萸芪糖浆改善厌食大鼠营养吸收的实验研究
2021-09-05喻雄华喻轶
喻雄华 喻轶
萸芪糖浆是本院注册制剂,该制剂由黄芪等12味中药组成,常用于对脾胃气虚、营养不良的患者进行调理。本实验主要从萸芪糖浆对厌食大鼠进食量、β-Ep含量、损伤胃黏膜的修复作用等三个方面来研究萸芪糖浆在改善厌食大鼠营养摄入方面的功效。
1 试剂及实验材料
1.1实验条件 本实验在湖北中医药大学动物实验中心开展。实验室条件如下:相对湿度为60%~70%,室温为22℃,在实验过程中所有大鼠均为自由饮食。动物饲料:由湖北省动物实验中心提供。
1.2实验动物 健康大鼠30只,体重(50±10)g;由湖北中医药大学实验动物中心提供,证号:NO:42010200001694。
1.3实验用药 萸芪糖浆:由黄芪、山茱萸等12味中药组成,仙桃市中医医院制剂室制备。
1.4主要试剂 ①抑肽酶:湖北生物化学制药有限公司产品;②4%多聚甲醛:湖北锦康生物科技有限公司,用前由仙桃市中医医院检验科配制成4%的浓度;③β-Ep放射免疫试剂盒:由锦康生物技术有限公司提供。
1.5主要仪器 低温冰箱(Sigma 2kl5,美国)、低速冷冻离心机(Sigma 2kl5,美国)、电子分析天平(SartoriusBP-61型l/100000g,德国)、生化分析仪(西门子公司,日本)。
2 萸芪糖浆对大鼠摄食总量的影响
2.1动物分组 将30只大鼠随机分为正常组、模型组及治疗组,每组10只。其中正常组为健康大鼠,模型组为脾虚症造模大鼠(造模具体方法参考2.2),该组大鼠在造模成功后正常饲养无药物干预。治疗组为脾虚症大鼠治疗组,即在大鼠造模成功后在饲养过程中进行药物干预。
2.2模型及饲料制作
2.2.1造模方法 采用病因模拟法造模。造模成功判定标准:与正常组对比模型组大鼠每日的进食量<正常组30%,体重<正常组10%,且没有其他脾虚的症状,则可以判定造模成功,反之则造模失败。
2.2.2饲料制备 特制饲料的制备:选用牛奶、鱼粉、大豆粉、玉米粉、糖、鸡蛋,猪肉,按1∶1∶2∶1∶1∶1.8∶2比例配制。混匀后制成小块状,每块约15 g,干燥后冷藏。模型组和治疗组使用特制饲料喂养,正常组给予日常使用的饲料喂养。自由饮食5周。
2.3给药方法
2.3.1实验用药的配制 萸芪糖浆:由仙桃市中医医院制剂室提供。
2.3.2给药剂量及方法[1]萸芪糖浆治疗组:给药剂量以成人体重的标准,以公式进行换算。其中D为药物量,W已换算的大鼠用量,K是常数,用人与大鼠等效量作为大鼠的用药量,大约1.5 ml/100 g,用来灌胃,每天8:30灌胃一次;正常组及模型组大鼠则在相同时间注入等量的生理盐水。各组大鼠喂养7 d后,开始灌胃,第35天晚20:00开始禁食,第36天8:00处死,然后制备标本。
2.4观察指标 按规定分别记录正常组、模型组以及治疗组大鼠每日的摄食量。
2.5统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差()表示,采用t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2.6三组大鼠摄食量变化情况比较 第7天,三组大鼠摄食量比较差异无统计学意义(P>0.05);第14、21、28、35天,模型组大鼠摄食量均低于正常组,差异具有统计学意义 (P<0.05);第14、21天,治疗组大鼠摄食量低于正常组,差异具有统计学意义 (P<0.05);第28、35天,治疗组摄食量高于模型组,差异具有统计学意义 (P<0.05);第28、35天,治疗组与正常组摄食量比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
表1 三组大鼠摄食量变化情况比较(,g)
表1 三组大鼠摄食量变化情况比较(,g)
注:与正常组比较,aP<0.05;与模型组比较,bP<0.05
3 萸芪糖浆对大鼠β-Ep的调节作用
3.1动物分组 同2.1相同。
3.2模型制作 同2.2相同。
3.3给药方法
3.3.1实验用药的配制 同2.3.1相同。
3.3.2给药剂量及方法 同2.3.2相同。
3.4观察指标 ①比较三组胃窦黏膜、下丘脑、血浆β-Ep含量。②观察实验大鼠胃窦黏膜组织病理的变化。
3.5统计学方法 同2.5相同。
3.6实验方法及结果
3.6.1实验方法 ①取出大鼠的眼球,取静脉血,置于含有抑肽酶和10% EDTA -Na2的管中,充分摇匀,放入低温离心机中离心l0 min,分离血浆,置于-70℃环境中保存[2,3]。②取出脑和胃。将胃壁组织和脑组织取出后加入生理盐水,随后将下丘脑分离并取出胃窦黏膜将其称重后置于匀浆管中,随后在匀浆管中加入1 ml的冰醋酸在室温下静置1 h,最后4℃离心15 min取上清-80℃保存[4,5]。
3.6.2结果 模型组与正常组下丘脑β-Ep含量比较,差异无统计学意义(P>0.05);模型组胃窦黏膜、血浆β-Ep含量低于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05) ;治疗组下丘脑β-Ep含量高于正常组及模型组,胃窦黏膜、血浆β-Ep含量高于高于模型组,差异具有统计学意义 (P<0.05) ;治疗组与正常组胃窦黏膜、血浆β-Ep含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。
表2 三组大鼠胃窦黏膜、下丘脑、血浆β-Ep的含量比较()
表2 三组大鼠胃窦黏膜、下丘脑、血浆β-Ep的含量比较()
注:与正常组比较,aP<0.05;与模型组比较,bP<0.05
4 萸芪糖浆对实验大鼠胃窦黏膜病理变化的影响
将胃壁组织取出后制作病例切片,制作病例切片过程如下:首先将取出的胃壁组织进行石蜡包埋,随后将用切片机包埋好的样本进行切片处理,最后将切片进行苏木精-伊红(HE)染色,染色观察切片,结果见图a,图b,图c,图d,图e,图f。
图a 正常组胃窦黏膜层组织(HE染色)
图b 正常组胃窦黏膜下层组织(HE染色)
图c 模型组胃窦黏膜层组织(HE染色)
图d 模型组胃窦黏膜下层组织(HE染色)
图e 治疗组胃窦黏膜层组织(HE染色)
图f 治疗组胃窦黏膜下层组织(HE染色)
5 讨论
5.1萸芪糖浆可增加实验大鼠摄食量 研究表明,治疗组大鼠与正常组大鼠相比膳食改善不显著,而与模型组相比有了显著改善,说明萸芪糖浆可改善大鼠食欲。
5.2萸芪糖浆有调节厌食大鼠血浆、下丘脑和胃窦黏膜β-Ep含量的作用 实验结果表明,模型组与正常组下丘脑β-Ep含量比较,差异无统计学意义(P>0.05);模型组胃窦黏膜、血浆β-Ep含量低于正常组,差异具有统计学意义 (P<0.05) ;治疗组下丘脑β-Ep含量高于正常组及模型组,胃窦黏膜、血浆β-Ep含量高于高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05) ;治疗组与正常组胃窦黏膜、血浆β-Ep含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。使用萸芪糖浆治疗后,浓度都有显著增加,说明萸芪糖浆能促进β-Ep的合成与分泌从而起到增进食欲的作用。
5.3萸芪糖浆有修复炎症的作用 从胃窦组织的HE染色病例切片结果中可以发现,在未经过治疗的模型大鼠中,大鼠的胃窦黏膜上皮细胞出现脱落,并且呈现了与人类胃窦炎类似的病理改变。而在经过萸芪糖浆治疗后的治疗组大鼠胃窦黏膜病例切片中发现其原本的病例状态基本恢复正常,由此可以说明萸芪糖浆具有修复炎症的功效。
综上所述,萸芪糖浆对可增强厌食大鼠对营养的摄入,同时对损伤的胃黏膜有修复作用。所以可以推断萸芪糖浆可增强人体营养的吸收,改善厌食症状。