不同类型胚胎移植液对囊胚冷冻解冻移植临床结局的影响▲

陈自洪 李春苑 杨 华 邹 彦 吴 卓 周 玲 丘 映 许常龙

(广西南宁市第二人民医院生殖中心，南宁市 530031，电子邮箱：chenzihong1979@foxmail.com)

经过40多年的发展，辅助生殖技术得到了长足的发展，是治疗人类不孕不育症的有效手段。然而，整个辅助生殖治疗过程时间长、环节多，每一个细节都有可能影响整个治疗周期的临床效果。胚胎移植作为其中的一个重要步骤，对治疗成功率的影响不容忽视。有研究表明，经胚胎胶处理后再行胚胎移植，能显著地提高治疗的临床结局[1-8]。但也有研究显示，胚胎胶对促进胚胎移植临床治疗的效果有限[9-11]。为此，本研究回顾分析我中心实施的670个囊胚期胚胎冷冻解冻移植周期的临床资料，探讨囊胚冷冻解冻移植中使用胚胎胶与常规使用G2培养液作为胚胎移植液的临床效果是否有差异。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集我中心2017年4月至2018年8月实施的670个囊胚玻璃化冷冻解冻移植周期的临床资料。纳入标准：年龄≤37岁；胚胎移植日子宫内膜为A型或B型，且厚度≥8.0 mm；移植周期≤3个；解冻移植优质囊胚≤2个。剔除子宫肌瘤、子宫畸形、子宫内膜息肉、输卵管积水、子宫内膜异位症等疾病患者。其中，350个周期使用胚胎胶(瑞典Vitrolife公司)作为移植液(试验组)，320个周期使用G2培养液(瑞典Vitrolife公司)作为移植液(对照组)。

1.2 治疗方法

1.2.1 子宫内膜准备：常规方法进行内膜准备[12]。

1.2.2 囊胚解冻与移植：囊胚玻璃化冷冻与解冻均采用加拿大捷鹰公司的试剂盒，操作严格遵循说明书进行。解冻后用G2培养液培养2 h，如果囊胚腔恢复>50%评估为复苏成功，可以移植。正式移植前30 min将囊胚转移到含有G2培养液或胚胎胶的移植皿，然后在B超引导下进行移植。胚胎移植管为COOK公司生产。

1.2.3 临床妊娠标准[12]：囊胚解冻移植后的第14天，尿检或抽血检查人绒毛膜促性腺激素阳性，并在移植后第28天超声检查显示宫内有妊囊和原始心管搏动。

1.3 统计学分析 采用SPSS 17.0统计软件对数据进行统计学分析。计量资料以(x±s)表示，组间比较采用t′检验；计数资料以例数(百分比)表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

两组女方年龄、助孕次数、内膜厚度和移植胚胎数差异均无统计学意义(均P>0.05)；试验组的临床妊娠率和种植率虽略高于对照组，但差异无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

表1 两组临床资料及临床结局的比较

3 讨 论

为了提高不孕症治疗的成功率，各国科研人员和医疗工作者进行了很多研究，而用于胚胎移植的培养液是其中的一个焦点问题。在胚胎移植液中加入黏附成分的目的是提高胚胎在子宫中种植的概率，从而提高妊娠率和健康婴儿出生率。透明质酸是D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的双糖单位玻尿酸，又称糖醛酸，基本结构是由两个双糖单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的大型多糖类，是哺乳类动物卵泡、输卵管及子宫液中的一种正常成分[13]。透明质酸提高细胞与细胞或细胞与间质之间的粘连，研究表明在小鼠中胚胎着床时透明质酸合成急剧增加，第2天降低近基础水平[14]。在小鼠模型中，Gardner等[15]发现使用富含透明质酸的移植液可以提高胚胎的种植率和胎儿的发育水平。2002年，Schoolcraft等[1]首先报告了提高培养液中的透明质酸能提高种植率。Urman等[2]开展了大样本临床研究，发现第3天和第5天新鲜胚胎经高浓度透明质酸培养液处理后，临床妊娠率和种植率显著提高，特别是对于35岁以上患者和之前治疗失败的患者效果更明显。有研究表明，对于反复种植失败的不孕患者，使用富含透明质酸的胚胎胶有助于提高临床妊娠率和种植率[16]。在新鲜周期、自然周期冻融胚胎移植或激素替代准周期冻融胚胎移植中，使用富含透明质酸的胚胎胶移植液较不使用胚胎胶的移植液可明显地提高妊娠率(37.5%、10.9%；31.4%、10.0%；41.2%、15.7%)[17]。然而，也有不少文献表明，胚胎胶提高临床妊娠率的效果并不明显。Safari等[18]认为，常规使用胚胎胶作为移植液对改善卵裂期胚胎移植的临床效果没有帮助。刘辉等[11]使用G1、G2培养液作为胚胎移植液同样可获得较好的临床结局，并认为与胚胎胶相比，G2培养液作为D3胚胎移植液在提高胚胎活产率方面更具有优势。此外，对于反复种植失败患者，使用胚胎胶移植载体对妊娠结局的影响可能也不大[10]。本研究结果表明，在囊胚冷冻解冻移植周期中，使用胚胎胶作为移植液的患者临床妊娠率和种植率较对照组患者虽然略有增高，但差异并无统计学意义。其中可能的原因为：囊胚期的胚胎与子宫的生理环境更为同步，囊胚移植较D3卵裂期胚胎更容易着床，高浓度的透明质酸是非必需的。刘辉等[11]的研究结果也表明，D5囊胚移植时，G2培养液与胚胎胶作为移植液的妊娠结局差异并无统计学意义。

综上所述，以胚胎胶作为移植液对提高囊胚冷冻解冻移植的临床效果还存在争议，其可能对提高卵裂期的胚胎移植有较好作用，而对改善囊胚期胚胎移植的效果却是有限的。胚胎胶在囊胚冷冻解冻移植中的作用究竟如何，还需更深入研究。