血浆EBV-DNA检测在鼻咽癌诊断和预后判断中的应用价值

高天生，范小玲，吴惠惠

（梧州市红十字会医院放疗三区，梧州 543002）

EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是1964年由Epstein和Bar发现的，属于疱疹病毒科γ组，能感染人类及灵长类动物的B淋巴细胞［1］。EBV基因组的全部核苷酸序列测定结果表明，EBV基因组为双链DNA分子，序列长170～175kb［2］。经证实，EBV-DNA在鼻咽癌的诊断、预后、疗效评估等方面均具有重要意义［3-4］，但目前尚缺乏大量的临床数据及长期随访的研究。本研究中检测了早期鼻咽癌患者血浆中的EBV-DNA表达情况，并分析了其在鼻咽癌诊断和预后判断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象按照方便抽样原则，收集2014年5月～2016年1月期间本院收治的65例鼻咽癌患者的临床资料，设为病例组，其中男50例，女15例；年龄33～73岁，中位年龄45岁；临床分期I～II期。

纳入标准：经鼻咽部活检确诊为低分化鳞状细胞癌；临床分期为I～II期；随访截止至2019年2月，随访资料显示生存期≥3年；治疗期间均接受强调放疗联合同期化疗。

排除标准：合并其他恶性肿瘤疾病；合并严重内科疾病。

剔除标准：不符合纳入标准；由于临床资料不全而影响最终分析结果的受试者。

选取同期在门诊体检的65名健康志愿者，设为健康对照组，其中男50例，女15例；年龄33～73岁，中位年龄44岁。健康对照组、病例组受试者的性别、年龄无统计学差异，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 质量控制前期充分查阅相关文献，保证选题和科研设计有充分的理论基础及临床价值；咨询相关医务人员，保证研究的可操作性；对参与本研究的人员进行资料收集、数据分析等方面的培训。数据录入前，检查录入内容的完整性和准确性，核查无误后进行分析。

1.3 治疗方法病例组鼻咽癌患者均接受强调放疗联合同期化疗。化疗方案：顺铂80 mg/m2静脉滴注，放疗开始后d1，d22，d43进行。强调放疗方案：采用6 MV直线加速器进行强调放疗，鼻咽癌计划靶体积为 70.06 Gy/31次，淋巴结计划靶体积为66.03 Gy/31。5次/周。

1.4 EBV-DNA检测采集健康对照组、病例组（治疗前、治疗1个月后）受试者静脉血3 mL，2000 r/min离心后分离血浆，采用EBV荧光定量聚合酶链反应，按照检测试剂盒（购于美国eBscience公司）说明书进行血浆中EBV-DNA的定量检测。将EBV-DNA＞1×102copy/mL定义为EBV-DNA检测阳性。

1.5 观察指标及评价方法

1.5.1 EBV-DNA阳性检出率统计并比较健康对照组、病例组治疗前的EBV-DNA阳性检出率。

1.5.2 EBV-DNA检测对鼻咽癌的诊断效能以鼻咽部活检诊断结果为金标准，进行治疗前的EBV-DNA检测结果对鼻咽癌的诊断效能分析，绘制受试者工作特征（ROC）曲线，统计曲线下方面积和所对应的准确度、敏感度、特异度。

1.5.3 EBV-DNA与鼻咽癌近期疗效、远期疗效的关系病例组的65例鼻咽癌患者均于治疗1个月后进行EBV-DNA检测（根据检测结果分为阴性组、阳性组）并评价临床疗效。临床疗效参考文献［5］中的标准进行评价，分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、病情稳定（SD）、疾病进展（PD）。比较阴性组、阳性组治疗1个月后的临床疗效。根据随访资料统计病例组65例鼻咽癌患者治疗后的1年、3年复发转移情况，比较阴性组、阳性组的远期复发转移情况。

1.6 统计学处理本研究中的数据应用SPSS 22.0软件进行统计及分析，计数资料用例数表示；四格表资料采用卡方检验；等级资料采用非参数检验。用受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析EBV-DNA检测结果对鼻咽癌的诊断价值，曲线下面积采用Z检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组EBV-DNA阳性检出率比较健康对照组的65例受试者中，血浆EBV-DNA阳性例数为6例，EBV-DNA阳性检出率为9.23%（6/65）。治疗前，病例组的65例受试者中，血浆EBV-DNA阳性例数为61例，EBV-DNA阳性检出率为93.85%（61/65）。经统计，病例组血浆EBV-DNA阳性检出率明显高于健康对照组（χ2=93.165；P＜0.001）。

2.2 EBV-DNA检测对鼻咽癌的诊断效能分析ROC曲线分析结果显示，EBV-DNA阳性在鼻咽癌诊断中的ROC曲线下方面积为0.923（标准错误=0.027，P值＜0.001，95%CI=0.870～0.976），见图1。其所对应的准确度、敏感度、特异度分别为0.923、0.938、0.908。

图1 EBV-DNA检测阳性诊断鼻咽癌的ROC曲线

2.3 EBV-DNA与鼻咽癌近期疗效、远期疗效的关系病例组的65例鼻咽癌患者均于治疗1个月后评价近期疗效，并进行EBV-DNA检测。近期临床疗效评价结果显示，CR为57例，PR为5例，SD为2例，PD为1例。EBV-DNA检测结果显示，治疗1个月后，65例鼻咽癌患者中EBV-DNA阳性例数为10例，EBV-DNA阳性检出率为15.38%（10/65）。

非参数检验结果显示，EBV-DNA表达为阴性的鼻咽癌患者的近期疗效与EBV-DNA表达为阳性的鼻咽癌患者之间比较，差异有显著统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 EBV-DNA与鼻咽癌近期疗效的关系［n（%）］

EBV-DNA表达为阴性的鼻咽癌患者的1年复发转移率、3年复发转移率均明显低于EBV-DNA表达为阳性的鼻咽癌患者（P＜0.05）。见表2。

表2 EBV-DNA与鼻咽癌远期疗效的关系［n（%）］

3 讨论

3.1 鼻咽癌概述鼻咽癌是头颈部肿瘤中发病率居高的恶性肿瘤，在欧美国家的发病率较低，约为0.5～2.0/10万人，但在东南亚和华南地区的发病率较高（高达25/10万人）［6-7］。研究表明，遗传易感性因素、EBV感染、环境因素等都是影响鼻咽癌发生发展的独立影响因素［8-9］。鼻咽部的解剖学位置具有一定的特殊性，因此鼻咽癌的发病具有一定的隐匿性，早期临床症状并不典型。患者通常是出现了显著的临床症状（如淋巴结肿大、回吸涕血等）时才就诊，但此时通常已发展到局部晚期。伴随临床影像学诊断、放化疗技术、多学科综合治疗技术的发展，鼻咽癌的远期预后情况有了明显的改善，据统计，早期鼻咽癌的5年生存率已达90%以上［10］。体格检查、纤维鼻咽镜、计算机断层扫描、核磁共振等是临床常用的鼻咽癌诊断技术，但由于费用昂贵因此普适性较差。探寻敏感度和特异度均较高的血液学检测指标是近年来鼻咽癌诊断及预后评估相关研究的主要方向，同时考虑到EBV在鼻咽癌致病中的特殊地位，外周血中游离EBV-DNA与鼻咽癌的关系研究是学者们近年来研究的热点［11］，本研究进一步分析了血浆EBV-DNA检测在鼻咽癌诊断和预后判断中的应用价值。

3.2 EBV-DNA与鼻咽癌诊断血浆EBV-DNA在鼻咽癌的临床诊断中是否可以作为独立的参考指标是目前研究的热点。Hui等［12］人在报道中称，鼻咽癌患者中血浆EBV-DNA的阳性率为96%，而正常健康人群中血浆EBV-DNA的阳性率均为7%。为了探讨EBV-DNA检测在鼻咽癌早期筛查中的应用价值，本研究仅纳入早期（I～II期）鼻咽癌患者为研究对象，本研究数据显示，鼻咽癌患者和健康人群的血浆EBV-DNA阳性检出率分别为93.85%和9.23%，进一步的诊断效能分析结果显示，EBV-DNA阳性在鼻咽癌诊断中的ROC曲线下方面积为0.923，准确度、敏感度、特异度分别为0.923、0.938、0.908。以上均提示外周血EBV-DNA检测结果在临床鼻咽癌的早期筛查中具有显著的应用价值。

3.3 EBV-DNA与鼻咽癌近期、远期疗效Altekin等［13］将EBV-DNA应用于鼻咽癌诱导化疗疗效的评估中，并以1周为观察时间间隔，分析鼻咽癌患者EBVDNA的检测结果，结果显示，治疗后EBV-DNA检测阳性率显著降低。笔者在前期的研究中也得出了相似的结论，本研究更进一步分析了放化疗1个月后的近期临床疗效与EBV-DNA检测结果之间的关系。统计数据表明，EBV-DNA表达阳性的鼻咽癌患者中，PR、SD、PD患者所占比例较高，而CR患者所占比例较低。EBV-DNA表达阴性的鼻咽癌患者中，CR患者所占比例较高，而PR、SD、PD患者所占比例较低。提示治疗后EBV-DNA水平的下降是临床完全缓解的征象；反之，治疗后EBV-DNA的高水平预示着肿瘤缓解困难，应采取调整治疗方案等方式改善临床疗效。本研究还通过对治疗后1年、3年的复发转移率的统计，分析了EBV-DNA表达与鼻咽癌远期疗效的关系，研究数据显示，EBV-DNA表达为阴性的鼻咽癌患者的1年复发转移率、3年复发转移率均明显低于EBV-DNA表达为阳性的鼻咽癌患者。但由于入组样本例数有限，本研究仅分析了治疗后EBV-DNA表达情况与近期、远期疗效之间的关系。在后续的研究中，将进一步分析鼻咽癌患者治疗前EBV-DNA浓度与预后结局之间的关系，为EBV-DNA在鼻咽癌早期筛查中的相关研究提供参考。本研究结果提示血浆EBV-DNA检测可作为临床鼻咽癌早期诊断和预后判断的参考指标。以往的研究多证实了血中EBV-DNA检测在晚期鼻咽癌患者辅助诊断中的应用价值，本研究对象以I～II期鼻咽癌患者为研究对象，填补了该项研究的空白，具有一定的创新性。在后续的研究中，将进一步增加样本例数并延长随访时间，进一步探讨EBV-DNA的动态水平与鼻咽癌发展、预后之间的关系。