毛果巴豆枝叶的化学成分研究

李根 潘争红 李海云 符毓夏 李连春 于玲玲 宁德生

摘 要： 为研究毛果巴豆枝叶中的化学成分，该文采用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱以及HPLC等多种色谱相结合的方法，对毛果巴豆枝叶95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行分离，从中得到8个化合物，通过波谱数据分析并结合文献比对，将其鉴定为2β-hydroxyteucvidin acetate（1），2β-hydroxyteucvidin（2），crotoeurin B（3），山奈酚-3-O-（6″-O-顺式对香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（4），山奈酚-3-O-（6″-O-反式对香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（5），栗苷A（6），cerevisterol（7），尿嘧啶（8）。化合物2-7均为首次从该植物中分离得到。

关键词： 巴豆属， 毛果巴豆， 化学成分， HPLC， 结构鉴定

中图分类号： Q946.8  文献标识码： A  文章编号： 1000-3142（2021）07-1077-05

Abstract： To study the chemical constituents from the twigs and leaves of Croton lachynocarpus， eight compounds were isolated from 95% ethanol extract of twigs and leaves of C. lachynocarpus， by means of various chromatographic techniques including column chromatography over silica gel， Sephadex LH-20， and reversed-phase HPLC. Compounds were identified as 2β-hydroxyteucvidin acetate（1）， 2β-hydroxyteucvidin（2）， crotoeurin B（3）， kaempferol-3-O-（6″-O-cis-p-coumaroyl）-β-D-glucopyranoside（4）， kaempferol-3-O-（6″-O-trans-p-coumaroyl）-β-D-glucopyranoside（5）， castanoside A（6）， cerevisterol（7）， uracil（8） by analyzing their spectra data and comparing with the previously reported literatures. Compounds 2-7 were obtained from the plant for the first time.

Key words： Croton L.， Croton lachynocarpus， chemical constituents， HPLC， structure identification

毛果巴豆（Croton lachynocarpus）为大戟科（Euphorbiaceae）巴豆属（Croton L.）植物，又名小叶双眼龙，主要分布于广西、广东、江西、湖南南部和贵州南部的山地疏林或灌丛中，其幼枝、幼叶、花序和果均密被星状柔毛（中国科学院中国植物志编辑委员会， 1996）。该植物具有祛风除湿、散瘀止痛、消腫解毒等功效，民间多以根、叶入药，用于治疗跌打肿痛、风湿性关节炎等疾病。本课题组前期已从毛果巴豆根中分离得到三萜、甾醇、酚酸酯类等成分（Pan et al.，2014;潘争红等，2014）;从叶子中发现多种现代香料合成工业可开发利用的挥发油成分，如α-松油醇、桉树醇、α-红没药烯等（宁德生等，2013）。但迄今为止，该植物的物质基础和药理学研究仍较少，致使其应用仍处于中药复方制剂的层面，严重限制了毛果巴豆的开发与利用。因此，为了更全面地阐明该植物的物质基础，寻找更多具有开发利用价值的活性化合物，本课题组进一步开展毛果巴豆枝叶95%乙醇提取物的化学成分研究，从中分离鉴定出8个化合物，其中，1-3为二萜类化合物，4-6为黄酮类化合物，化学结构式见图1。化合物2-7均为首次从毛果巴豆枝叶中分离得到。

1 仪器与材料

AVANCE Ⅲ HD 500 MHz超导核磁共振波谱仪（TMS内标，瑞士Bruker公司）;LC/MS-IT-TOF质谱仪（日本岛津公司）;Agilent 1200高效液相色谱仪，高效液相所用试剂为色谱纯（赛默飞世尔科技（中国）有限公司），其试剂均为分析纯（西陇化工股份有限公司）;柱色谱和薄层色谱所用硅胶（青岛海洋化工有限公司）;Sephadex LH-20凝胶（瑞士Amershan Biosciences公司）。

毛果巴豆枝叶采自广西桂林市阳朔县，由广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所许为斌博士鉴定。凭证样品保存于广西植物功能物质研究与利用重点实验室。

2 提取与分离

毛果巴豆枝叶8.0 kg，阴干后粉碎，加入95%乙醇40 L，室温下浸提24 h，过滤，滤渣以上述方法再提取2次，合并提取液，减压浓缩得到850 g的浸膏。取800 g的浸膏加入适量的水超声分散后，依次加入石油醚、乙酸乙酯萃取3次，每次萃取溶剂用量为2 L，减压浓缩分别得到石油醚部位144 g、乙酸乙酯部位239 g。

取乙酸乙酯萃取部位189 g，经硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮（1∶0→0∶1）为洗脱剂进行梯度洗脱，各洗脱流份经过TLC检测合并得到4个组分Fr.1～Fr.4。Fr.2组分经硅胶柱色谱反复纯化（石油醚-丙酮=8∶1），得到化合物1（9 mg）、2（7.2 mg）、7（15.4 mg）和8（9.6 mg）;Fr.3组分通过半制备高效液相色谱分离（50% CH3OH，含 0.1% HCOOH）得到化合物5（6.6 mg）、6（4.6 mg）;Fr.4组分利用Sephadex LH-20柱色谱纯化，以氯仿/甲醇（1∶1）洗脱，得到化合物3（10.2 mg）和4（7.9 mg）。

3 结构鉴定

化合物1 针状结晶。HR-ESI-MS m/z： 387.1816 [M+H]+， 分子式C21H22O7。1H-NMR（500 MHz， CDCl3）： δ 6.36（1H， m， H-14）， 5.37（1H， t， J=8.0 Hz， H-12）， 2.55（2H， dd， J=8.5， 15.0 Hz， H-11b）， 2.09（3H， s， OAc）， 1.94（1H， dd， J=8.5， 14.0 Hz， H-11a）， 1.35（3H， d， J=7.0 Hz， H-17 ）; 13C-NMR（125 MHz， CDCl3）： δ 28.0（C-1， t）， 66.8（C-2， d）， 24.9（C-3， t）， 124.1（C-4， s）， 161.7（C-5， s）， 76.0（C-6， d）， 35.9（C-7， t）， 38.9（C-8， d）， 51.9（C-9， s）， 33.8（C-10， d）， 39.0（C-11， t）， 72.0（C-12， d）， 125.1（C-13， s）， 108.0（C-14， d）， 144.6（C-15， d）， 139.6（C-16， d）， 14.3（C-17， q）， 171.4（C-18， s） 176.9（C-20， s） 169.9（OC=O， s）， 21.1（COO-CH3， q）。以上数据与文献（Savona et al.，1986）报道基本一致，故鉴定化合物1为 2β-hydroxyteucvidin acetate。

化合物2 针状结晶。HR-ESI-MS m/z： 345.1788 [M+H]+， 分子式C19H20O6。1H-NMR（500 MHz， C5D5N）： δ 7.83（1H， s， H-16）， 7.70（1H， s， H-15）， 6.69（1H， s， H-14）， 5.52（1H， t， J=8.0 Hz， H-12）， 2.66（1H， dd， J=8.0， 14.0 Hz， H-11b）， 1.99（1H， dd， J=8.0， 14.0 Hz， H-11a）， 1.39（3H， d， J=7.5 Hz， H-17）; 13C-NMR（125 MHz， C5D5N）： δ 34.7（C-1， t）， 67.8（C-2， d）， 31.8（C-3， t）， 127.5（C-4， s）， 163.9（C-5， s）， 77.6（C-6， d）， 37.0（C-7， t）， 40.7（C-8， d）， 53.6（C-9， s）， 38.0（C-10， d）， 40.6（C-11， t）， 73.6（C-12， d）， 127.2（C-13， s）， 110.3（C-14， d）， 146.1（C-15， d）， 142.1（C-16， d）， 15.5（C-17， q）， 173.6（C-18， s）， 179.2（C-20， s）。以上波谱数据与文献（Savona et al.，1986）报道基本一致，故鉴定化合物2为2β-hydroxyteucvidin。

化合物3 针状结晶。HR-ESI-MS m/z： 361.1571 [M+H]+， 分子式C20H24O6。1H-NMR（500 MHz， CDCl3）： δ 7.46 （1H， br s， H-16）， 7.42 （1H， br s，H-15）， 6.41（1H， br s， H-14）， 3.10（1H， dd， J=15.0， 3.0 Hz， H-7b）， 2.57（1H， dd， J=13.5， 6.5 Hz， H-11b）， 2.34（1H， dd， J=13.5 10.0 Hz， H-11a）， 2.23（1H， dd， J=15.0， 5.5 Hz， H-7a）， 2.16（1H， m， H-4）， 1.02（1H， d， J=6.5 Hz， H-17）; 13C-NMR（CDCl3 125 MHz）： δ 23.1（C-1， t）， 25.5（C-2， t）， 24.9（C-3， t）， 42.3（C-4， d）， 47.4（C-5， d）， 208.8（C-6， s）， 45.4（C-7， t）， 32.9（C-8， d）， 51.5（C-9， s）， 42.6（C-10， d）， 36.5（C-11， t）， 70.7（C-12， d）， 124.0（C-13， s）， 108.2（C-14， d）， 144.3（C-15， d）， 140.0（C-16， d）， 17.0（C-17， q）， 173.7（C-18， s）， 177.0（C-20， s）， 51.4（COO-CH3， q）。以上波譜数据与文献（Pan et al.，2015）报道基本一致，故鉴定化合物3为crotoeurin B。

化合物4 黄色粉末。HR-ESI-MS m/z： 593.1383 [M-H]-， 分子式C30H26O13。1H-NMR（500 MHz， DMSO-d6）： δ 7.54（2H， d， J=8.0 Hz， H-2， 6）， 6.69（2H， d， J=8.0 Hz， H-3， 5）， 6.67（1H， d， J = 13.0 Hz， H-7）， 5.46（1H， d， J=13.0 Hz， H-8）; 13C-NMR（125 MHz， DMSO-d6）： δ 156.5（C-2， s）， 133.0（C-3， s）， 177.3（C-4， s）， 161.2（C-5， s）， 98.8（C-6， d）， 165.1（C-7， s）， 93.7（C-8， d）， 156.4（C-9， s）， 103.8（C-10， s）， 120.8（C-1′， s）， 130.8（C-2′， 6′， d）， 115.0（C-3′， 5′， d）， 159.9（C-4′， s）， 101.1（C-1″， d）， 74.0（C-2″， d）， 76.2（C-3″， d）， 70.0（C-4″， d）， 74.1（C-5″， d）， 62.7（C-6″， t）， 125.3（C-1， s）， 132.6（C-2， 6， d）， 114.8（C-3， 5， d）， 158.8（C-4， s）， 143.6（C-7， d）， 114.6（C-8， d）， 165.8（C-9， s）。以上波谱数据与文献报道（陈秋等，2012）基本一致，故鉴定化合物4 山奈酚-3-O-（6″-O-顺式对香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷[kaempferol-3-O-（6″-O-cis-p-coumaroyl）-β-D-glucopyranoside]。

化合物5 黄色无定形粉末。HR-ESI-MS m/z： 595.1391 [M+H]+， 分子式C30H26O13。1H-NMR（500 MHz， DMSO-d6）： δ 7.99（2H， d， J=8.0 Hz， H-2′， 6′）， 7.37（2H， d， J=8.5 Hz， H-2， 6）， 6.85（2H， d， J=8.0 Hz， H-3′， 5′）， 6.79（2H， d， J=8.5 Hz， H-3， 5）， 6.38（1H， s， H-8）， 6.15（1H， s， H-6）， 6.11（1H， d， J=16.0 Hz， H-8）， 5.45（1H， d， J=7.5 Hz， H-1″）; 13C-NMR（125 MHz， DMSO-d6）： δ 156.8（C-2， s）， 133.5（C-3， s）， 177.8（C-4， s）， 161.6（C-5， s）， 99.4（C-6， d）， 165.2（C-7， s）， 94.2（C-8， d）， 156.8（C-9， s）， 104.2（C-10， s）， 121.2（C-1′， s）， 131 3（C-2′， 6′， d）， 115.6（C-3′， 5′， d）， 160.5（C-4′， s）， 101.6（C-1″， d）， 74.6（C-2″， d）， 76.7（C-3″， d）， 70.5（C-4″， d）， 74.7（C-5″， d）， 63.4（C-6″， t）， 125.4（C-1， s）， 130.6（C-2， 6， d）， 116.2（C-3， 5， d）， 160.3（C-4， s）， 145.1（C-7， d）， 114.1（C-8， d）， 166.6（C-9， s）。以上数据与文献（陈秋等，2012）报道的数据基本一致，故鉴定化合物5为山奈酚-3-O-（6″-O-反式对香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷[kaempferol-3-O-（6″-O-trans-p-coumaroyl）-β-D-glucopyranoside]。

化合物6 黄色颗粒状粉末。HR-ESI-MS m/z： 595.1792 [M+H]+， 分子式C30H26O13。1H-NMR（500 MHz， DMSO-d6）： 12.59（1H， br s， OH-5）， 10.18（1H， br s， OH-4′）， 8.04（2H， d， J=8.5 Hz， H-2′， 6′）， 7.37（1H， d， J=16.5 Hz， H-7）， 7.33（2H， d， J=8.0 Hz， H-2， 6）， 6.85（2H， d， J=8.5 Hz， H-3′， 5′）， 6.77（2H， d， J=8.0 Hz， H-3， 5）， 6.39（1H， s， H-8）， δ 6.14（1H， s， H-6）， 6.10（1H， d， J=16.5 Hz， H-8）， 5.45（1H， d， J =7.0 Hz， H-1″）; 13C-NMR（125 MHz， DMSO-d6）： δ 156.3（C-2， s）， 133.2（C-3， s）， 177.0（C-4， s）， 161.1（C-5， s）， 98.8（C-6， d）， 164.4（C-7， s）， 93.7（C-8， d）， 156.3（C-9， s）， 103.7（C-10， s）， 120.8（C-1′， s）， 130.9（C-2′， 6′， d）， 115.7（C-3′， 5′， d）， 160.0（C-4′， s）， 101.6（C-1″， d）， 73.0（C-2″， d）， 71.0（C-3″， d）， 68.2（C-4″， d）， 72.8（C-5″， d）， 63.2（C-6″， t）， 124.9（C-1， s）， 130.1（C-2， 6， d）， 115.0（C-3， 5， d）， 159.8（C-4， s）， 144.6（C-7， d）， 113.6（C-8， d）， 166.1（C-9， s）。以上波谱数据与文献报道（王嗣等，2004）基本一致，故鉴定化合物6为栗苷A（castanoside A）。

化合物7 白色粉末。HR-ESI-MS m/z： 431.3462 [M+H]+， 分子式C28H46O3。1H-NMR（500 MHz， C5D5N）： δ 5.24（1H， dd， J=7.5， 15.5 Hz， H-23）， 5.17（1H， dd， J=8.0， 15.5 Hz， H-22）， 4.84（1H， m， H-3）， 4.33（1H， br s， H-6）， 1.54（3H， s， H-19）， 1.07（3H， d， J=6.5 Hz， H-21）， 0.96（3H， d， J=7.0 Hz， H-28）， 0.88（3H， d， J=8.5 Hz， H-27）， 0.86（3H， d， J=6.0 Hz， H-26）， 0.68（3H， s， H-18）; 13C-NMR（125 MHz， C5D5N）： δ 32.6（C-1， t）， 33.8（C-2， t）， 67.5（C-3， d）， 41.9（C-4， t）， 76.1（C-5， s）， 74.2（C-6， d）， 120.4（C-7， d）， 141.5（C-8， s）， 43.7（C-9， d）， 38.0（C-10， s）， 22.3（C-11， t）， 39.8（C-12， t）， 43.7（C-13， s）， 55.2（C-14， d）， 23.4（C-15， t）， 28.4（C-16， t）， 56.1（C-17， d）， 12.4（C-18， q）， 18.7（C-19， q）， 40.8（C-20， d）， 20.1（C-21， q）， 136.1（C-22， d）， 132.1（C-23， d）， 43.0（C-24， d）， 33.3（C-25， d）， 21.3（C-26， q）， 19.8（C-27， q）， 17.8（C-28， q）。以上數据与文献（Gao et al.，2001）报道基本一致， 故鉴定化合物7为cerevisterol。

化合物8 白色无定形粉末。HR-ESI-MS m/z： 111.0277 [M-H]-， 分子式C4H4N2O2。1H-NMR（500 MHz， DMSO-d6）： δ 7.39（1H， d， J=7.5 Hz， H-6）， 5.46（1H， d， J=7.5 Hz， H-5）; 13C-NMR（125 MHz， DMSO-d6）： δ 151.5（C-2， s）， 164.3（C-4， s）， 100.2（C-5， d）， 142.1（C-6， d）。以上波谱数据与文献报道（高锦明等，2001）基本一致，故鉴定化合物8为尿嘧啶（uracil）。

4 讨论与结论

据文献记载，毛果巴豆叶作为复方制剂中的材料之一，与鸡骨香、田基黄等中药材制成的中药散剂（湛江蛇药，又名何晓生蛇药）具有消肿、止痛及解蛇毒的功效（蛇志编辑部，1990）。但迄今为止没有针对毛果巴豆枝叶化学物质基础的研究报道。本研究共从毛果巴豆枝叶分离鉴定8个化合物，结构涉及克罗烷型二萜、黄酮、甾醇等类型。现代药理学研究表明，克罗烷型二萜普遍具有良好的抗炎、抗菌、抗肿瘤等生物活性（陈昊等，2017）。黄酮类化合物山奈酚-3-O-（6″-O-顺式对香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）及山奈酚-3-O-（6″-O-反式对香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（5）的细胞毒性较低，且具有不同程度的抗氧化活性，前者还具有明显的抗炎活性（任珊珊等，2016）;甘栗A（6）具有一定的细胞毒性（其IC50为77.91μmol·L-1）（张玉雪，2010）。甾醇化合物cerevisterol（7）能够抑制血清饥饿介导的MC3T3-E1细胞凋亡（Hata et al.，2002）。因此，通过对毛果巴豆枝叶的化学成分研究，不仅丰富该植物的物质基础，而且为今后开发利用提供科学依据。

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（责任编辑 李 莉）