某品牌血液分析仪测定全血样本红细胞和网织红细胞新参数稳定性分析

张 辉， 张 驰， 岳道远

（华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科，湖北 武汉 430030）

为分析临床常见症状——贫血的原因，XN-20全自动血液分析仪（简称XN-20）增加了网织红细胞（reticulocyte，RET）和红细胞（red blood cell，RBC）新参数，包括网织红细胞百分比（the percentage of reticulocyte，RET%）、网织红细胞绝对值（the absolute value of reticulocyte，RET#）、低荧光网织红细胞百分比（the percentage of low fluorescent reticulocyte，LFR%）、中荧光网织红细胞百分比（the percentage of medium fluorescent reticulocyte，MFR%）、高荧光网织红细胞百分比（the percentage of high fluorescent reticulocyte，HFR%）、未成熟网织红细胞百分比（the percentage of immature reticulocyte，IRF%）、网织红细胞血红蛋白含量（reticulocyte hemoglobin，RET-HE）和小红细胞百分比（the percentage of microcyte，Micro-R%）、大红细胞百分比（the percentage of macrocyte，Macro-R%）、低色素红细胞百分比（the percentage of hypochromic erythrocyte，Hypo-HE%）和高色素红细胞百分比（the percentage of hyperchromic erythrocyte，Hyper-HE%），这些参数在不同人群贫血分类、RBC活性监测等方面有着重要的应用价值[1-4]。XN-20检测样本的准确性与全血样本的稳定性有关，而稳定性则与存储条件（时间和温度）密切相关。杨尚瑜等[5]发现，在体外，RBC外液会缓慢进入细胞内引起渗透性肿胀，随着样本放置时间的延长，平均红细胞体积（mean corpuscular volume，MCV）会增大，平均红细胞血红蛋白浓度（mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC）会降低，而低温（4 ℃）则会延缓这一过程。目前，关于RET、RBC新参数等方面的研究较少。为了探讨抗凝全血样本放置环境和时间对其稳定性的影响，本研究选取了30例样本，在2种保存条件下，分别于5个时间点连续检测，以观察这些参数的变化规律和稳定性。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取华中科技大学同济医学院附属同济医院临床样本30例，患者男15例、女15例，年龄（43±14）岁。30例样本中，健康体检者抗凝全血样本18例（60%）；贫血患者抗凝全血样本12例（40%），血红蛋白为89.3（44～138） g/L。

1.2 仪器与试剂

XN-20（日本Sysmex公司）及配套试剂、质控物，乙二胺四乙酸二钾抗凝真空采血管（美国BD公司）。

1.3 方法

使用乙二胺四乙酸二钾抗凝真空采血管采集所有研究对象2.0 mL静脉血，充分混匀，以保证样本中乙二胺四乙酸二钾含量为1.5～2.2 mg/mL。测定前确保仪器性能良好，检测结果稳定可靠，所有样本均在采集2 h内完成第1次检测，并以其为基线值。完成第1次测定后，将样本分别于室温（20～24 ℃）和冷藏（4～8 ℃）条件下储存，分别于储存12、24、48和72 h后进行测定。使用中值和高值质控品每天检测1次，连续检测20 d，计算仪器各参数批间精密度[以变异系数（coefficient of variation，CV）表示]。

1.4 评价标准

比较各时间点检测数据组与2 h基线数据组仪器RET、RBC新参数稳定性评价标准，将结果作为其均值，以差异不超过基线数据标准误为该参数稳定性可接受，反之则不可接受。

1.5 统计学方法

采用SPSS 15.0软件计算各参数各时间点数据组均值、标准误、95%可信区间，采用Excel 2013软件计算各时间点测定值与基线值的差异。正态分布数据采用±s表示，采用Shapiro-Wilk检验对数据进行正态性分析。

2 结果

2.1 批间精密度

收集20 d低、中、高值质控品室内质量控制数据的CV，具体结果见表1。

表1 RET、RBC新参数的批间精密度

2.2 分析稳定性

2.2.1 室温条件下的稳定性 在室温条件下，RET%和RET#在样本采集后能稳定72 h，72 h测定值与基线值的差异分别为0.059 0×1012/L和0.002 3×1012/L，均小于基线组标准误，即0.217 4×1012/L和0.007 9×1012/L；IRF%、LFR%、HFR%、Hypo-HE%、Hyper-HE%能稳定48 h，48 h测定值与基线的差异分别为-0.94%、0.73%、-0.27%、-0.43%、-0.05%；MFR%和Micro-R%能稳定24 h，24 h测定值与基线值的差异分别为-0.33%和-0.77%；RET-HE只能稳定12 h，而Macro-R%稳定时间不到12 h。见表2。

表2 乙二胺四乙酸二钾抗凝全血样本在室温条件下RET、RBC新参数稳定性

2.2.2 冷藏条件下的稳定性 在冷藏条件下，除IRF%只能稳定48 h外（48 h测定值与基线值的差异为-0.73%，稍小于室温条件），其他参数均能稳定72 h以上。见表3。

表3 乙二胺四乙酸二钾抗凝全血样本在冷藏条件下RET、RBC新参数稳定性

3 讨论

众所周知，为保证结果的准确性，实验室在进行血细胞有形成分检测时应尽量保证样本新鲜，但因城市边际的扩大、各医疗机构的分散、实验室的中心化、样本量的剧增等客观原因，越来越多的样本无法保证在短时间内完成检测，这类样本则不可避免地受到储存条件的影响。为了解样本在运输、储存过程中发生的变化，样本稳定性相关研究非常重要。

XN-20利用流体动力聚焦术和鞘流直流电检测技术，可测定RET和RBC亚群中单个细胞的血红蛋白含量及体积的特征，生成RET-HE、Micro-R%、Macro-R%、Hypo-HE%和Hyper-HE%等新参数[6]。RET通道中的RBC被核酸染色并采用荧光流式细胞术进行分析，生成前向散射光（forward scatter，FSC）/荧光强度（fluorescence intensity，FSL）散点图，由于荧光强度与RNA含量成正比，根据荧光强弱把RET从成熟RBC中分离，并根据其在散点图中的位置，进一步区分HFR、MFR和LFR，而IRF是后两者之和[7]。RET、IRF等相关参数是反映骨髓造血功能的重要指标；FSC/FSL散点图中FSC的对数值即为RET-HE，可作为早期铁缺乏的监测指标[2]。Hypo-HE%和Hyper-HE%由高角度FSC和侧向散射光计算得出，分别表示平均血红蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）<17 pg和>49 pg的红细胞所占的百分比；Micro-R%和Macro-R%在RBC/血小板通道进行计数，分别代表MCV<60 fL和>120 fL的RBC所占的百分比；Hypo-HE%反映RBC生命周期中的铁含量[8]，Hyper-HE%可作为遗传性球形红细胞增多症、自身免疫性溶血的监测指标[9]；在鉴别地中海贫血与缺铁性贫血时，因Micro-R%在地中海贫血中更高[10]，所以被推荐为鉴别指标。但有学者发现，Micro-R%和Hypo-HE%的比值在上述2种疾病的鉴别方面更加敏感[11]，这些参数均为传统贫血相关实验室检测提供了一种简单、经济的补充方案。

本研究结果显示，XN-20检测RET%和RET#的结果较为稳定，受储存温度和时间影响最小，无论是室温条件，还是冷藏条件下，均可稳定72 h；而陈梅等[12]认为只可稳定48 h，可能是检测仪器型号的差异所致。本研究结果表明，IRF%参数在冷藏条件下的72 h稳定性虽有所增强，但仍未到达可接受范围，即无论室温放置还是冷藏，均只能稳定48 h；在室温条件下，LFR%、HFR%、Hypo-HE%、Hyper-HE%只能在48 h内保持稳定，但在冷藏条件下则可稳定72 h，原因可能为IRF%、LFR%和HFR%代表网织红细胞老化的情况，而网织红细胞在室温条件下更易成熟和衰老；MFR%和Micro-R%室温放置只能稳定48 h，在冷藏条件下则可稳定72 h；Macro-R%室温放置12 h后即超出可接受范围，而在冷藏条件下可稳定72 h，原因可能为Hypo-HE%和Hyper-HE%与MCH有关，Micro-R%和Macro-R%则与MCV大小有关，全血样本在室温下放置，受样本中RBC渗透压的影响，血浆中的水分随时间的延长缓慢进入红细胞内部引起细胞肿胀，从而导致MCV的增高和MCH的减低；而低温可让RBC无氧酵解代谢速度放缓，从而保证RBC膜钠钾离子泵正常功能得以维持，所以血浆中的水分渗入红细胞内部的速度大大减缓[13]。与室温放置相比，在冷藏条件中保存，RET-HE稳定性大幅提高，稳定时间从原来的12 h提升至72 h。但有研究结果表明，无论室温放置，还是冷藏保存，RET-HE在48 h内均非常稳定[14]。本研究发现，延长样本存储时间至72 h后，RET-HE冷藏保存比室温放置要稳定得多（0.44 g/L和-1.23 g/L）。

综上所述，乙二胺四乙酸二钾抗凝全血样本进行RET和RBC新参数检测时，仍会受到储存温度和时间的影响，实验室应尽量保证样本新鲜，如不能及时检测，需冷藏保存，以保证结果的准确性。