生物制品常用辅料及限量检测的研究进展

马祎涵 李锦茂

摘要：生物制品是疾病诊断、治疗、预防等环节中的常见药物种类，这种药物区别于中药、化药。我国在管理内容中，强调对生物制品的控制要从原材料、原辅料、包装材料到成品的全程质量控制监督管理。随着药品生产研发人员的研究越来越深入，生物制品生产过程时中涉及的原辅料种类越来越多，这些辅料直接影响到药品质量、药品有效性、毒副作用等。在这种情况下辅料的选择必须慎重考虑，在符合国家药品标准的相关规定情况下，还需要充分考虑药效发挥的影响因素。

关键词：生物制品;辅料;限量;检测;研究

生物制品的辅料应用是目前生物药剂研究中的重要部分，在基因工程、细胞工程、蛋白质与发酵工程等生物技术获中起到比较关键的作用，其中各种动物和人源药品组织、细胞等生物材料，作为制备材料，常用来预防疾病、治疗和诊断疾病等。在生物制剂的生产过程中应用了多种原材料、辅料。辅料就是在生产环节的辅助材料，辅助材料选择是否合理直接关系到药物含有的药效、毒副作用等。International Pharmaceutical Excipients Committe——IPEC中对其有明确规定。

1.对生物制品辅料运用的认识

International Pharmaceutical Excipients Committe为国际药用辅料协会，对辅料功能的定位是给药系统中，生产过程中起到辅助作用，对药物制剂起到的保护、支持、加强作用，对生物利用度和患者的依从性很强，能够帮助药物鉴别，保证药物安全等。在药物的使用过程中具备很强的特性。国家和政府对辅料选用作出了严格规定，强调符合国家标准的同时确保对药物的稳定性方面的影响，保证与药物工艺加工后安全、可控，不会增加药品风险。国家法律对这个方面作出了详细地解释。生物制品内的常用辅料包括防腐剂、佐剂、保护剂、助溶剂等[1]。

2.生物制品常用辅料及限量检测的研究进展

2.1 防腐剂的研究

生物制品在生产与运输、存放过程中都存在污染的现象，产品的无菌检查一般是抽检进行，因此无法全面保证无外源微生物对其造成污染，进而有可能存在影响药品质量因素。在生物制剂生产过程中依据产品特性、工艺特性来考虑抑制 抑制微生物的生长与繁殖辅料。«中国药典»三部凡例中对防腐剂的使用作出了明确规定，针对注射剂、单剂量、成品当中防腐剂的含量都有明确的规定。

（1）硫柳汞，该物质也叫作C9H9HgNaO2S，该物质含汞量为50%，是一种有机化合物，进入机体之后代谢分解成为乙基汞和硫代水杨酸盐。该物质的使用源于上个世纪的三十年代，是广谱抗菌剂，对革兰阳性菌或阴性菌、真菌都有很强的抑制作用，也是我国目前使用最广泛的防腐剂之一，而且广泛运用在百日咳、白喉、乙肝疫苗等中。但是有机汞的神经毒性应引起重视，该物质的运用可能会引起自闭症谱系障碍，人体吸收之后不容易排出到体外，而甲基汞和乙基汞都是有机汞。作为防腐剂该物质在生物制品中使用的安全性理应受到重视。在国际上针对该物质是否能作为防腐剂使用一直存在争议，人们针对该问题进行了详细研究，结果存在一定差异，WHO与美国FDA支持降低或者是取消该物质在婴儿疫苗当中使用。我国规定生物制品中使用的最大量为0.01%，超过即违法。因此现阶段人们应不断抑菌性更好、毒性更低的代替品，同时也应积极探索该物质的毒副作用，严格监控和管理[2]。硫柳汞 的检测方式有滴定法和原子吸收分光光度法、色谱柱法、高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法。这几种检测方式当中只有高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法是最新的技术，检测结果精准方便可行。

（2）甲醛，该物质是重要的化工原料，广泛运用在木材、工业、纺织产业内。食品和 化妆品当中也是常见的防腐剂。生物制品中启用甲醛溶剂是灭活剂作用，能够破坏微生物的生物学活性、繁殖能力、致病能力等，而且不影响药剂本身的免疫性，因此该物质也被广泛运用，作为常用的防腐剂，在狂犬疫苗、破伤风疫苗中都有使用。但是甲醛是细胞原生质毒物，被WHO确认为是致癌、致畸物质，是公认的变态反应源，可以与蛋白质结合。在实际中高浓度吸入会出现严重的呼吸道疾病，出现眼刺激、头痛、诱发性哮喘等。实际上甲醛严重威胁了人们的生产生活，必须严格控制。现有检测方式有分光光度法、电化学法、色谱法、荧光法、化学发光法等[3]。

2.2 佐剂

佐剂也叫作免疫佐剂immunological adjuvant，这种称呼在免疫学和生物制品上比较广泛，佐剂的特征是可以增强抗原特异性。佐剂可以明显增加多糖、多肽等抗原性微弱物质，诱导机体产生特异性免疫应答，如果自身无免疫原性不能引起免疫应答反应，使用最少量的抗原和最少的接种刺激机体就可以产生足够的抗体，可以在血液和黏膜位置维持较长时间，发挥良好效果。佐剂具备特征是：无毒、无致癌性、纯度高、有吸附能力，能够被机体吸收、降解。佐剂还不含有与动物发生交叉反应的抗原。具备优良的稳定性质，存储一年上不会发生分解、变质。佐剂主要有几种：矿物质佐剂、有机、微生物佐剂、可降解颗粒性佐剂、含脂类、免疫类等。这里简单进行列举：

（1）铝盐佐剂，该物质是目前运用在临床的免疫佐剂，而氢氧化铝是最常用佐剂，免疫增强作用非常明显，通过铝盐佐剂和抗原的吸附作用实现免疫增强，因此铝盐含量是免疫增强的重要指标。但是铝会损害人的脑细胞，人使用之后会在人体内慢慢沉积，毒性缓慢但是不易察觉，一旦发生毒性反应后就会造成非常严重人体伤害，因此需要严格控制人体各种途径的铝摄入量。在«中国药典»三部中要求使用滴定法来检测含量，能够得到控制用量的效果。在相關报道中，微波消解-石墨炉原子吸收法检测也可以取得理想效果，该方式快捷，检测精密度、灵敏度都可以达到要求。

2.3 保护剂

冷冻干燥是目前保持微生物和动物组织、细胞活性方面最普遍的使用的药品生产方式，该方式是在真空条件下升华冰晶达到低温脱水。但是在冻干过程中会造成细胞微生物的部分损伤、死亡等，因此需要添加冻干保护剂来防止被破坏。保护剂可以防止I类生物活性物质在冷冻真空干燥的时候遭到破坏，改变生物样品在冻干环境下的物理化学环境，降低细胞损伤，保持生物的原本活性。根据保护剂作用机制可以将其划分为渗透型、非渗透型，渗透型可以结合溶液中的水分子减弱水的结晶过程。非渗透型不能进入细胞，可以在一定条件下降低溶质浓度来保护目标，如多羟基化合物、糖、氨基酸、聚合物、蛋白质等[4]。如甘油，甘油可以保护菌种，但是甘油浓度超过0.8%，就会导致过氧化氢酶完全复性，对红细胞有溶血作用，因此产品的质量控制中需要严格控制甘油含量。可使用甘油激酶-甘油磷酸酶氧化酶-过氧化物酶偶联法来对其检测。

结束语：

综上，生物制品辅料种类非常多，文章篇幅有限，仅仅针对部分进行简单分析。在我国生物制剂发展的过程中，国家法规标准对制剂中使用辅料有严格用法用量控制要求，在使用中必须符合国家标准。目前我国标准记录的辅料品种有限，检测方式也存在一定误差。在这种情况下专业人员还应不断研究、创新，对其进行分析，创新研究方式，为生物制品的研制、研发提供参考意见。

参考文献：

[1]王喆. 生物制品无菌检查试验方法及其应用发展[J]. 华东科技（综合），2020，000（003）：1-1.

[2]胡雪，张志伟，梁建英，等. 食品接触材料中几种有害物质限量标准和检测方法的研究进展[J]. 食品安全质量检测学报，2020（13）：4158-4164.

[3]张海霞. 水产品中常见酚类化合物及其检测方法研究进展[J]. 食品安全导刊，2020，283（24）：104-104.

[4]郭笑语，潘东，陈晓旭，等. 狂犬病病毒糖蛋白抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证[J]. 中国生物制品学杂志，2020，33（04）：79-82+89.