蒙药斯日西散质量标准研究

敖登其木格 王海荣 乌汉其木格 锡林其其格 特格喜白音 阿拉腾其木格

摘要 目的：建立蒙药斯日西散的质量标准。方法：用显微和薄层色谱法对斯日西散中的大黄、土木香、寒水石、山柰、木鳖子、石榴、黑冰片进行显微鉴别，对大黄、山柰、土木香进行薄层色谱鉴别;用高效液相色谱法测定大黄中大黄素的含量。结果：斯日西散显微鉴别特征图片清晰，薄层鉴别在大黄、山柰、土木香对照品斑点对应的位置具有相同颜色的清晰斑点，阴性无干扰。大黄素在0.001 7～0.135 2 mg/mL范围内与峰面积的线性关系良好（r=0.999 8），平均回收率为102.15%，平均含量为0.105 5 mg/g。结论：该方法全面、简便、准确，为斯日西散质量控制提供可靠标准。

关键词 斯日西散;显微鉴别;薄层鉴别;高效液相色谱

Abstract Objective：To improve the quality standard of Mongolian medicine sirixi.Methods：Microscopic and TLC identification method was used to distinguish Radix et Rhizoma Rhei，Radix Inulae，Han Shuishi，Rhizoma Kaempferiae，Semen Momordicae，Shiliu，Hei Bingpian in Mongolian medicine sirixi for microscopy and thin layer chromatography.Emodin in Rad ix et Rhizoma Rhei was determined by High Performance Liquid Chromatography.Results：The microscopic identification feature pictures of Sirixis were clear，and the thin-layer identification had clear spots of the same color at the positions corresponding to the spots of Radix et Rhizoma Rhei，Radix Inulae，and Rhizoma Kaempferiae reference substances，negative and no interference.Emodin has a good linear relationship with the peak area in the range of 0.001 7 to 0.135 2 mg/mL （r=0.999 8），the average recovery rate was 102.15%，and the average content was 0.105 5 mg/g.Conclusion：The method can be used to distinguish Mongolian medicine sirixi for its quality control.

Keywords Mongolian medicine sirixi; Microscopic identification; TLC identification; High performance liquid chromatography

中图分类号：R29;R284文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.14.005

蒙药斯日西散是传统蒙医药中的一个经典药物，有着上千年的历史，该药由诃子、木鳖子、五灵脂、碱面、石榴、黑冰片、寒水石、大黄、土木香、山柰等十味药材组成，其功效主治为祛“宝日”病，“宝日”病，初、中期暖气吞酸、胸背作痛，气滞血瘀，血热陷中，潜伏于脏等病症。临床主要用于胃肠积热、食不消、返酸、腹胀、肝胆“希日”、便秘[1-2]。虽然斯日西散剂临床应用非常广泛，但是至今没有确切的质量标准，故本研究中对斯日西散剂进行显微鉴别及薄层鉴别，并采用高效液相色谱法对大黄中大黄素的含量进行控制，为建立斯日西散剂的质量控制方法提供有效依据，以全面提升该制剂的质量标准。

1 仪器与试药

1.1 仪器 电子天平（Sartorius，德国，型号：BT25S、BSA423S）;暗箱三用紫外线分析仪（上海嘉鹏科技，型号：ZF-7）;数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，型号：KQ-500DE）;电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器，型号：DHG-9240A）;超纯水仪（默克，德国，Milli-Q Advatage A10）倒置荧光显微镜（尼康株式会社，日本，型号：Ti-U）;高效液相色谱仪（Thermo，美国，型号：ultimate3000）。薄层板为0.25%硝酸银溶液制备的自制硅胶G薄层板、预制硅胶H板（青岛海洋化工厂分厂，型号：100 mm×200 mm）、预制硅胶GF254板（青岛海洋化工厂，型号：100 mm×200 mm）;

1.2 试剂 甲醇（Fisher色谱溶剂，货号：A452-4）、乙腈（Fisher色谱溶剂，货号：A998-4）为色谱纯，甲醇（天津市致远化学试剂有限公司，生产批号：20160613）、盐酸（北京化工厂，生产批号：20120818）、乙醚（天津市福晨化学试剂有限公司，生产批号：20160601）、三氯甲烷（天津市福晨化学试剂有限公司，生产批号：20160218）石油醚（天津市福晨化學试剂有限公司，生产批号：20160601），甲酸（天津市福晨化学试剂有限公司，生产批号：20160409）均为分析纯试剂，水为离子交换高纯水。

1.3 分析样品 斯日西散（内蒙古自治区国际蒙医医院制剂中心，生产批号：20170118、20150629、20170701）;斯日西散模拟样品（实验室自制）;山柰对照药材（生产批号：121504-201203）、对甲氧基桂皮酸乙酯对照品（生产批号：110835-201202）、大黄对照药材（生产批号：120984-201202）、大黄酸对照品（生产批号：110757-200206）、大黄素对照品（生产批号：110756-201512）、土木香内酯对照品（生产批号：110760-201209）、异土木香内酯对照品（生产批号：110761-200204）均购自中国药品生物制品检定所。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别 依据2015版《中华人民共和国药典》附录中的显微鉴别方法，采用粉末制片法。具体步骤如下，载玻片上滴加少量水合氯醛试液，再取少许斯日西散粉末搅拌均匀后酒精灯上微微加热，见粉末颜色变浅、组织透明后滴加少量甘油，加盖玻片，显微镜观察。处方中具有专属性、镜检率高的药味显微特征归属如下：1）石榴石细胞，呈类圆形或长卵形;2）黑冰片，黑色、呈不规则碎块状;3）山柰淀粉粒，淀粉粒众多，单粒类圆形或三角形，多数扁平，脐点、层纹不明显;4）土木香，网状导管直径30～100 μm;5）大黄草酸钙簇晶，草酸钙簇晶大，直径20～160 μm;6）寒水石晶体团块不规则形，大小不等，近透明;7）木鳖子子叶薄壁细胞，子叶薄壁细胞多角形，内含脂肪油滴及糊粒粉。见图1。

2.2 薄层鉴别

2.2.1 斯日西散中大黄的薄层鉴别 称取1 g斯日西散，加20 mL甲醇溶液浸泡1 h后滤过，取5 mL滤液蒸干，加10 mL水溶解残渣，再加1 mL盐酸溶液，加热回流30 min后立即冷却，20 mL乙醚提取两次，合并乙醚提取液，蒸干，加1 mL三氯甲烷溶解残渣，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1 g，同法制成对照药材溶液。按处方比例折算，相同工艺制备的模拟样品与阴性對照（缺大黄）各1 g，用相同方法制备模拟样品溶液以及阴性对照溶液。以大黄对照药材和大黄酸对照品为对照进行薄层色谱法（通则0502）实验，以石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，紫外光灯（365 nm）和日光下分别检视。结果显示大黄薄层鉴别分离效果好，被检成分斑点清晰，斯日西散色谱中在与大黄酸对照品相应的位置（Rf值0.48）上显橙黄色的荧光斑点，并且在与对照药材色谱相应的位置上显相同的5个橙黄色荧光斑点，而阴性对照（缺大黄）色谱中在相应的位置上未出现相同的荧光斑点，表明处方中其他组分对大黄鉴别无干扰，具有专属性。见图2。3批供试品和模拟样品薄层色谱结果见图3。

2.2.2 斯日西散中山柰的薄层鉴别 取本品内容物3 g，加甲醇5 mL，超声处理10 min，滤过，过滤作为供试品溶液。另取对甲氧基肉桂酸乙酯对照品，加甲醇制成每1 mL含5 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例折算，分别取相同工艺制备的模拟样品与阴性对照（缺山柰）各3 g，同法制备模拟样品溶液以及阴性对照溶液。另取适量山柰对照药材，同法制成对照药材溶液。以山柰对照药材和对甲氧基肉桂酸乙酯对照品为对照进行薄层色谱实验，结果供试品与模拟样品色谱中，在与对照品和对照品药材色谱相应的位置上显相同的荧光斑点（Rf值0.24），且同工艺同法制备的阴性对照（缺山柰）色谱中在相应的位置上未出现荧光斑点，表明处方中其他组分无干扰，具有专属性。见图4。3批供试品和模拟样品薄层色谱结果见图5。

2.2.3 斯日西散中土木香的薄层鉴别 取本品粉末5 g，加乙醚30 mL，振摇10 min，弃去乙醚液，药渣挥干乙醚，加乙酸乙酯20 mL，置水浴上加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，加2 mL无水乙醇溶解残渣，作为供试品溶液。另取土木香内酯对照品与异土木香内酯对照品制备对照品溶液。按处方比例折算，相同工艺制备的模拟样品与阴性对照（缺土木香）各5 g，同法制备模拟样品溶液以及阴性对照溶液。以土木香内酯和异土木香内酯为对照进行薄层色谱实验，结果斯日西散与模拟样品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的斑点（Rf值：土木香内酯0.63，异土木香内酯0.54），而阴性对照（缺土木香）色谱中在相应的位置上未出现斑点，表明斯日西散处方中其他组分无干扰，具有专属性。见图6。3批供试品和模拟样品薄层色谱结果见图7。

2.3 含量测定

2.3.1 液相色谱条件 通过系统适应性考察，确定液相实验色谱条件，色谱柱：C18柱（Thermo scientific，250 mm×4.6 mm，5 μm）;流动相：乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（42∶23∶35）;流速：1.0 mL/min;检测波长：254 nm;进样量：10 μL;理论塔板数：结合2015年版《中华人民共和国药典》一部“大黄”含量测定项下要求，本标准规定理论板数按大黄素峰计算应不低于3 000。

2.3.2 溶液制备 对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品0.003 38 g，加25 mL甲醇溶液制成每1 mL含0.135 2 mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品约4.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，密塞，称定质量，分别超声处理（功率200 W，频率40 kHz）45 min，再称定重量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.3 专属性实验 按斯日西散处方工艺制备不含大黄的阴性对照品，根据供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液（缺大黄）。精密吸取供试品溶液、大黄素对照品溶液与阴性对照溶液各10 μL注入液相色谱仪，按2.3.1的液相色谱条件测定。从图8可见，供试品色谱中在与对照品色谱保留时间相同的位置上有色谱峰出现，而阴性对照在与大黄素对照品色谱保留时间相同的位置上无色谱峰出现，表明该含量测定方法阴性无干扰，专属性好。

2.3.4 线性关系的考察 取大黄素对照品0.003 38 g，置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀配制母液。精密吸取母液，稀释2.5倍后再依次倍比稀释，制备浓度梯度的稀释液，吸入10 μL至液相色谱仪，按2.3.1液相色谱条件测定，以峰面积对大黄素量进行回归分析，结果大黄素在0.001 7～0.135 2 mg/mL范围内分别呈良好的线性关系。回归方程为：y=0.684 4x-0.735 8，r=0.999 8，标准曲线数值见表1。

2.3.5 精密度试验 精密称取约4.5 g同一批号斯日西散（生产批号：20170118）6份，分别按上述供试品溶液的制备方法制备，按2.3.1色谱条件进行测定，进样量各10 μL，计算大黄素峰面积的RSD为0.70%，符合2015版《中华人民共和国药典》一部要求，精密度良好。见表2。

2.3.6 准确度试验 取同一供试品（生产批号：20170118，含量0.050 6 mg/g）6份，各约2.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入大黄素对照品溶液2 mL（大黄素浓度为0.054 4 mg/mL），再分别精密加甲醇23 mL，按上述方法測定，实验结果表明：回收率在85%～110%之间，准确度符合要求。见表3。

2.3.7 稳定性试验 取同一供试品（生产批号：20170118），按上述供试品溶液的制备方法和色谱条件，分别于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h进行测定。见表4。从表中数据可见，在24 h内游离大黄素峰面积值基本稳定不变。

2.3.8 样品含量测定 取供试品3批（生产批号：20170118、20150629、20170701），按“2.3.2”方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项色谱条件对大黄素的含量进行测定（n=3），3批样品中大黄素的含量结果见表5。

2.3.9 耐用性实验 将柱温从25 ℃调到35 ℃，其他按正文的色谱条件，取2.3.5精密度测定实验中的样品进行测定，进样量为10 μL。见表6。实验结果表明，该方法耐用性良好。

3 讨论

斯日西是由治疗肝胃郁热型、肝胃不和型症候的阿拉坦-5与具有和胃健脾、导滞消积、行血止痛之功效的阿木日-6组成的制剂。有报道称，斯日西散联合肠内营养混悬液应用于脓毒症患者，可以极大程度上弥补单纯肠内营养液所导致的胃肠道并发症，并对胃肠道具有很好的保护作用[2]。同时其他临床研究也表明，阿拉坦-5对慢性胃炎、消化道溃疡、功能性消化不良等胃肠道疾病具有较明显的治疗作用[3-5]。而蒙药阿木日-6散，即2015版《中华人民共和国药典》记载的六味安消散，目前其临床应用也越来越广泛，有研究者总结阿木日-6散的临床应用，常用于便秘、功能性消化不良、胃脘痛、胃食管反流等[6]。

然而关于斯日西散质量标准的研究却不多。因此本研究首先对斯日西散中所含药材的显微和薄层鉴别进行了研究，因本制剂是以原药粉制成的散剂，故对大黄、土木香、寒水石、山柰、木鳖子、石榴、黑冰片进行了显微鉴别研究，结果显示显微鉴别特征图片清晰，可作为以上药材的鉴别依据;同时对组方中主要药味大黄、山柰、土木香进行了薄层鉴别研究，大黄为处方中主要药味之一，在处方中所占比例也较大，具有泻热通肠、凉血解毒的作用，参照2015版《中华人民共和国药典》一部“大黄”项下的薄层鉴别方法，以大黄对照药材和大黄酸为对照品进行条件摸索，确定方法并考察了室温22 ℃（相对湿度20%）和低温6 ℃、低湿（相对湿度35%）对薄层鉴别的影响，结果显示低温、低湿条件对整体分离效果无太大影响，耐用性良好，可用于该药质量标准。山柰具有行气温中、消食、止痛等功效，为处方中主要药味之一，本研究参照2015版《中华人民共和国药典》一部山柰项下的薄层鉴别方法，以山柰对照药材和对甲氧基桂皮酸乙酯为对照进行条件摸索，并对上述鉴别项进行了方法验证，专属性及耐用性考察试验。土木香具有健脾和胃等功效，为处方中主要药味之一，参照2015版《中华人民共和国药典》一部“土木香”项下的薄层鉴别方法试验的结果效果不好，无法鉴别。故参照2007版《内蒙古蒙药制剂规范》记载的阿拉坦-阿木日胶囊鉴别土木香项下的薄层鉴别方法，以土木香内酯和异土木香内酯为对照进行条件摸索，同样对上述鉴别项进行了方法验证，专属性及耐用性考察试验。

本研究对斯日西散中游离大黄素的含量测定进行了实验条件摸索，经分析方法验证，该方法重现性好，专属性强，方法中其他成分对大黄素测定无干扰，可用于该药质量标准。方法学验证过程当中，对25 ℃和30 ℃柱温进行了比较，结果大黄素保留时间略有差异，但分离度及理论板数没有变化，故本实验研究采用柱温25 ℃。而对检测波长的选择时，利用DAD检测器自190～400 nm做光谱扫描，结果大黄素在221～288 nm处有吸收峰，结合《中华人民共和国药典》2015年版一部“大黄”项下选择254 nm作为检测波长。对于斯日西散的提取方法，参照《中华人民共和国药典》2015年版一部“六味安消散”含量测定项下游离大黄素的供试品溶液的制备方法，并对提取效率进行了考察，结果显示超声时间45 min时，游离大黄素含量最高，故确定超声时间为45 min。同时也对峰纯度进行了考察，以二极管阵列检测对被测成分大黄素的峰进行纯度验证，大黄素峰匹配值为994，大于980，证明为单一组分。

本研究对斯日西散中的大黄、土木香、寒水石、山柰、木鳖子、石榴、黑冰片进行显微鉴别，对大黄、山柰、土木香进行薄层色谱鉴别;用高效液相色谱法测定大黄中大黄素的含量，为建立斯日西散质量标准提供了重要依据，将对进一步挖掘和开发该药有重要意义。

综上所述，本研究中大黄、山柰、土木香薄层鉴别用料少，操作简便，耐用性良好，专属性强，可用于该药质量标准。

参考文献

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[2]巴特金，苏和，张松波，等.蒙药斯日西散预防脓毒症患者肠内营养胃肠道并发症的疗效观察[J].中国药物与临床，2010，10（3）：358.

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[5]郎轶萱，杨丽，孙远杰.阿拉坦五味丸联合PPI为主三联疗法治疗Hp阳性老年慢性萎缩性胃炎[J].中国临床研究，2014，27（11）：1413-1415.

[6]张双林，莫日根图，王文全，等.蒙药阿木日-6散临床应用[J].中国民族医药杂志，2014，20（4）：65-66.

（2019-06-26收稿 责任编辑：王明）