2011—2020年蒙自市狂犬病流行病学调查分析

王艳芬，张雅伦，舒相华，张莹，张雅靖，王余磊，吕涛，张智慧，潘琼，黄鑫，董燕，宋春莲*

(1.蒙自市动物疫病预防控制中心，云南 蒙自 661199； 2.云南农业大学动物医学院，云南 昆明 650201； 3.昆明市猪病防治重点实验室，云南 昆明 650201；4.昆明市动物疫病防控技术科技创新中心，云南 昆明 650201)

狂犬病(Rabies)俗称“疯狗病”“恐水症”，是由狂犬病病毒引起的一种以侵害中枢神经系统为特征的高度致死性的人兽共患传染病，我国将其归于二类动物疫病，是迄今为止唯一病死率达 100%的急性传染病。狂犬病毒外形呈弹状，内含有单链RNA，病毒颗粒长130～240nm，直径65～80 nm[1]。狂犬病病毒易被日光、紫外线、甲醛、新洁尔灭、50%～70%酒精等灭活。人主要是通过直接接触感染，大多是被携带狂犬病毒的动物抓伤、咬伤或舔舐伤口处，或者狂犬病患病动物唾液和组织液直接接触伤口发生感染。也能够通过吸入气溶胶而感染[2]。临床表现以恐水、畏光、吞咽困难、流涎、狂躁等为主要特征。当前，仍然没有有效药物和疗法治疗狂犬病[3]，暴露前或暴露后接种狂犬疫苗是唯一有效的预防手段[4]，在被患狂犬病动物或疑似患狂犬病动物咬伤、舔舐后，应立即用流水、肥皂水冲洗伤口，并及时注射狂犬病疫苗，降低狂犬病的发病率。狂犬病的发病过程可分为3个阶段：一是局部组织内繁殖期；二是侵入中枢神经期；三是向各器官扩散期。狂犬病发生不分季节，一年四季都可能发生，在我国，狂犬病发生集中在夏秋两季[2]，居全球第二，仅次于印度。有资料表明，狂犬病病毒主要由蝙蝠传播[5]，而犬是人和动物间传播狂犬病病毒的主要连接对象。我国狂犬病的流行，自20世纪50年代以来出现过3次高峰[6]，由此可见，我国狂犬病疫情依然比较严重，而且狂犬病疫区在我国呈不断扩大的趋势，全国已有28个省市报告过狂犬病。为了防止狂犬病的发生和传播，对易感动物进行狂犬病疫苗免疫预防是一项至关重要的工作。

目前，关于狂犬病抗体检测技术主要有酶联免疫吸附试验、间接免疫荧光法、快速荧光灶抑制试验、胶体金免疫层析技术等。狂犬病抗原检测技术主要有荧光抗体试验、乳胶凝集试验、免疫组织化学、原位杂交法、反转录聚合酶链式反应、基因芯片技术等。抗体检测中酶联免疫吸附试验具有快速、敏感、简便的优点，抗原检测中荧光RT-PCR方法具有较高的特异性和灵敏度。本次检测采用ELISA和荧光RT-PCR方法完成检测，通过此次检测，能够为蒙自市7个街道(乡、镇)狂犬病的防控工作提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料来源

材料来源于2011—2020年蒙自市7个街道(乡、镇)(文澜街道、草坝镇、雨过铺街道、新安镇、冷泉镇、西北勒乡、期路白乡)，经“春季或秋季集中免疫加日常补免”程序免疫狂犬病疫苗的犬只,犬血清和唾液棉拭子分别为282份和124份。

1.2 采样方法及保存

参照《动物狂犬病病毒中和抗体检测技术》(GB/T 34739—2017)，无菌采集犬血液不少于2mL,室温或37℃静置60min，4℃放置1h后, 6000r /min离心5min,收集上清,-20℃以下保存待检。无菌采集犬唾液棉拭子放置于有PBS的2mL离心管中，4℃放置2h后，挤压棉球，并离心取上清液，-20℃以下保存待检。

1.3 主要设备

全波长酶标仪(Multiskan SKY)，荧光定量PCR仪(BIO RAD美国伯乐)，高速冷冻离心机(Thermo Fisher)。

1.4 主要试剂

狂犬病 ELISA 检测试剂盒(上海艾研生物科技有限公司)、狂犬病荧光RT-PCR试剂盒(北京海森通生物科技有限责任公司)。

1.5 检测方法

ELISA检测方法，将分离后的血清，参照ELISA 试剂盒说明书进行操作。荧光RT-PCR检测方法，所有采集的拭子参照荧光RT-PCR检测试剂盒说明书进行操作。

1.6 结果判定

ELISA检测结果PI(阻断率)>35%判断为阳性。荧光RT-PCR检测结果Ct值≤30.0，且出现特定的扩增曲线，判定为阳性。

2 结果

2.1 抗体检测结果

282份犬血清进行免疫抗体检测，结果见表1。总阳性率为74.1%。其中2011年、2013年、2015年分别为61.8%、56.0%、67.9%，低于70%为免疫不合格；2019年、2020年抗体阳性率较高，均超过90%，免疫效果良好。

表1 2011—2020年蒙自市7个街道(乡、镇)犬只狂犬病免疫抗体检测结果

2.2 2011-2020年免疫抗体水平变化结果分析

如图1可见，免疫抗体水平10年呈上升趋势。其中2013年最低，2019年最高。

图1 2011—2020年狂犬病免疫抗体水平趋势图

2.3 抗原检测结果

由表2可见，124份犬唾液棉拭子检测结果，2017年和2020年阳性率均为23.1%，表明该地区有犬感染狂犬病病毒，并出现发病犬伤人的情况。

表2 2011—2020年犬狂犬病抗原检测结果

2.4 地理分布

根据对抗原阳性样品的来源追踪，发现抗原阳性样品来自西北勒和期路白2个乡，且阳性样品数均为3份，其他街道(乡、镇)均未检出抗原阳性样品。

2.5 年龄分布

西北勒和期路白2个乡出现狂犬病发病犬咬人情况，对被咬伤的12人进行年龄调查，结果显示2～8岁有3人，24～45岁有4人，50～86岁有5人，成年人的占比高于未成年人，这可能与被咬伤者的活动能力和活动轨迹有一定关系。

3 讨论

3.1 蒙自市7个街道(乡、镇)发病犬流行病学调查结果

在对发病犬和被病犬咬伤病例的调查中发现，时间在5—9月，此时正处于夏秋季节，天气炎热，犬易烦躁发狂，这一结果与其他地区报道的病例多发生在气候温暖的季节，具有明显的季节性特征[7，8]相符合，发病犬出现在蒙自市相对较偏远山区乡，且发病犬未经免疫。有报道，我国农村犬狂犬病免疫率为48.7%，城市中犬的整体免疫率约为59.3%[6]，农村地区的免疫率低于城市。狂犬病目前尚无特效治疗方法，只能依靠疫苗免疫预防，该地犬发病可能与未经疫苗免疫有直接联系，增加了狂犬病发病概率。本次抗原检测2017年有3例犬狂犬病发病病例出现且咬伤8人，有资料显示，我国因患狂犬病致死案例就有90例，仅次于印度居世界第二[9]。狂犬病病毒的传播途径多种多样，可通过舔咬直接接触传播，也可污染周围环境，造成间接传播[10]，同群犬中可能通过相互舔咬或污染环境而造成交叉感染。

3.2 狂犬病疫苗免疫中存在的问题

2011—2020年抗体阳性率基本呈现逐年升高趋势，2013 年最低，2019年最高，其次是2020年，出现这种情况可能与使用疫苗的种类有关，2019年、2020年均使用狂犬病弱毒疫苗，其他年份均使用狂犬病灭活疫苗，陈玉华[11]在试验中得出结论，PRRS弱毒疫苗的免疫效果明显优于灭活苗。卢毅[12]指出高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗的抗体水平和抗体上升速度较快,免疫作用较强,在使用时可以优先考虑弱毒疫苗。弱毒疫苗具有免疫原性好、免疫期长等特性，结合蒙自市7个街道(乡、镇)的疫苗免疫合格率，在狂犬病的免疫预防时，应该优先采用弱毒疫苗进行免疫。

3.3 狂犬病的危害及防控

此次抗体检测分析，每年采集到的样本量较少，可能会造成抗体检测结果有误差，但是也能说明蒙自市狂犬病免疫抗体阳性率逐年增加；抗原检测结果暴露出狂犬病在该地区存在，且狂犬病的危害较为严重，不仅是对易感动物，人也容易被病毒携带动物咬伤、抓伤，导致狂犬病的发生。狂犬病的防控应按照不同地区制定不同的狂犬病免疫程序，每年有计划地开展狂犬病免疫抗体和病原学监测，及时掌握免疫效果和疫情动态。同时，定期开展狂犬病流行病学调查，掌握犬只养殖情况和免疫情况，分析狂犬病防控过程中存在的问题及疫情风险因素，提出科学防控方案。加强狂犬病对社会公共安全危害的宣传力度，提高人们对狂犬病的认知度，增强人们对犬只咬伤、抓伤的处理意识，完善规范养犬管理制度，要求对所有犬只进行拴养，降低发病风险。增强人们的防护意识，注重环境消毒工作，对疑似发病犬或死亡犬进行上报，集中到固定地点进行严格消毒并无害化处理，不随意丢弃，不私自处理，以免造成疫病传播。