血清miR-92a、miR-20a在结肠癌术患者中的变化及对预后的预测价值分析

曾继莎，屈 敏，何 平

结肠癌具有较高的发病率与病死率。经调查发现，结肠癌发病率在恶性肿瘤中排名第3，而病死率排名第2，且近年来发病率及病死率呈逐渐上升趋势[1]。研究发现，结肠癌病死率的升高与早期诊断困难、疾病进展速度快等有一定相关性。许多结肠癌患者在中、后期才被确诊，故预后不佳，5年生存率较低。基于此，寻找能够有效诊断结肠癌、评估其预后的分子标志物意义重大。有研究表示，血清miR-92a、miR-20a参与了结肠癌的发生及发展[2]，但目前临床关于血清miR-92a、miR-20a诊断结肠癌及预测预后价值的研究较少，且尚不清楚结肠癌患者血清miR-92a、miR-20a变化情况。故本研究对86例结肠癌术患者与86例体检健康者的临床资料进行回顾性分析，旨在分析结肠癌患者血清miR-92a、miR-20a变化，以及其对预后的预测价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2018年1月—2020年11月攀钢集团总医院血液肿瘤科诊治的86例结肠癌术患者(观察组)与86例体检健康者(对照组)的临床资料。观察组纳入标准：符合结肠癌诊断标准，经病理学检查确诊；予传统手术或完整结肠系膜切除术治疗；认知功能正常；1个月前未行放化疗等治疗；无其他部位恶性肿瘤；临床资料完整。观察组排除标准：伴严重心功能不全；不愿接受手术治疗；存在手术禁忌证。172例受检人员中男87例、女85例，年龄32～70岁。2组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 结肠癌术患者和体检健康者一般资料比较

1.2研究方法

1.2.1miR-92a、miR-20a表达：比较观察组术前及术后1周、1个月、3个月与对照组体检时血清miR-92a、miR-20a表达量。清晨空腹状态下抽取受检人员外周静脉血3 ml，离心处理后取上清液，将Trizol液与血清按照1︰1混匀在2 ml离心管中，充分震荡后提取总RNA，加入Rnasin后，再根据逆转录试剂盒(System Bio-sciences公司生产)操作说明，将RNA逆转录为cDNA；再以cDNA为模板，应用荧光定量PCR试剂行SYBR实时荧光定量PCR检测，加入miR-92a、miR-20a特定引物后，应用iCycler iQ荧光定量PCR仪进行检测。循环参数为95℃预变性5 min，随后95℃变性15 s，退火60℃ 30 s，延长72℃ 1 min，共40个循环，最后采用循环阈值法定量分析miR-92a、miR-20a表达量，以小分子RNAU6为内参，以2-ΔΔCt表示目的基因相对配对正常版本的变化倍数。

1.2.2生存时间、生存率、病死率：观察组以血清miR-92a、miR-20a中位表达量为截断值分为高表达组与低表达组，各43例，通过电话方式对2组进行随访，随访时间2018年1月—2020年11月，比较2组生存时间、生存率、病死率，生存时间为从治疗结束后至患者死亡或末次随访时间。

1.2.3预后不良影响因素：根据生存率及病死率将观察组分为预后良好组69例与预后不良组17例，回顾分析2组临床病理资料,采用多因素Logistic回归分析探讨结肠癌术患者预后不良的影响因素。

1.2.4相关性分析：采用Spearman法分析观察组肿瘤分化程度、TNM分期与miR-92a、miR-20a的相关性，并行受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-92a、miR-20a对患者预后的预测价值，以曲线下面积(AUC)为0.7～0.9表示预测准确性较好。

2 结果

2.1血清miR-92a、miR-20a表达量比较 观察组术前血清miR-92a、miR-20a表达量高于对照组体检时(P<0.01)；观察组术后1周、1个月、3个月miR-92a、miR-20a表达量低于术前(P<0.05)，且术后3个月miR-92a、miR-20a表达量低于术后1周及术后1个月(P<0.05)，术后1周及术后1个月miR-92a、miR-20a表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 结肠癌术患者及体检健康者血清miR-92a、miR-20a表达量比较

2.2生存时间、生存率、病死率比较 高表达组生存时间短于低表达组，生存率低于低表达组，病死率高于低表达组(P<0.01)。见表3。

表3 结肠癌术患者及体检健康者生存时间、生存率、病死率比较

2.3预后不良单因素分析 单因素分析显示，预后良好组与预后不良组在性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小方面比较差异无统计学意义(P>0.05)，而在肿瘤分化程度、肿瘤TNM分期、miR-92a表达量、miR-20a表达量方面比较差异有统计学意义(P<0.01)。见表4。

表4 86例结肠癌术患者预后不良单因素分析

2.4预后不良多因素Logistic回归分析 以“组别”为因变量(赋值：预后良好组=1，预后不良组=2)，以“肿瘤分化程度、肿瘤TNM分期、miR-92a表达量、miR-20a表达量”为协变量，行多因素Logistic回归分析显示，肿瘤分化程度(低分化)、肿瘤TNM分期(Ⅲ期)、miR-92a表达、miR-20a表达是结肠癌术患者预后不良的影响因素(P<0.01)。

2.5相关性分析 Spearman相关性分析显示，肿瘤分化程度、肿瘤TNM分期与miR-92a、miR-20a表达呈正相关(P<0.05，P<0.01)。见表5。

表5 结肠癌术患者肿瘤分化程度、TNM分期与miR-92a、miR-20a表达的相关性分析

2.6ROC曲线分析 ROC曲线分析显示，miR-92a表达预测结肠癌术患者预后的AUC值为0.785，P<0.01；miR-20a表达预测结肠癌术患者预后的AUC值为0.969，P<0.01。见表6及图1。

图1 miR-92a与miR-20a表达预测结肠癌术患者预后的受试者工作特征曲线分析

表6 血清miR-92a、miR-20a表达对结肠癌术患者预后的预测价值分析

3 讨论

结肠癌多发生在直肠与结肠交界处，随着病情的发展，会侵犯多个内脏器官及组织[3-4]。统计发现，该病具有较高的病死率，全球结肠癌病死率约为50%；若早期对结肠癌患者实施科学、有效的治疗，则能进一步提高生存率[5-8]。miRNA的异常表达在恶性肿瘤发生、发展及预后评估中具有十分重要的作用[9]。有研究报道显示，miRNA的高表达能够诱导肿瘤血管生成[10-11]。鉴于miRNA异常表达是导致结肠癌进一步恶化的重要原因，本文从分析血清miR-92a、miR-20a表达量入手，以期为结肠癌的临床诊断、预后评估筛选实用指标。本研究结果可见，观察组术前miR-92a、miR-20a表达量高于对照组体检时，提示结肠癌患者血清miR-92a、miR-20a表达量较正常人群高，血清miR-92a、miR-20a表达与结肠癌的发生具有一定关系，在肿瘤的发生、转移等过程中起着十分重要的作用。

miR-92a为miR-17-92簇的重要组成，在多种肿瘤性疾病中异常表达。梁卫东等[12]研究显示，食管鳞癌患者血浆miR-92a表达显著高于健康人员，且伴有淋巴结转移的食管鳞癌患者血浆miR-92a表达高于无淋巴结转移患者，由此说明miR-92a有望成为肿瘤生物学标志物，其通过抑制FOXA2表达促进肿瘤细胞侵袭及转移，从而充分发挥原癌基因的作用。但结合目前已有研究结果，单一血清miR-92a诊断肿瘤性疾病存在一定局限性，建议联合其他血清miRNA检测进一步提高结肠癌的诊断价值。

miR-20a同样在肿瘤细胞的增殖、转移、侵袭、凋亡过程中发挥重要调控作用，通过下调程序性细胞死亡基因4的表达，抑制癌细胞凋亡及促进癌细胞增殖[13-15]。黄锋等[16]指出，miR-20a与肿瘤细胞的迁移及上皮细胞间质转化具有密切关系。本文多因素Logistic回归分析可见，miR-92a、miR-20a表达是结肠癌术患者预后不良的影响因素；且miR-92a、miR-20a表达与肿瘤分化程度、TNM分期呈正相关。说明检测miR-92a、miR-20a表达能为疾病程度判断及预后评估提供客观依据。本文86例结肠癌患者经手术治疗后，血清miR-92a、miR-20a表达量与术前相比明显下降，因为miR-92a、miR-20a是经癌组织或癌细胞分泌进入血循环，当手术切除病灶组织，间接切断了血液中miR-92a、miR-20a的来源，故其表达量明显下降[17-19]。

综上，血清miR-92a、miR-20a表达与结肠癌的发生、发展及预后相关，二者有望作为结肠癌诊断及术后预后评估的重要标志物。但本研究样本量较小，后续仍需收集大量临床数据，以深入探究血清miR-92a、miR-20a在临床中的应用价值。