外周血单个核细胞EBV-DNA检测和鼻内镜检查在鼻咽癌高危人群早期筛查中的应用

钟志辉，张岳汉，李 乔，龙则平

广东省高州市人民医院检验科，广东茂名 525200

鼻咽癌发生于鼻咽腔侧壁和顶壁，是耳鼻咽喉头颈外科常见的恶性肿瘤，占全世界新发癌症病例0.7%，癌症相关死亡率0.8%；有报道显示2018年全世界鼻咽癌患者新发129 079例，死亡72 987例，我国鼻咽癌发病占全球38.29%，死亡占40.14%，在南方地区流行更为广泛[1-2]。鼻咽癌早期症状不明显，主要表现为鼻塞、鼻出血、耳鸣、头痛、听力下降等，易转移扩散，放化疗是临床主要治疗手段，早发现、早干预能够改善患者预后[3-4]。本研究探讨外周血单个核细胞EB病毒脱氧核糖核酸(EBV-DNA)检测和鼻内镜检查在鼻咽癌早期筛查中的应用，为鼻咽癌的临床发现提供支持。

1 资料与方法

1.1一般资料 根据《中国癌症筛查及早诊早治技术方案(2011年版)》，计算血清鼻咽癌患病风险率(PROB)，PROB大于0.98为高危人群，PROB在0.65～0.98为低危人群[5]。从2019年10月至2020年9月进行鼻咽癌血清学筛查的人群中检测出高低危人群1 454例作为研究对象。纳入标准：(1)体力活动评分0～2分；(2)无鼻咽癌相关疾病病史。排除标准：(1)存在严重精神障碍；(2)并发严重心肾等重要脏器疾病；(3)其他原因不能配合完成研究。

1.2方法 分别取受试者全血和生理盐水各1 mL并混匀，用淋巴细胞分离液分离出白细胞层，使用EB病毒核酸扩增荧光定量PCR检测试剂盒的DNA提取液(中山大学达安基因股份有限公司提供)提取EBV-DNA，操作步骤严格按照说明书进行。以荧光定量PCR检测EBV-DNA相对水平，检测试剂和引物均购自中山大学达安基因股份有限公司。PCR反应程序设置为93 ℃ 2 min，93 ℃ 45 s，55 ℃ 60 s，10个循环；93 ℃ 30 s，55 ℃ 45 s，30个循环，反应结束后计算样本中EBV-DNA拷贝数，低于检测限为阴性，反之为阳性。

对所有研究对象进行鼻内镜检查，结果显示有可疑病变为阳性，阳性患者进行组织病理学检查，以病理结果作为鼻咽癌确诊依据。计算EBV-DNA检测和鼻内镜检查在高危人群中的阳性率，联合检测阳性为EBV-DNA检测或鼻内镜检查其中一项阳性，比较三者的诊断价值。

1.3统计学处理 使用SPSS20.0统计软件对数据进行统计分析。计数资料以频数、率表示，比较采用χ2检验。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析EBV-DNA检测、鼻内镜检查单独和联合检测对鼻咽癌的诊断价值。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1EBV-DNA检测和鼻内镜检查阳性率比较 452例高危人群中，EBV-DNA检测阳性率为17.70%，鼻内镜检查阳性率为14.38%，1 002例低危人群中，EBV-DNA阳性率为12.08%，鼻内镜检查阳性率为9.68%，无论是高危人群还是低危人群，EBV-DNA检测的阳性率与鼻内镜检查的阳性率比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；高危人群的EBV-DNA检测和鼻内镜检查阳性率均高于低危人群，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 EBV-DNA检测和鼻内镜检查阳性率的比较[n(%)]

2.2EBV-DNA、鼻内镜单独和联合检测对高危人群鼻咽癌的诊断效能 EBV-DNA、鼻内镜单独和联合检测的ROC曲线下面积分别为0.862、0.790和0.930，约登指数分别为77.22%、75.17%和88.10%，均显示出良好的诊断效能。EBV-DNA检测的灵敏度为81.25%，鼻内镜检查的灵敏度为76.25%，低于两者联合检测的93.75%，差异均有统计学意义(P<0.05)；EBV-DNA检测的特异度为95.97%，鼻内镜检查的特异度为98.92%，联合检测的特异度为94.35%，EBV-DNA检测与联合检测的特异度比较，差异无统计学意义(P>0.05)，鼻内镜检查的特异度高于联合检测，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 EBV-DNA、鼻内镜单独和联合检测诊断鼻咽癌的灵敏度和特异度

3 讨 论

鼻咽癌是中国广东、广西、湖南等南部地区发病率较高的恶性肿瘤之一，男性发病率高于女性，病理机制并不完全清楚[6]。早期患者经治疗治愈或无瘤生存比例超过80%，晚期患者需花费更多且5年生存率低于50%，因此在鼻咽癌发病率高的区域或人群中进行早期筛查，提高患者的早期诊断率，对于改善预后，提升治疗效果有重要意义[7-8]。

EBV属于疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属，主要以溶解性和潜伏性两种方式感染细胞，后者是其主要感染方式，可表达各种信号蛋白干扰宿主的免疫应答，诱发持续感染[9]。研究显示鼻咽癌的发生发展与EBV感染密切相关，鼻咽癌原发肿瘤基因型和外周血单个核细胞EBV基因型基本一致，EBV-DNA体内含量与疾病发展、治疗及预后相关，是临床上重要的肿瘤标志物[10-11]。CHAN等[12]对志愿者进行EBV-DNA和EBV IgA筛查，鼻内镜检查和随访发现EBV-DNA检测提升了鼻咽癌患者的早期检出率，有利于临床治疗。

鼻内镜检查可由单人操作完成，视野及成像清晰，直观反映疾病部位情况，可以对部位进行组织取样活检，经济实用，是当前耳鼻喉科应用广泛的辅助诊断方式[13-14]。本研究中高危人群中EBV-DNA检测阳性率为17.70%，鼻内镜检查阳性率为14.38%，均明显高于低危人群的12.08%、9.68%(P<0.05)，说明EBV-DNA检测和鼻内镜检查在鼻咽癌高危人群筛查中具有较高的应用价值，而且EBV-DNA检测操作更为简单快捷，临床上用于鼻咽癌筛查更为广泛[15-16]。高危人群EBV-DNA、鼻内镜单独和联合检测的ROC曲线下面积均高于0.700，显示出良好的诊断效能，其中EBV-DNA检测筛查鼻咽癌的灵敏度为81.25%，鼻内镜检查为76.25%，而二者联合筛查鼻咽癌的灵敏度高达93.75%，明显高于二者单独检测(P<0.05)，提示应将2种方法结合起来用于临床鼻咽癌高危人群的筛查诊断；而EBV-DNA检测、鼻内镜检查的特异度高于二者联合检测，说明二者联合检测存在假阴性情况，提示在上述检测的基础上仍需结合病理、血液、生化、影像等手段进行综合评估，以提高诊断的准确性。

综上所述，EBV-DNA检测和鼻内镜检查在鼻咽癌高危人群早期筛查诊断中灵敏度和特异度均较高，二者联合应用可提高鼻咽癌的诊断效能，是鼻咽癌高危人群早期筛查诊断的重要手段。