探讨不同方法对新生儿溶血病诊断阳性率的影响*

张生吉，卓家余，孟晓蓉，夏红梅，陈 毅

(重庆市长寿区人民医院：1.输血科；2.产科；3.护理部，重庆 401220)

新生儿溶血病(HDN)的主要病因[1]是母婴的红细胞血型不相合，这时母体的免疫系统被婴儿的红细胞致敏而产生相关IgG类抗体，该抗体通过胎盘进入婴儿血液循环系统，造成新生儿(胎儿)红细胞破坏，从而导致贫血，是儿科中最常见的急性溶血性疾病，严重时可危及新生儿生命或引发核黄疸等后遗症。ABO-HDN是我国最常见的HDN种类，Rh及其他血型系统不合引起者相对较少。本研究的目的是研究不同方法(微柱凝胶法和传统式试管法)对新生儿溶血病诊断阳性率的影响，探讨夫妇血型、孕妇血型抗体筛选及抗体效价测定与新生儿溶血病的关系及产后新生儿溶血病的确认与溶血程度的关系，为临床提供更加有效的预报母婴血型不合HDN的检测方法。

1 资料与方法

1.1资料

1.1.1一般资料 收集重庆市长寿区人民医院2019年5月至2020年10月可疑新生儿溶血病患儿277例,平均黄疸出现时间(1.86±0.85)d，平均贫血症状出现时间(2.00±0.91)d，抽血最早为出生后1 h，最晚为出生后10 d。通过检测新生儿及其母亲血清相关指标,探讨新生儿溶血三项试验、血清总胆红素水平及IgG抗体效价与溶血程度的关系。

1.1.2HDN诊断标准 母婴血型不合；新生儿血清胆红素水平升高；新生儿溶血三项试验均为阴性判为“不可证实为HDN”，仅直抗、游离试验单项阳性判为“可疑为HDN”，仅放散试验阳性或任何2项以上阳性判为“可证实为HDN”[2]。

1.1.3纳入及排除标准 孕妇血型为O型RhD阳性，丈夫血型为A、B、AB，新生儿血型为非O，母婴血型不符；新生儿自出生后黄疸出现早，且进行性加重，有贫血或溶血的证据，孕妇家属同意此次研究内容且愿意配合，排除筛查孕妇身体不健康，存在妊娠期营养不良、妊娠异常及并发症，排除其他异常患儿，经医院伦理委员会批准。孕妇血清IgG抗体的效价大于64的新生儿标本为足月生产且排除其他异常的患儿出生后48 h内送检血样。同时送检脐带血1份。检测新生儿ABO、Rh血型，新生儿三项试验；对HDN患儿脐血进行间接胆红素测定。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂 上海润普生物技术有限公司的专用离心机(序列号：24312011258)、孵育器(序列号：24562011454)；上海润普生物技术有限公司生产的ABO正反定型及RH血型检测卡(批号：10200202)、广谱抗人球蛋白卡(IgG+C3d，批号：10200904)、样本释放剂(2-Me，批号：10210101)、样本释放剂(酸放散，批号：10200201)；上海血液生物医药有限责任公司生产的人ABO血型反定型用红细胞试剂(批号：20200613)。

1.2.2检测方法 产前分别采集孕妇外周静脉乙二胺四乙酸二钠(EDTA)抗凝血3～5 mL，丈夫静脉抗凝血2 mL，及时送检。采用微柱凝胶法[3-4]检测夫妇ABO、Rh血型；并同步采用试管法及微柱凝胶法进行间接抗人球蛋白试验测定夫妇血型不合孕妇体内的IgG抗体效价。产后：采集新生儿血样3～5 mL，EDTA抗凝，采用微柱凝胶卡进行血型测定、HDN三项试验即红细胞直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、抗体释放试验，操作参照《全国临床检验操作规程》[5]及试剂厂商提供的说明书操作，同期对HDN患儿脐血进行间接胆红素测定。

2 结 果

2.1新生儿溶血三项试验结果分析 277例新生儿中，A型血135例，B型血142例。经过溶血三项试验结果发现，微柱凝胶法与传统试管法两种方法比较差异有统计学意义(P=0.016)。由于放散试验是溶血三项试验中敏感度最高的，阳性即可确证为ABO-HDN，所以综合溶血三项试验结果，最终判定ABO-HDN病例数量，微柱凝胶法检出率为60.64%，传统式试管法检出率仅为35.74%。采用微柱凝胶法检测，与试管法相比判断结果更直观，减少了肉眼判断结果时的人为误差。2种方法比较差异有统计学意义(P=0.009)。见表1。

表1 ABO系HDN检测结果

2.2血型与HDN阳性确诊率相关性 在HDN患儿的血型分布中发现，直抗试验中A型血婴儿阳性62例、B型58例，游离试验中A型血婴儿阳性71例、B型65例，放散试验中A型血婴儿阳性85例、B型99例，A型血婴儿的发病率高于B型血婴儿,差异有统计学意义(P=0.019)。

2.3抗体效价与HDN发生率关系 孕妇IgG抗体效价小于或等于1∶32的新生儿HDN发生率为6.67%，IgG抗体效价1∶64时，HDN发生率为11.54%，差异有统计学意义(Z=-8.796，P=0.008),随着母体抗体效价的升高，新生儿ABO-HDN发生率增加。见表2。

表2 孕妇IgG抗体效价与新生儿HDN发生率相关性

2.4血清总胆红素测定结果分析 溶血阴性新生儿血清总胆红素量为(123.20±8.86)μmol/L，而溶血三项阳性患儿平均血清总胆红素量为(278.84±66.57)μmol/L，溶血两项阳性患儿平均血清总胆红素量为(248.53±52.18)μmol/L；溶血三项试验阳性患儿与溶血阴性新生儿相比，血清总胆红素水平明显升高，且差异有统计学意义(t=11.163,P=0.011)。

3 讨 论

HDN指母婴血型不合引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病。该病主要临床症状是新生儿出现进行性加深的黄疸、不同程度的贫血、肝脾肿大,严重者可有水肿、核黄疸后遗症,甚至死亡。HDN主要由ABO和Rh 2种血型系统引起,在预产期对HDN监测可为早防、早治提供依据,对优生优育、提高婴儿生存质量具有重要的现实意义。随着人们对血型系统免疫学认识的逐步深入及分子生物学和实验室检验技术的进步,HDN的早期检查及预测越来越受重视,产前的各种检测方法始终是该领域的研究热点。

本试验分析了孕妇血型抗体筛选及抗体效价测定与新生儿溶血病的关系及产后新生儿溶血病的确认与溶血程度的关系。试验数据表明，孕妇IgG抗体效价(微柱凝胶卡法)≥1∶256时，新生儿发病率明显增高，母亲血清IgG抗体与HDN发生率呈正相关，母亲血清IgG抗体效价的检测可以帮助判断HDN的发生、发展和治疗。在HDN患儿的血型分布中发现，直抗试验中A型血婴儿阳性62例、B型58例，游离试验中A型血婴儿阳性71例、B型65例，放散试验中A型血婴儿阳性85例、B型99例，A型血婴儿的发病率高于B型血婴儿,差异有统计学意义(P=0.019)。究其原因是比较复杂的，有可能是由于胎儿红细胞上A抗原比B抗原的免疫原性强导致机体更易产生免疫应答，但也有文献指出，这2种血型之间患病率的差异并无意义，可能是由于标本量太少造成，也可能与不同地区ABO血型分布比例不同有关[6]。

新生儿溶血病的主要依据是新生儿溶血三项试验：直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验和抗体释放试验[7]。直接抗人球蛋白试验主要检测新生儿红细胞是否被IgG抗体致敏，但由于新生儿红细胞上的抗原系统尚未发育完全，所以试验结果可能呈现弱阳性或假阴性[8]。放散试验因抗体检出率、敏感度均较高，故而成为新生儿溶血病的重要判断依据[9]。

血清总胆红素水平是诊断新生儿溶血发生的重要指标，血清总胆红素水平过高可导致新生儿传入和传出功能紊乱，进一步对感官及学习能力产生负面影响[10]。经数据分析，HDN患儿的血清总胆红素水平显著高于非溶血新生儿，患儿抗体效价越高，检测到的胆红素水平也就越高。虽然普遍认为抗体效价低于1∶64(试管法)/1∶256(微柱凝胶法)时新生儿较为安全，但仍存发病的可能，分析原因可能是抗体效价会随妊娠周期增长而呈上升趋势[11]。所以建议在妊娠周期内对IgG抗体效价定期进行检测，以提高ABO-HDN的检出率，从而做到早预防，尽量减少伤害。

总之，在产前对母婴血型不合的孕妇抗体效价进行筛查，对新生儿溶血病的预防有积极意义。目前，由于许多医院未开展新生儿溶血病相关实验室检测，对该病的早期诊断及预防仍处于一个盲区，导致该病的发生率较高。产后新生儿溶血三项试验、胆红素的测定及抗体效价分析都是新生儿溶血检测的重要评价指标，有助于早期诊断新生儿溶血和进行病情评估，从而选择最佳治疗方案，减轻后遗症，降低新生儿的病死率，提高医院新生儿疾病救治能力和水平，保证医疗质量和患者的生命安全。