E-钙黏蛋白、波形蛋白在食管癌中表达及意义

韩 潇， 王永刚， 刘 凯

新疆医科大学附属肿瘤医院 头颈综合放疗科，新疆 乌鲁木齐 830011

食管癌具有较高的浸润性，且术后易侵袭转移、复发。刘曙正等[1]研究发现，食管癌术后1年内复发率>20%。因此，研究食管癌发生、转移等生物学行为对于降低病死率及延长生存期至关重要。E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)是上皮间质转化过程中起关键调节作用的生物标志物，其中，前者作为下调上皮标志物，具有稳定细胞间连接和抑制侵袭、转移的作用，而后者是上调标志物，可破坏细胞间的连接，使细胞失去极性[2]。有研究报道，抑制肿瘤(结肠癌、乳腺癌等)上皮间质转化可提高治疗效果[3]。目前，关于肿瘤组织中E-cadherin、Vimentin的表达情况与食管癌的TNM分以及生存情况的关系并不明确。本研究旨在探讨E-cadherin、Vimentin在食管癌中的表达及意义，为临床治疗、新药研究提供新的靶点。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取自2008年1月至2016年1月新疆医科大学附属肿瘤医院收治的104例食管癌患者为研究对象。其中，男性69例，女性35例；年龄38～70岁，平均年龄(49.6±2.6)岁；分化程度：高分化43例，中分化44例，低分化17例；根据国际抗癌联盟2009年修订的食管癌TNM分期标准[4]，TNM临床分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期46例，Ⅲa期36例；浸润程度：T1 10例，T2 38例，T3 56例；淋巴结转移阳性62例。纳入标准：(1)经胃镜组织活检病理、影像学等确诊为食管鳞状细胞癌；(2)入组前未接受放、化疗，以及其他免疫治疗或靶向治疗；(3)患者预计生存期>3个月；(4)经HE染色、显微镜观察确认细胞结构完整，排除脱片影响免疫组化染色结果；(5)临床资料完整，且均签署知情同意书；(6)患者均满足食管癌根治术手术指征；(7)术前患者未进行任何有关食管癌的治疗。排除标准：(1)已接受放、化疗治疗；(2)活动性食管出血；(3)既往其他恶性肿瘤病史；(4)病例或病理资料不完整；(5)合并其他严重肝、肾、心脑血管疾病；(6)妊娠期或哺乳期女性。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 治疗方法 患者接受常规手术治疗以及化疗，均于右胸入路，其中，上段食管癌采用三切口Mckeown术式，中下段采用两切口Ivor-Lewis术式。如果需要术后治疗，按照指南给予术后辅助放、化疗。接受以顺铂为基础的化疗方案，1～3 d静脉滴注顺铂25 mg/m2，1～5 d静脉滴注氟尿嘧啶500 mg/m2，以21 d为1个疗程，共4个疗程。

1.3 观察指标 收集患者食管癌组织及距原发灶>5 cm的癌旁正常食管鳞状上皮组织，采用免疫组化法检测标本中E-cadherin、Vimentin表达水平。术中收集标本后依次进行甲醛溶液固定，石蜡包埋，连续切片(厚度4 μm)、苏木精-伊红染色等操作。采用二甲苯、酒精清洗、脱蜡，抗原修复液(0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液)修复10 min，随后磷酸盐缓冲液冲洗切片。滴加一抗鼠抗人E-cadherin、Vimentin单克隆抗体，4℃过夜，PBS缓冲液冲洗3～4次，加入新鲜配制的二氨基联苯胺溶液结合一抗，蒸馏水漂洗、苏木精复染，脱水、封片，显微镜下观察E-cadherin、Vimentin表达情况。于200倍视野下随机选取5个视野，对阳性细胞占比、染色强度计分，由两位病理医师单独完成，取共同值为最终评分，若不一致则请第3位病理医师评分，分值为0分、1～3分、4～6分、7～9分，分别表示阴性(-)、弱阳性(+)﹑中等阳性(++)﹑强阳性(+++)[5]。患者出院后的第1年内每3个月进行1次随访，第2～3年每6个月进行1次随访。随访方式主要为电话随访、门诊随访等，随访截止日期为2019年1月。统计分析患者生存情况。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件处理数据。计数资料以例(百分率)表示，组间比较采用χ2检验。TNM分期及生存期与E-cadherin、Vimentin表达相关性采用Spearman相关性分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织及癌旁组织E-cadherin、Vimentin表达情况比较 本研究随访3年，最终100例纳入研究。癌组织E-cadherin阳性表达率为36.0%(36/100)，低于癌旁组织的80.0%(80/100)，差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织Vimentin阳性表达率为56.0%(56/100)，高于癌旁组织的24.0%(24/100)，差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

图1 癌组织及癌旁组织E-cadherin、Vimentin蛋白表达(a.癌组织E-cadherin蛋白表达情况；b.癌旁组织E-cadherin蛋白表达情况；c.癌组织Vimentin蛋白表达情况；d.癌旁组织Vimentin蛋白表达情况；HE×200)

2.2 E-cadherin、Vimentin表达情况与TNM分期相关性 不同TNM分期患者E-cadherin阳性表达率、Vimentin阳性表达率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。Spearman相关性分析结果表明，食管癌中E-cadherin表达与TNM分期负相关(r=-0.625，P<0.05)，Vimentin表达与TNM分期正相关(r=0.684，P<0.05)。

表1 不同分期食管癌患者E-cadherin、Vimentin阳性表达率比较/例(百分率/%)

2.3 不同预后结局患者E-cadherin、Vimentin表达情况比较 随访3年，存活患者56例，死亡患者44例。存活患者E-cadherin阳性表达率为46.4%(26/56)，高于死亡患者的22.7%(10/44)；存活患者Vimentin阳性表达率为42.9%(24/56)，低于死亡患者的72.7%(32/44)，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.4 食管癌组织中E-cadherin表达与Vimentin表达相关性 Spearman相关性分析结果表明，E-cadherin与Vimentin呈负相关性(r=-0.483，P<0.05)。

3 讨论

目前，食管癌发生、发展的生物学机制及寻找肿瘤诊断的分子标志物和治疗靶点是临床研究的重点，有助于指导新药研发并制定治疗方案。E-cadherin表达降低，Vimentin表达增加是上皮间质转化过程的标志[6]。Vimentin具有维持细胞形态，促进细胞分化、粘附、信号转导、有丝分裂等生物学过程，可在乳腺癌、前列腺癌、恶性黑色素瘤等肿瘤中高表达，从而参与肿瘤的转移、复发等[7-8]。有研究表明，在多种癌症中，随着癌症病程的进展，Vimentin表达增加[9]，而E-cadherin表达降低[10-11]。本研究中，癌组织E-cadherin阳性表达率低于癌旁组织，Vimentin阳性表达率高于癌旁组织，与霍小东等[12]研究结果一致，提示上皮间质转化与肿瘤发生相关；食管癌中E-cadherin、Vimentin表达情况与TNM分期存在明显相关性(P<0.05)，即分期越高，E-cadherin表达水平越低，Vimentin表达水平越高。TNM分期越高则提示肿瘤患者进展越严重，淋巴结受到累及，可能发生了远处转移。其中，远处转移与上皮间质转化密切关联，因此，E-cadherin、Vimentin均异常表达。胡丽霞等[13]研究发现，E-cadherin在乳腺癌中低表达，而Vimentin高表达，两者均参与乳腺癌的发生、发展及侵袭转移等过程，与本研究结果类似，进一步表明E-cadherin、Vimentin可作为评估食管癌的分期、转移风险的重要评价指标。

本研究随访3年，存活患者E-cadherin阳性表达率明显高于死亡患者， Vimentin阳性表达率明显低于死亡患者，提示E-cadherin低表达、Vimentin高表达患者食管癌预后更差，可作为预后评估的重要指标。E-cadherin表达水平的下调或者缺失降低了肿瘤细胞的粘附能力，使肿瘤细胞渗入血液循环，肿瘤细胞获得了侵袭转移潜能，增加了术后复发风险和治疗难度，病死率明显增加，中位生存期低于高表达患者[14]。Vimentin是维持细胞完整性的中间丝蛋白，参与肿瘤细胞的迁移、粘附等过程，在癌组织中高表达可驱动上皮间质转化过程，增加转移风险[15]。本研究存在一定的局限性，仅从组织样本中分析了E-cadherin、Vimentin的表达情况，后续需进行体外实验研究分子机制。

综上所述，食管癌组织中E-cadherin低表达，Vimentin高表达，可作为食管癌患者临床预后评价的重要指标。