上皮性卵巢癌患者中叉头盒D1 的表达水平及其临床意义

陈琳，左亚敏，赵松兰，沈亚杰

镇江市第一人民医院妇产科，江苏 镇江 212002

上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）是世界范围内导致女性肿瘤相关性死亡的最常见原因之一。由于临床症状隐匿，不少卵巢癌患者发现时已经是晚期，且疾病进展迅速，EOC 患者的临床预后并不理想，其5 年生存率低于50%。因而，探索EOC 发生、发展过程中涉及的分子机制，并且寻找早期或者特异性分子诊断标志，对EOC 的早期诊断和治疗至关重要。叉头盒（forkhead box，FOX）转录因子位于染色体5q13.2，全长2.27 kb，在细胞生长、分化、迁移等生命过程中发挥重要作用。作为FOX 家族的重要成员，叉头盒D1（FOXD1）可促进肿瘤细胞的增殖、转移，影响肿瘤细胞的化疗抗性，并且与肿瘤患者预后不良有关。然而，有关EOC 中

FOXD1

表达情况的临床研究目前尚未见报道。因此，本研究检测EOC 患者肿瘤组织中

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表达情况，分析其与临床特征和EOC 患者预后之间的关系，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2007 年10 月至2016 年12 月于镇江市第一人民医院就诊的未经化疗的65 例EOC 患者。纳入标准：首次发现并经病理学活检确诊为EOC。排除标准：既往接受过放疗或化疗；合并其他恶性肿瘤。选择同期28 例行卵巢切除术的卵巢良性疾病患者作为对照。纳入标准：首次发现并经病理学活检确诊为卵巢良性疾病。排除标准：合并包含卵巢在内的其他组织恶性肿瘤。EOC 患者年龄36～88 岁，中位年龄59 岁；根据2000 年国际妇产科联 盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期标准，Ⅰ～Ⅱ期19 例，Ⅲ～Ⅳ期46 例；分化程度：高分化15 例，中分化24 例，低分化26 例。卵巢良性疾病患者年龄32～85 岁，中位年龄60 岁。EOC 患者和卵巢良性疾病患者的年龄比较，差异无统计学意义（

P

﹥0.05），具有可比性。收集EOC 患者的EOC 组织65 例和卵巢良性疾病患者的卵巢组织28 例。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有患者均对本研究知情并签署知情同意书。

1.2 组织RNA 提取和cDNA 合成

首先通过研磨组织获取细胞，总RNA 按照Trizol 法提取，通过比色后将所有标本浓度调节一致。逆转录参照Thermo 公司的RevertAid RT Reverse Transcription Kit 说明书进行，反应体系离心后进行聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR），程序包括三步：①25 ℃5 min；②42 ℃60 min；③70 ℃5 min。收集PCR 产物置于4 ℃保存待用。

1.3 实时定量聚合酶链反应（quantitative realtime polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测FOXD1 表达水平

应 用qRT-PCR 法（SYBRPremix Ex Taq试剂）检测

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的转录本水平，具体的PCR 反应体系及反应条件参照说明书，每次PCR 实验均带有阳性和阴性质控，

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表达水平通过2法进行计算分析。

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引物序列：上游5'-GCGAGGACGAAGAAGACGAGGAA-3'，下游5'-GAGGTTGTGGCGGATGCTGTT-3'，产物长度为458 bp；内参基因

GAPDH

引物序列：上游5'-GAAGGTCGGAGTCAACGG-3'，下游5'-TGGAAGATGGTGATGGGAT-3'，产物长度为222 bp。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0 软件进行数据处理，不满足正态分布的计量资料以中位数和四分位数[

M

（

P

，

P

）]表示，组间比较采用Mann Whitney

U

检验；计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用

χ

检验；采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线进行诊断价值分析，计算ROC曲线下面积（area under the curve，AUC）；采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，组间比较采用Log-rank 检验；以

P

﹤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 卵巢良性疾病患者和EOC 患者中FOXD1 表达水平的比较

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在EOC 组织中的表达水平为0.574（0.352，0.958），明显高于卵巢良性疾病患者的0.123（0.051，0.355），差 异 有 统 计 学 意 义（

U

=318.000，

P

﹤0.01）。采用X+2SD（本研究中均数+2倍标准差为0.788）的分组方法，将65 例EOC 患者分 为

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高 表 达（

FOXD1

≥0.788，

n

=21）和

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低表达（

FOXD1

﹤0.788，

n

=44）。

2.2 FOXD1 表达水平对EOC 的诊断价值

ROC 曲线分析结果显示，

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表达水平诊断EOC 的AUC 为0.825（95%CI：0.730～0.921，

P

﹤0.01），其灵敏度和特异度分别为0.738 和0.786。（图1）

图1 FOXD1表达水平诊断EOC的ROC曲线

2.3 不同FOXD1 表达情况EOC 患者临床特征的比较

FOXD1 高表达和低表达EOC 患者的肿瘤直径、肿瘤分化程度、血浆糖类抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）水平及淋巴结转移情况比较，差异均有统计学意义（P﹤0.05）；而FOXD1高表达和低表达EOC 患者的年龄、FIGO 分期及腹腔积液情况比较，差异均无统计学意义（P ﹥0.05）。（表1）

表1 不同FOXD1 表达情况EOC 患者临床特征的比较

2.4 生存情况的比较

FOXD1 高表达EOC 患者的中位总生存期为30.62（12.22，44.26）个月，

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低表达EOC 患者的中位总生存期为24.62（9.89，45.47）个月，尽管

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高表达患者的中位总生存期稍高于

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低表达患者，但生存曲线分析结果显示，

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低表达患者的总生存情况优于

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高表达患者，差异有统计学意义（

χ

=5.739，

P

=0.017）（图2）。

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高表达EOC 患者的中位无进展生存期为11.17（8.95，27.84）个月，

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低表达EOC 患者的中位无进展生存期为13.83（8.57，23.06）个月，生存曲线分析结果显示，

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低表达和

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高表达患者的无进展生存情况比较，差异无统计学意义（

χ

=1.951，

P

=0.162）（图3）。

图2 FOXD1低表达（n=44）与FOXD1高表达（n=21）EOC患者的总生存曲线

图3 FOXD1低表达（n=44）与FOXD1高表达（n=21）EOC患者的无进展生存曲线

3 讨论

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基因作为一种转录因子可能参与多种生理过程，在肿瘤的发生中也扮演重要的作用。已有文献报道

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可参与细胞生长、侵袭等生物学过程，从而赋予肿瘤特性。Wu 等发现

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可以通过间接调节黑色素瘤细胞中的基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP9）和Ras 相关C3 肉毒梭菌毒素1B（Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1B，RAC1B）影响肿瘤细胞的侵袭和迁移。过表达

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可以通过激活胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）1/2 或蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又称AKT）/核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）等通路促进结肠癌发生发展。此外，在其他实体肿瘤如前列腺癌、神经胶质瘤、非小细胞肺癌、宫颈癌中

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表达上调，并可作为重要因子介导肿瘤的侵袭、转移等。本研究通过qRT-PCR的方法检测了EOC 患者肿瘤组织中

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表达水平，发现其较非肿瘤患者显著上调。ROC 曲线分析提示

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异常表达有助于EOC 的诊断，具有潜在的临床应用价值。此外，

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高表达可能与肿瘤直径、肿瘤分化程度及血浆CA125 水平等密切相关。以上结果也提示

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可能促进EOC 细胞增殖以及细胞分化。当然，上述结果仍需深入的体外和体内研究证实。除了作为肿瘤诊断分子标志，

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异常表达也可影响实体肿瘤患者的预后。Nakayama 等发现

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表达上调与非小细胞肺癌患者不良预后相关。在高级别胶质瘤的临床标本中，

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和醛脱氢酶1 家族成员A3（aldehyde dehydrogenase 1 family member A3，ALDH1A3）表达水平呈正相关，且两者异常高表达可影响患者的预后。而本研究发现

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表达与EOC 患者的预后有关，提示

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可以作为监测EOC 患者预后情况的重要分子标志。与本文研究不同的是，Wang等发现低表达

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与高级别浆液性卵巢癌患者预后不良相关，出现这种情况可能与标本的选择不同有关，上述研究对象为高级别浆液性卵巢癌，仅是EOC 中的一个特殊亚型，而本文分析的是整个EOC 群体，因而可能出现

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表达水平的差异。当然，本研究也存在一些不足之处。本研究涉及的样本数量较少，且重点分析的是EOC 患者中

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mRNA 水平，而无充足的标本以分析FOXD1 蛋白情况，因而仅是初步探索了EOC 中该基因的表达态势，后续还需扩大样本进一步分析以验证上述结论。综上所述，

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高表达在EOC 患者中常见，可以作为EOC 的辅助诊断依据，并且

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高表达与EOC 患者预后不良相关。