一起由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒的调查分析

尚月梅，陈国利⋆，杨艳梅，张贺

（1.新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市疾病预防控制中心，新疆 乌鲁木齐 830026；2.新疆维吾尔自治区沙依巴克区妇幼保健服务中心，新疆 乌鲁木齐 830006）

0 引言

葡萄球菌广泛分布于自然界，在空气、水、尘埃、食物、污水及粪便中均可检出，绝大多数对人不致病，少数可引起人或动物化脓性感染，其中以金黄色葡萄球菌致病力最强。相关数据调查显示：大约32%的金黄色葡萄球菌寄生在各类食物中且具有极强的繁殖能力，能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质肠毒素[1]，肠毒素具有耐高温的特点，120℃加热20 min不能将其破坏[2]。金黄色葡萄球菌产生的肠毒素是引起食物中毒的主要原因。近年来，我国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件在全国已占据第四位。20%~25%的细菌性食物中毒病例是由金黄色葡萄球菌引起的。因此，加强食物中毒样品中金黄色葡萄球菌及肠毒素检测具有重要的现实意义。

2020年10月21日，某市某学校陆续发现11名学生出现腹痛、腹泻、呕吐等症状，根据根据流行病学调查分析疑似细菌性食物中毒，随即将剩余食品进行采样，并送往实验室进行检测。根据实验室检测结果分析，证实为一起金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒。

1 研究样品

1.1 样品来源。留取食物样本35份、呕吐物4份。样品在采集后4h内送达实验室进行检验。

1.2 标准菌株。金黄色葡萄球菌（ATCC 25922）购于广东省微生物安全工程技术研究开发中心。

1.3 仪器设备。高压灭菌器、 恒温培养箱、生物安全柜、法国梅里埃全自动微生物生化鉴定系统（VITEK 2 –compact）、显微镜、酶标仪、BioMerieux Vitek公司的细菌浊仪、BD-MAX多重核酸检测系统。

1.4 试剂。金黄色葡萄球菌显色培养基（科玛嘉）、血平板（郑州安图）、GPI鉴定卡（法国梅里埃）、7.5%氯化钠肉汤（北京陆桥）、冻干血浆（北京陆桥）、金黄色葡萄球菌核酸实时荧光PCR试剂盒（北京卓诚惠生）、金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E型核酸检测荧光PCR试剂盒（北京生科原）、金黄色葡萄球菌ELISA法试剂盒（德国拜发）。

2 检验方法

2.1 分离培养。检验方法采用国家标准《食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》GB4789.10-2016。食品样品经7.5%氯化钠肉汤增菌，接种血平板和金黄色葡萄球菌显色培养基平板，挑取典型菌落做血浆凝固酶实验，血浆凝固酶阳性的菌株再进行全自动微生物生化鉴定系统鉴定。

2.2 荧光定量PCR法。样品经7.5%氯化钠肉汤增菌，取增菌液离心，弃去上清液，加80 ul无菌水，充分混匀振荡，金属浴100℃+10 min，13000 r/min离心10 min，取上清液进行试验，设定程序，进行扩增。

2.3 肠毒素的鉴定。分别用ELISA法和荧光PCR法进行肠毒素分型检测比对。

2.3.1 PCR方法：使用生科原金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E型核酸检测试剂盒进行检测。取纯菌于80 ul无菌水中，充分混匀振荡，金属浴100℃+10 min，13000 r/min离心10 min，取上清液进行试验，设定程序，进行扩增。

2.3.2 ELISA法：使用德国拜发金黄色葡萄球菌肠毒素分型检测试剂盒进行分型检测。取纯菌于BHI脑心浸出液肉汤隔夜增菌，5 min/3500 g离心，培养物上层液体进行无菌过滤，每孔取100 ul滤液进行检测，经加样、孵育、洗板等操作，测量吸光度值。

3 结果

3.1 分离培养法及荧光定量法。通过对35份食物样本和4份呕吐物样本进行分离培养法及荧光定量法检测，4份食物样本及4份呕吐物均检测出金黄色葡萄球菌，其余样本均未检测出目标菌，因呕吐物样本量不足，无法计数，只做了定性检测。金黄色葡萄球菌计数及荧光定量法Ct值见表1。

表1 2种不同金黄色葡萄球菌的方法检测结果

3.2 肠毒素检测结果。对检测出8份样本中的金黄色葡萄球菌进行肠毒素分型实验，采用了2中不同的方法，分别为PCR方法和ELISA法，结果每份样本均检出A、E型肠毒素，结果见表2。

表2 2种不同肠毒素的方法检测结果

4 讨论

食源性疾病已成为我国头号食品安全问题[3]。食物中毒是常见的食源性疾病之一，是仅次于传染病疫情的突发公共卫生事件，学校食堂是发生集体食物中毒的高风险场所。金黄色葡萄球菌及肠毒素是导致食物中毒的重要致病因素，严重威胁着人体健康，随着食品安全问题的逐渐深入，金黄色葡萄球菌及肠毒索检测已经受到世界卫生组织格外关注的重点工作。在暴发事件调查中，可通过检测产毒株或肠毒素以确定病因[4]。此次食物中毒事件中，食堂外环境因及时卫生清洁工作，故没有采到样，只在食物和呕吐物中分离出金黄色葡萄球菌。根据实验室结果，判断这是一起由金黄色葡萄球菌肠毒素污染食物所致的聚集性食源性疾病。因此，日常烹饪饮食时，应该严格注意食品的安全卫生，注意对熟食的保存，长时期放置的食品，应该小心食用。同时还应该提高食物中毒预防意识、规避污染源，防止操作不当对食品造成的污染。建议学校应建立健全食品安全管理制度；在食品安全管理上，从进货、贮藏、加工、销售各个环节严加管理，制定各项管理制度，做好各项登记记录，严格按照制度执行，并按期进行督查，做好食品卫生工作，防止食物中毒的发生[5]。

本实验采用了2种不同的检测手段检测金黄色葡萄球菌（国标方法及荧光定量PCR法），两种方法都检测出了目标菌，但各有利弊。PCR法用了食品增菌液直接做荧光定量PCR法，24 h即出结果，能快速找到引起突发公共卫生事件的原因，但不能准确检测出食物中金黄色葡萄球菌的污染程度，而国标法能弥补这点不足。

本实验还采样了2种不同的检测手段检测金黄色葡萄球菌肠毒素，荧光定量PCR法能直接从分离出的金黄色葡萄球菌检测出肠毒素，而ELISA法需要将分离出的金黄色葡萄球菌在BHI脑心浸出液肉汤中隔夜增菌后离心，再进行检测，操作步骤较繁琐，实验周期较长。

本实验利用不同检测方法处理了一起由金葡菌引起的食物中毒事件，通过不同方法的比较，总结出了更快更有效的检测手段，为乌鲁木齐市金黄色葡萄球菌的日常监测和相关疫情的处理打下了良好的基础。