miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141与胸腔镜肺癌微创术后复发的关系及联合预测价值分析

刘鸿运，张曙光，于四海

目前肺癌已成为我国城市人口死亡的主要因素[1]，胸腔镜肺癌微创术是治疗肺癌的主要术式，具有微创、术后恢复时间短等优势，但术后仍有30.0%～40.0%的患者死于肺癌复发[2-3]。因此，积极寻找一种预测肺癌复发的有效指标，对制定个性化治疗方案、改善预后具有重要的临床价值。富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)表达升高可激活肿瘤细胞内丝裂原活化蛋白激酶信号通路，从而参与恶性肿瘤的发生、发展[4]。另有学者指出，微小RNA(miR)在多种肿瘤组织中异常表达，而miR-21、miR-141在肿瘤细胞增殖、侵袭等方面起重要作用[5-6]，但关于其与Cyr61 mRNA联合预测胸腔镜肺癌微创术后复发的临床价值尚缺乏循证支持。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年1月—2020年1月我院收治的361例行胸腔镜肺癌微创术患者，其中男234例，女127例；年龄47～73(61.18±5.32)岁。纳入标准：符合肺癌诊断标准[7]，并经手术病理学检查证实诊断；具有胸腔镜肺癌微创术指征。排除标准：远处转移者；有放化疗及免疫治疗史者；合并其他部位肿瘤者；合并肺部感染或其他部位感染者；凝血功能紊乱或活动性出血者；组织标本污染者；合并重度抑郁症、精神分裂症或其他精神疾病者。

1.2研究方法 记录所有患者术后6个月复发情况，根据复发情况分为复发组30例、未复发组331例，比较2组miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平；采用多因素Logistic回归分析寻找胸腔镜肺癌微创术后复发的影响因素；采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141单一及联合检测对胸腔镜肺癌微创术后复发的预测价值；绘制K-M生存曲线，采用Log-rank检验分析miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平与生存率的关系。

1.3检测方法 取手术切除病灶组织，应用Trizol试剂促进细胞裂解，添加氯仿0.2 ml，4℃条件下12 000 r/min离心15 min，取无色水相上层，添加等体积异丙醇并沉淀。加入适量乙醇(75%)清洗，获取RNA沉淀，清除上层乙醇溶液，25℃条件下空气干燥5～10 min。紫外光吸收法检测RNA纯度及浓度，使用北京诺博莱德科技有限公司生产的逆转录试剂盒合成样品cDNA。采用百奥迈科生物技术有限公司生产的荧光定量PCR试剂盒测定组织miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141表达量。

2 结果

2.12组临床资料比较 2组淋巴结转移、miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141比较差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。见表1。

表1 2组行胸腔镜肺癌微创术患者临床资料比较

2.2不同miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平患者术后复发率比较 以2组各指标均值分界(miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141均值分别为0.80、0.84、2.03)，将患者分为miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141高表达与低表达者。miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141高表达者复发率高于低表达者(P<0.01)。见表2。

表2 不同miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平的胸腔镜肺癌微创术患者术后复发率比较[例(%)]

2.3多因素Logistic回归分析 以miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141作为自变量，低于均值=1、高于均值=2，以复发为因变量，未复发=0、复发=1，应用多因素Logistic回归方程进行分析，结果显示，miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141是胸腔镜肺癌微创术后复发的影响因素(P<0.01)。见表3。

表3 胸腔镜肺癌微创术后复发的多因素Logistic回归分析

2.4miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141预测术后复发的ROC曲线分析 以复发组为阳性样本，以无复发组为阴性样本，绘制各指标预测胸腔镜肺癌微创术后复发的ROC曲线，结果显示，miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141单一及联合检测预测术后复发的曲线下面积(AUC)依次为0.749、0.738、0.813及0.896。见图1、表4。

表4 miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141单一及联合检测预测胸腔镜肺癌微创术后复发的ROC曲线分析

图1 miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141单一及联合检测预测胸腔镜肺癌微创术后复发的受试者工作特征曲线

2.5不同miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平者生存率比较 miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141高水平者生存率低于低水平者(P<0.05)。见图2。

图2 不同miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平的胸腔镜肺癌微创术患者术后生存率比较

3 讨论

既往研究证实，miR-21对胃癌、HER2阳性乳腺癌治疗结局有一定预测价值[8-9]。但上述研究倾向于离体细胞，关于其在胸腔镜肺癌微创术后复发患者中表达的相关报道较少。本研究结果显示，miR-21在胸腔镜肺癌微创术后复发患者中异常高表达，原因可能为miR-21过度表达可激活第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因/激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路，促使肿瘤细胞间质转化，诱导肿瘤细胞异常生长，从而参与术后复发进程[10-11]。多因素Logistic回归分析显示，miR-21是胸腔镜肺癌微创术后复发的影响因素，再次佐证了miR-21有望成为预测术后复发的潜在指标。非小细胞肺癌组织miR-21高表达可提示患者整体生存率下降，这可能归因于miR-21表达升高通过对PETN等基因表达进行靶向调控，诱导新生血管形成，增强肿瘤细胞浸润与侵袭作用，从而促使肿瘤细胞异常增殖，加快肿瘤细胞转移，进而导致不良预后[12]。

Cyr61生物学功能较为复杂，多篇文献指出，其可作为肿瘤新生血管形成的重要参与因子，调控细胞增殖[13-15]。本研究术后复发患者癌组织Cyr61 mRNA显著高于未复发者，与何开明等[16]研究结果相似，这可能是由于Cyr61一方面可结合细胞膜上配体，提高整联蛋白耦联激酶活性，活化Wnt/β-catenin信号通路；另一方面可调控血管内皮生长因子及其受体表达，激活下游靶基因，异常增殖血管内皮细胞，促进新生血管形成，从而增加术后复发危险性。但段亚男等[17]研究认为，肺癌患者癌组织Cyr61蛋白表达阳性率显著下降，与本研究结果存在一定差异，可能与样本量、检测方法不同等因素有关。进一步通过K-M曲线分析可知，Cyr61 mRNA表达升高可降低胸腔镜肺癌微创术患者生存率，可能与其表达升高一定程度破坏下游细胞外基质合成与分解平衡，诱导肿瘤细胞转移有关。提示Cyr61有助于反映胸腔镜肺癌微创术患者预后。

miR-141位于人类染色体12p13.31位点，国内外研究均已证实，其在前列腺癌、卵巢上皮癌、鼻咽癌中均异常表达[18-20]。本研究表明，miR-141高表达患者术后复发率显著高于低表达患者，其原因可能为miR-141高表达通过结合长链非编码RNA XIST，上调转化生长因子-β与细胞程序性死亡蛋白4含量，诱导肿瘤细胞异常增殖与上皮间质转化，调控肿瘤细胞增殖、凋亡、永生化等多种生物学效应，从而参与术后复发进程[21]。进一步研究还发现，miR-141高水平可能增加胸腔镜肺癌微创术患者病死率，究其原因可能为miR-141表达上调可加重肿瘤恶性程度，进而影响患者生存率。然而miR-141单一检测预测胸腔镜肺癌微创术后复发的敏感度较低，存在一定局限性，本研究ROC曲线显示，miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141联合检测预测术后复发的AUC最大，预测价值最佳。由此可见，miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141联合检测对胸腔镜肺癌微创术后复发、预后具有重要的预测价值。

综上，miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141在胸腔镜肺癌微创术后复发患者中过度高表达，上述指标联合检测可为临床预测胸腔镜肺癌微创术患者术后复发与预后提供一种新手段。