比较常见外用镇痛药经皮释放特性及其在局部组织的分布

李晓涛，朱华明

(泸州医学院基础医学院，四川 泸州 646000)

0 引言

疼痛是肌肉骨骼系统疾病最主要的症状，口服NSAIDs镇痛效果良好，但存在胃肠道安全性问题，故外用NSAIDs 通过改变用药途径，在不降低镇痛效果同时，经皮给药可显著减少药物系统暴露量，提高 NSAIDs的用药安全性，已在临床广泛应用[1]，目前常用外用NSAIDs有洛索洛芬钠凝胶膏、氟比洛芬凝胶贴膏、吲哚美辛凝胶膏、洛索洛芬钠贴剂等。在TDDS系统中，药物的释放度与透皮率是影响外用NSAIDs药效的重要因素[2]。由于目前临床上缺乏各外用NSAIDs的释药性能和药代动力学数据，因此本研究目的是探究外用NSAIDs体外释放透皮性能及在体内的分布情况。

1 实验材料

1.1 实验动物与主要试剂药品

健康雄性SD大鼠若干只(体重300g±50g，上海动物中心)；洛索洛芬钠凝胶膏(湖南九典)；氟比洛芬凝胶贴膏(北京泰德)；吲哚美辛凝胶膏(青州尧王制药)；洛索洛芬钠贴剂(第一三共)；酮洛芬贴剂(Pacific Pharmaceutic)；吡罗昔康贴剂(江苏恒瑞)；14C标记的洛索洛芬钠凝胶膏、氟比洛芬凝胶贴膏、吲哚美辛凝胶膏、洛索洛芬钠贴剂、酮洛芬贴剂、吡罗昔康贴剂(贝塔医药科技)；0.5%冰醋酸；Na2HPO4·12H2O；KH2PO4；三乙胺；稀磷酸；氯化钠注射液；巴比妥；甲醇；乙腈(均为色谱纯，FISHER公司)。

1.2 实验仪器

高效液相色谱(美国沃特世)，Franz扩散池(天津市正通科技有限公司)；PL202-L电子天平/XS105分析天平(Mettler Toledo公司)；AYJ1-0501-U纯水机(重庆市颐科公司)；Inertsil ODS-3C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；透析膜(孔径0.45μm聚醚砜膜)；HPLC滤膜(0.45μm滤膜)；电动剃毛器；外科手术剪；线性探针(膜长30mm，5000 Da)；液闪计数器。

2 方法

2.1 含量测定HPLC色谱条件

洛索洛芬色谱柱[3]：Inertsil ODS-3C18柱(4.6mm×250 mm，5um)，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液(40:60，PH3.5)，λ=221nm。氟比洛芬色谱柱[4]：C18柱，流动相：甲醇7.42nmol/L，λ=247nm。吲哚美辛色谱柱[5]：C18柱，流动相：甲醇：水(0.5%冰醋酸) =3:1(PH5.98)，λ=266nm。吡罗昔康色谱柱[6]：C18色谱柱；流动相：乙腈-0.5%冰醋酸溶液(60:40)，λ=243nm。酮洛芬色谱柱[7]：C18柱，流动相：甲醇：水(稀磷酸)=80:20(PH4)，λ=260nm。吡罗昔康色谱柱[8]：以上均为柱温40℃，流速1mL/min，进样量20ul。

2.2 体外释放度实验[5,8,9]

①配制0.01mol·L-1磷酸盐缓冲液PBS(pH7.4)，作为接收介质，预温至37.0℃；②将A组药固定于Franz扩散池扩散室与接收室间，释放面向下，在贴膏下方放入透析膜，将释放介质加至刻度线，搅拌转速600 r/min，分别于1、2、4、6、8、12、24h取2mL释放液，含量测定，并补充等量空白介质。计算累积释放度(%)和绘制药物渗透曲线。Ln=(Cn×V+Σi=1n-1Ci×V0)/W×100。Ln为累积释放度，Cn为第n个时间点样品的浓度，V为接收池体积，Ci为第i个时间点样品的浓度，V0为每次取样的体积，W为样品中相应主药成分的含量；③其他组实验方法参照上述A组的实验方法。

表1 常见非甾体抗炎药体外渗透率比较

2.3 体外透皮实验[3,5,8,9]

①制备离体皮肤：巴比妥麻醉大鼠，剃除鼠毛至腹部皮肤表面光洁。快速断髓处死，剥离全层腹部皮肤，去皮下脂肪和结缔组织，PBS冲洗。② 体外透皮实验：采用Franz扩散池法，上室为扩散室，下室为接受室，有效扩散面积1.77cm2。将A组药贴鼠皮上，固定在两室之间，接收室注满PBS，排气泡，使液面完全与皮肤内层接触，搅拌转速300r·min-1，32℃，在2、4、6、8、10、12、24 h取接收液1mL，补加同体积的新鲜接收液，测含量，计算单位面积累积透过量Qn和绘制渗透曲线。Qn=(VCn+∑n-1i=1Ci×1)/S式中Qn为第n个时间点的单位面积累积透过量，V为接收室中接收液的体积，Cn为第n个取样点测的药物浓度，1代表取样体积1mL，S为扩散面积；③其他组参考A组的实验方法。

2.4 含水量检测

每组取3贴，称重，100℃烘箱烘12h，再称重，求前后差值和平均值。

2.5 分布-同位素示踪法[10-12]

①透析膜探针植入：取三只大鼠，麻醉，分别将线性探针用穿刺针引导植入皮肤、骨骼肌、关节腔，将引导针抽回，将微透析探针膜管留于靶组织中，固定，灌流缓解创伤1h。②本底试验：以空白液灌流，连续收集样品，加水性闪烁剂，5min内衰减计数作为本底。③回收率试验：平衡后，灌流含洛索洛芬钠灌流液，采样间隔1h，样品20ul，测相对损失率。④在体皮肤微透析实验：将14C标记洛索洛芬钠凝胶膏贴敷于大鼠腹部，相同流速灌流，在给药后1 h、2h、4h、8 h、12h、24 h、48 h(揭除后24 h)各取微透析样品20ul，加入水性闪烁液，液闪计数仪测放射性强度，扣除本底并校正。骨骼肌和关节腔微透析实验参照上述方案；⑤其他五组参照A组方案。⑥绘制药物浓度变化曲线。

2.6 统计分析

3 实验结果

3.1 体外释放度

A、B、C、D、E、F组的12h平均累积释放率分别为88.4±5.2%，79.8±6.4%，80.2±7.2%，81.8±4.4%，75.2±5.2%，80.2±6.2%，结果提示A组洛索洛芬凝胶膏12h累计释放率更高(P<0.05)。

图1 常见外用非甾体抗炎药的体外释放度曲线

3.2 体外透皮研究

A、B、C、D、E、F组的12h平均累积渗透率分别为84.4±4.4，80.2±5.3%，78.2±5.3%，78.2±4.6%，76.1±4.2%，75.8±4.8%。结果提示A组洛索洛芬凝胶膏的12h累计渗透率更高(P<0.05)。

3.3 含水量

A、B、C、D、E、F组 的 含 水 量 分 别 为53.2±2.4%，42.7±1.5%，54.1±1.8%，2.4±0.4%，2.2±0.3%，2.1±0.3%，其中A组洛索洛芬钠凝胶膏和C组吲哚美辛凝胶贴膏含水量更高。

3.4 分布

六组药物在靶组织中药物浓度变化趋势是相似的，均在12h左右达到最大值，A组在给药12h皮肤、骨骼肌、关节腔中药物浓度分别达到(286.3±35.9)μg/g、(286.4±31.5)μg/g、(146.4±31.5)μg/g，在24h药物浓度分别是(235.3±34.8)μg/g、(112.2±36.4)μg/g、 (62.2±36.4)μg/g，均高于其他五组(P<0.05)。结果提示A组洛索洛芬钠凝胶膏渗透更多、更深、更持久。

图3 皮肤中药物浓度变化曲线(ug/g)

图4 骨骼肌中药物浓度变化曲线(ug/g)

图5 关节腔中药物浓度变化曲线(ug/g)

4 讨论

外用NSAIDs作为经皮给药系统药物，药物的释药性能是影响药效发挥的关键因素，由于局部经皮给药后的血药浓度都非常低，单靠检测局部用药后的血(尿)药浓度往往不能用来衡量药物的生物等效性。而离体皮肤的吸收、分布和代谢等与在体皮肤相比都发生着巨大的改变，因而无法体现药物在皮肤中代谢的真实过程。因此本研究选择离体皮肤进行药物释放和透皮渗透方面的研究，并结合在体动物皮肤药代动力学实验，更全面地研究药物释药性能及其分布情况。

本研究结果提示：洛索洛芬钠凝胶A组的12h累计释放率和累计渗透率达到(88.4±5.2)%和(84.4±4.4)%，高于其他五组(P<0.05)，这可能与凝胶膏剂型的含水量有关，研究发现了洛索洛芬钠凝胶膏和吲哚美辛凝胶贴膏含水量达到(53.2±2.4)%和(54.1±1.8)%，高于氟比洛芬钠凝胶膏、吡罗昔康贴、洛索洛芬钠贴。另外在体分布实验结果显示A组在给药12h皮肤、骨骼肌、关节腔中药物浓度分别达到286.3±35.9、286.4±31.5、146.4±31.5，在24h药物浓度分别是235.3±34.8、112.2±36.4、62.2±36.4(ug/g)，均高于其他五种外用NSAIDs药物(P<0.05)，这表明了洛索洛芬钠凝胶膏渗透更多、更深、更持久，因此具有更优的透皮性能。

本研究不足之处：虽然同位素示踪法具有灵敏度高、检测方便、应用广泛等这些优点，但其所检测的只是原形药物和或体内代谢产物总的放射性强度，不能区分究竟是原形药物还是代谢产物，且数据精密度不及HPLC/MS等仪器。若在体分布实验能联合HPLC/MS检测，可增加一个维度研究药物分布以及药物代谢转化的过程，试验设计更科学。