LC-MS/MS法快速检测白酒中10种甜味剂

2021-10-18勇艳华边海涛

大连民族大学学报 2021年3期

勇艳华，刘杨，边海涛，李莉

(大连市检验检测认证技术服务中心大连市食品检验检测院，辽宁大连 116630)

甜味剂赋予食品甜味，对于食品工业而言是一类重要的食品添加剂，尤其是安全性高、无营养价值、无热量或极低热量的高倍甜味剂更是被广泛使用。根据中国现行GB 2760-2014《食品添加剂使用标准》的规定，发酵酒中可以限量使用纽甜(葡萄酒除外)和三氯蔗糖，配制酒中甜蜜素、三氯蔗糖和糖精可以限量使用。合理合法正常使用甜味剂是安全的，但近年仍有超范围、超限量使用甜味剂的不合格酒出现。甜蜜素、糖精、安赛蜜这三种非能量型甜味剂过量都会对人体器官造成损伤[1]。

目前，甜味剂的检测方法有液相色谱法[2-3]，离子色谱法[4-5]，气相色谱法[6-7]，气相色谱—质谱法[8-9]，液相色谱—质谱/质谱法[10-14]，但是检测酒中甜味剂常用液相色谱—质谱/质谱法，检测项目集中在安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、纽甜、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、甜菊糖苷，没有同时检测安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、纽甜、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、甜菊糖苷、甜菊双糖苷、爱德万甜的报道。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱-串联质谱仪(1290/Agilent 6490，美国Agilent公司)，涡旋混合器，Milli-QDirecet 8 全自动超纯水机(美国Millipore公司)，Poroshell 120 EC-C18 4.6 mm×100 mm，2.7μm，美国Agilent公司)。

实验所用试剂：乙腈(色谱纯)、甲酸(色谱纯)。实验用水为超纯水。标准物质：安赛蜜、糖精钠、甜蜜素(99.9%)、纽甜(98%)、三氯蔗糖(99.8%)、阿斯巴甜(99.0%)、阿力甜(98%)、甜菊糖苷(99.86%)、甜菊双糖苷(98.55%)、爱德万甜标准品(纯度均≥97%)。

1.2 方法

1.2.1 标准溶液的配制

分别称取0.01g左右(精确至0.000 1g)标准品用甲醇溶解并定容至100 ml，-18 ℃冷冻保存。准确吸取上述各标准储备液0.1 ml于100 ml容量瓶中，用甲醇释至刻度配制成浓度100 μg·ml-1的混合标准储备液，4 ℃冷藏保存。用20%甲醇溶液将混合标准储备液逐级稀释至100 μg·L-1、80 μg·L-1、60 μg·L-1、40 μg·L-1、20 μg·L-1和10 μg·L-1的混合标准溶液。

1.2.2 样品前处理

将白酒试样混合均匀直接过0.2 μm微孔有机滤膜，待测定。如阳性，则根据实际浓度用纯水适当稀释至线性范围内，过0.2 μm微孔有机滤膜，待测定。

1.2.3 添加回收实验

以空白酒基质为代表，添加100 μg·ml-1的10种甜味剂混合标准工作溶液，静置1 h，按1.2.2节所述方法进行前处理。

1.2.4 色谱条件

色谱柱：Poroshell 120EC-C18；柱温：室温；流动相：A为甲醇，B为水(含0.1%甲酸)；梯度洗脱程序：0～0.5min，15%A；0.5～10 min，15%～95%A；10～11 min，95%A；11.5 min，15%A；11.5～13 min，15%A。流速：0.3 ml·min-1；进样体积：2μl。

1.2.5 质谱参数

电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正负同时扫描；毛细管电压：3500 kV；检测方式：多反应监测(MRM)；离子源温度：200 ℃；去溶剂气温度：300 ℃；去溶剂气：氮气80 L·h-1；锥孔气：氮气70 L·h-1。其他参数详见表1。

表1 10种甜味剂的质谱检测参数及液相保留时间

2 结果与讨论

2.1 样品前处理方法的选择

考察了是否蒸发酒精对检测结果准确性的影响，直接过滤上机对检测结果的准确性没有影响，蒸发去除酒精需要时间故选择直接过滤上机进行筛查，能够快速地对样品定性。如果筛查结果为阳性，再跟据实际浓度进行稀释检测。

2.2 液相条件的选择

10种甜味剂的结构决定了这类物质可以在反相色谱上获得分离，采用C18色谱柱，最终确定1.2.4节所述梯度洗脱下，在13 min内可获得10种甜味剂最佳峰形和良好分离，达到快速分析。10种甜味剂提取离子MRM谱图如图1。

图1 10种甜味剂提取离子MRM谱图

2.3 线性范围及检出限

10种甜味剂标准溶液线性范围为10～100 μg·L-1，在该范围内其浓度与峰面积成线性相关。10种甜味剂的标准曲线线性方程及相关系数见表2。利用低浓度添加回收确定本方法检出限10种甜味剂均为10 μg·kg-1。此方法的检出限低于GB 5009.97-2016中甜蜜素的检出限0.03 mg·kg-1，也低于SN/T 3538-2013中甜蜜素、安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜、阿力甜和纽甜六种甜味剂的测定低限1.0 mg·kg-1。

表2 10种甜味剂线性方程和相关系数

2.4 回收率和精密度

用不含有10种甜味剂的空白白酒做基质进行加标试验，分别添加10 μg·kg-1、30 μg·kg-1和90μg·kg-1的混合标准溶液，以标准曲线外标法计算测定结果，回收率以测出量对理论添加量的百分比值计。每个水平进行6次平行实验，以测出量的相对标准偏差RSD表示方法精密度，结果见表3。3个水平的添加回收实验，均获得好的回收率。