人类SDC2基因甲基化检测试剂盒在结直肠癌筛查中的性能评价

叶敏玲，黎智莹，陈梓桦，卢少芳

广州中医药大学顺德医院 (广东顺德 528300)

结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，具有发病率高、病死率高等特点，严重威胁患者的生命健康[1]。国家癌症中心公布的最新数据显示，我国结直肠癌的相关死亡病例占全部恶性肿瘤死亡病例的8.01%[2]。有研究表明，结直肠癌的早期筛查和治疗可以显著改善预后，降低病死率[3]。人类粪便SDC2基因甲基化检测作为一种非侵入性的新型方法，被应用于早期肠癌筛查中。本研究参照中国合格评定国家认可委员会(China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS)制定的CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》[4]要求，对广州市康立明生物科技有限责任公司的人类SDC2基因甲基化检测试剂盒(荧光PCR法)进行性能评价。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

本次性能验证采用ABI7500实时荧光定量PCR仪(美国ABI公司)。试剂购自广州市康立明生物科技有限责任公司的人类SDC2基因甲基化检测试剂盒(荧光PCR法)。检测试剂盒配套阴、阳性质控品，其中，阴性质控品为Caco2细胞DNA，阳性质控品为Hct116细胞DNA，内控基因为ACTB基因，在每次实验中均需要同时检测。灵敏度参考品L和精密度参考品J主要成分为Caco2细胞DNA和Hct116细胞DNA。

1.2 研究对象

收集2020年10月至2021年3月广州中医药大学顺德医院的门诊或住院患者粪便样本41例，以及由广州市康立明生物科技有限责任公司提供的结直肠癌患者粪便样本5例，共46例。其中结直肠癌患者样本10例，结直肠腺瘤患者样本11例，结直肠炎患者样本7例，正常对照样本(经肠镜检查未发现肠道疾病的患者所留取的粪便)18例。

纳入标准：所有纳入患者均经肠镜和/或病理确诊；未接受肠癌手术或放化疗。排除标准：合并其他肿瘤。

1.3 方法

按照试剂盒说明书操作，以甲基化SDC2基因的Ct值≤38为阳性判定值，以甲基化SDC2基因的Ct值>38为阴性判定值，内控基因ACTB的Ct值≤36为样本合格。

1.4 评价指标

(1)方法符合率。(2)检出限：重复检测SDC2灵敏度参考品L共5次，5次SDC2基因甲基化扩增曲线正常且为阳性，同时内控基因ACTB扩增曲线正常且Ct值合格。(3)精密度：重复检测精密度参考品J，连续检测2天，每天做10个平行测试，共20次检测，分别计算参考品甲基化SDC2基因和内控基因ACTB的Ct值的平均值、标准差SD、变异系数CV值。(4)阳性率、灵敏度、特异度和约登指数：检测所有样本，计算阳性率、灵敏度、特异度和约登指数，阳性率=真阳性例数/肠镜病理阳性例数，灵敏度=真阳性例数/(真阳性例数+假阴性例数)×100%，特异度=真阴性例数/(真阴性例数+假阳性例数)×100%，约登指数=灵敏度+特异度-1。

2 结果

2.1 方法符合率

根据试剂盒阴、阳性判断值，试剂盒检测结直肠癌患者样本的阴性符合率均为88.89%(16/18)，阳性符合率分别为100.00%(10/10)，总符合率分别为92.86%(26/28)，见表1。

表1 粪便SDC2基因甲基化与肠镜和/或病理的符合率(例)

2.2 检出限

检测SDC2灵敏度参考品L共5次(L1-L5)，5次结果均为阳性，检出率100%，见表2。

表2 粪便SDC2基因甲基化的灵敏度参考品L检测结果

2.3 精密度

试剂盒的批内、批间精密度符合要求，符合检测Ct值的变异系数(CV)≤5%，见表3。

表3 批内与批间精密度检测结果

2.4 SDC2基因甲基化诊断结直肠癌的阳性率、灵敏度、特异度和约登指数

经统计分析，SDC2基因甲基化在结直肠癌患者、结直肠腺瘤患者、肠炎患者和正常对照粪便中的阳性率分别为100.00%(10/10)、63.64%(7/11)、42.86%(3/7)和11.11%(2/18)；试剂盒检测结直肠癌的灵敏度为100.00%(10/10)，特异度为66.67%(24/36)，约登指数为0.667，见表4。

表4 粪便SDC2基因甲基化与肠镜和/或病理的检测结果(例)

3 讨论

结直肠癌是威胁我国人民生命健康的主要癌症，有关研究表明，早期筛查与治疗对降低其病死率至关重要[5-6]。结肠镜虽然是筛查结直肠癌的金标准，但需要烦琐而耗时的肠道准备，且作为侵入性检查手段有出血和穿孔的风险，被筛查人群的参与率低[7]。结直肠癌的发生、发展是由基因或表观遗传不稳定性所致，其中表观遗传不稳定性以DNA甲基化或去甲基化为主[8]。有研究表明，粪便中的DNA异常甲基化常发生在结直肠肿瘤的早期，对检测结直肠癌具有较高的准确率[9]。以结直肠癌高危人群的粪便样品中人类SDC2基因为目标基因，检测其甲基化表达水平是一种具有无创、便捷、可居家采样等优点的肠癌筛查新方法[10]。

本研究对人类SDC2基因甲基化检测试剂盒的方法符合率、检出限、精密度等参数进行了分析评价，其中总符合率为92.86%，检出限检出率为100%，批内精密度和批间精密度均符合要求。在结直肠癌患者的粪便中，SDC2基因甲基化的阳性率为100.00%，灵敏度为100.00%，特异度为66.67%，约登指数为0.667，有较高的诊断效率。结直肠癌的主要癌前疾病为结直肠腺瘤(占全部结直肠癌癌前疾病的85%～90%，甚至更高)和溃疡性结肠炎等炎症性肠病[11]，本研究结果显示，结直肠腺瘤和肠炎患者样本的SDC2基因甲基化阳性率分别为63.64%和42.86%，应该引起重视，建议患者进行早期干预或定期做肠镜检查。

综上所述，人类SDC2基因甲基化检测试剂盒对结直肠癌有较高的检测性能和辅助诊断价值，具有采样方便、灵敏度高等优点，可用于筛查结直肠癌和癌前病变，为医师提供辅助诊断依据，为患者提供一种无创性结直肠癌的辅助诊断方法。