。采用ROC曲线分析血栓弹力图各参数诊断MTHFR C677T基因TT型携带者发生胎儿不良妊娠结局的价值，结果显示，MA诊断MTHFR C677T基因TT型携带者发生胎儿不良妊娠结局的AUC为0.856，高于R、K及α角的AUC，具有较高的诊断效能。MA是反映血小板聚集功能的指标，血小板功能或数量异常都有可能造成MA水平异常。血栓弹力图比常规凝血指标能更早地检测出机体病理性高凝状态及血栓形成倾向[12]，因此，对于MTHFR C677T基因TT型携带者临床上可考虑结合血栓弹力图检测，提高对孕产妇发生胎儿不良妊娠结局的预测能力[13]。

综上所述，MTHFR C677T基因TT型与孕产妇发生胎儿不良妊娠结局有关，血栓弹力图相关参数中MA诊断MTHFR C677T基因TT型携带者发生胎儿不良妊娠结局的价值较高。