ALDH2基因G487A位点多态性与2型糖尿病患者脑梗死风险的关系*

王少津，许丽娃，吉家钗

（海口市人民医院全科医学，海南海口570208）

2 型糖尿病是由胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗引起的血糖升高疾病，若血糖浓度长期无法控制，会引起心、脑、肾的严重并发症[1]。2 型糖尿病有很多慢性并发症，其中脑梗死较常见[2]，严重影响患者身心健康。ALDH2 是一种ALDH 同工酶，位于线粒体内，是催化乙醛等多种醛类物质氧化代谢的关键酶[3]。而乙醇作为一种神经麻醉剂，可引发心率失常，降低脑血流量，与脑梗死的发生有关。有报道称，ALDH2基因多态性是急性脑梗死的危险因素之一[4]，但ALDH2基因多态性与2 型糖尿病患者脑梗死风险的关系研究较少。本研究探讨2 型糖尿病患者脑梗死风险与ALDH2基因多态性的关系，旨在对其发生脑梗死的风险评估提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月—2020年1月海口市人民医院收治的116 例2 型糖尿病患者为研究对象，根据是否发生脑梗死分为脑梗死组71例和非脑梗死组45例。脑梗死组男性42 例，女性29 例；年龄50～79 岁，平均（64.16±6.82）岁。非脑梗死组男性24 例，女性21 例；年龄50～78 岁，平均（63.24±7.36）岁。两组患者性别、年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会审批，患者及家属知情并签订知情同意书。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准①符合2 型糖尿病诊断标准[5]；②符合脑梗死相关诊断标准[6]，并经CT 证实。

1.2.2 排除标准①合并恶性肿瘤；②自身免疫性疾病；③重度肝、肾功能异常；④冠状动脉粥样硬化性心脏病（以下简称冠心病）、心肌梗死等疾病。

1.3 主要试剂与仪器

DNA 快速抽提试剂盒（上海乔羽生物科技有限公司，货号：QY-MY296J），基因组DNA 扩增试剂盒（上海机纯实业有限公司，货号：JC-A78139）。ExF24086V 和分光光度仪（Nanodrop 2000）购自美国赛默飞世尔科技有限公司，CFX96 qRT-PCR 仪（德国Bio-Rad 公司）。

1.4 观察指标

记录所有研究对象的吸烟史、饮酒史等资料，采用全自动生化分析仪检测患者血清甘油三酯（Triglyceride, TG）、总胆固醇（total cholesterol, TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoproteincholesterol, LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein-cholesterol,HDL-C）水平。

1.5 基因组DNA提取及扩增

收集所有患者抗凝血液标本，常温解冻，严格按血液基因组DNA 快速抽提试剂盒说明操作，提取外周血基因组DNA。ALDH2基因多态性位点G487A 引物根据Gen bank 公布序列用Primer 5.0 生物软件设计。采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR-RELP） 对ALDH2基因进行分型。PCR 反应体系：灭菌双蒸水14.2 μl，10×PCR 缓冲液2 μl，dNTP 1.6 μl，Taq 酶0.2 μl，DNA 模板1 μl，正反向引物各0.5 μl。PCR 反应条件：95℃预变性3 min，95℃变性30 s，60℃退火45 s、72℃延伸30 s，共计35 次循环，72℃继续延伸10 min。结束后离心并纯化产物。G487A正向引物序列：5´-GTCAACTGCTATGATGTGTTTGG-3´；反向引物序列：5´-CCACCAGCAGACCCTCAAG-3´，长度200 bp。由苏州吉玛生物技术有限公司提供目的因片段测序，判断ALDH2基因的多态性。

1.6 统计学方法

数据分析采用SPSS 25.0 统计软件。计数资料以构成比或率（%）表示，比较用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用t检验；影响因素的分析用多因素Logistic 回归模型。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

脑梗死组与非脑梗死组性别、年龄、饮酒及吸烟比例、HDL-C 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；两组TC、TG、LDL-C 水平比较，经t检验，差异有统计学意义（P＜0.05），脑梗死组高于非脑梗死组。见表1。

表1 两组患者一般资料比较

2.2 Hardy-Weinberg平衡定律检验

根据Hardy-Weinberg 平衡定律，非脑梗死组与脑梗死组ALDH2基因G487A 位点基因型的期望值和观察值均符合遗传平衡定律（P＞0.05）。见表2。

表2 Hardy-Weinberg遗传平衡检验结果

2.3 ALDH2基因G487A位点多态性分析

两组ALDH2基因G487A 位点GG 型比例比较，经χ2检验，差异有统计学意义（P＜0.05），脑梗死组低于非脑梗死组；两组AG 型、AA 型比例比较，差异有统计学意义（P＜0.05），脑梗死组高于非脑梗死组。两组ALDH2基因G487A 位点A 等位基因频率分布比较，差异有统计学意义（P＜0.05），脑梗死组高于非脑梗死组。见表3。

表3 ALDH2基因G487A位点多态性分析 例（%）

2.4 2 型糖尿病患者发生脑梗死的影响因素分析

以2 型糖尿病患者是否发生脑梗死为因变量，以TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALDH2基因G487A位点野生GG 型、杂合子AG 型、纯合子突变AA型为自变量，进行多因素Logistic 回归分析，结果显示：TG[=2.396（95%CI：1.029，5.531）]、LDL-C[=2.512（95% CI：1.012，3.238）]、ALDH2基因G487A 位点（以野生GG 型为参照）杂合子AG 型[=3.107（95% CI：1.456，6.634）]、纯合子突变AA型[=3.464（95% CI：1.594，7.528）]是2 型糖尿病患者发生脑梗死的独立危险因素（P＜0.05）。见表4。

表4 2型糖尿病患者发生脑梗死的多因素Logistic回归分析参数

续表4

3 讨论

脑梗死发病率近年来不断攀升，其发生与遗传、环境等因素相关[7]。2 型糖尿病患者脑部出现明显的血液循环障碍，脑组织缺血性坏死是发生脑梗死的病变基础[8]。ALDH2与心肌缺血性损伤和脑缺血性损伤有关。已有研究发现，ALDH2基因多态性是2 型糖尿病患者并发冠心病的影响因素[9]。但ALDH2基因多态性是否影响2 型糖尿病发生脑梗死仍未有定论。随着分子生物学技术的快速发展，ALDH2基因及其基因突变与2 型糖尿病发生脑梗死风险越来越受到关注。

ALDH2是乙醛脱氢酶家族的重要成员，位于人类第12 号染色体上（12q24.2），其有13 个外显子，在外显子12 中有一个突变位点，G→A，可使整个分子结构发生变化，导致ALDH2 丧失催化活性。ALDH2 是乙醇的重要代谢酶，主要分布在线粒体中，在乙醛氧化成乙酸的过程中起非常重要的作用，ALDH2等位基因的突变使第504 位谷氨酸变为赖氨酸[10]。机体无法降解乙醇是心、脑血管疾病的主要诱因之一，其在血管疾病的发生中扮演着重要角色，随着全球饮酒人数不断增加，酒精相关性疾病发生率逐年提升[11]。乙醇在人体代谢存在个体差异。有研究发现，ALDH2基因多态性与肝炎、肝硬化、酒精性心肌病及其他酒精相关疾病有关[12-14]。有研究发现，ALDH2基因多态性与心血管疾病相关[15]。吴和弟等[16]研究发现，ALDH2基因型多态性与老年2 型糖尿病患者冠状动脉狭窄及其严重程度均有密切关系。侯经远等[17]调查中国南方客家人群发现ALDH2基因AG/AA 基因型可增加该群体急性心肌梗死发生的风险性。刘春苗等[18]研究发现ALDH2基因检测结果分为3 种，GG 型、AG型和AA 型，H 型高血压脑梗死组患者AA/AG 型及A 等位基因的频率明显高于H 型高血压患者的非脑梗死组患者，说明A 等位基因可能增加H 型高血压脑梗死的危险。Hardy-Weinberg 平衡定律分析显示本研究样本具有群体遗传学代表性。本研究结果显示，2 型糖尿病脑梗死组患者AA/AG 型及A 等位基因的频率高于2 型糖尿病非脑梗死组患者，提示2 型糖尿病患者脑梗死与ALDH2基因多态性有关。钟伟清等[4]研究发现脑梗死患者血清TC、TG、LDL-C 水平显著高于非脑梗死者。本研究结果表明，脑梗死组2 型糖尿病患者TC、TG、LDL-C 水平高于非脑梗死组，提示TC、TG、LDL-C 可能参与2 型糖尿病患者发生脑梗死。多因素Logistic 回归分析结果显示，TG、LDL-C、ALDH2基因G487A位点杂合子AG 型、纯合子AA 型突变是2 型糖尿病患者发生脑梗死的独立危险因素，提示A 等位基因可能是2 型糖尿病患者发生脑梗死的危险因素。

综上所述，ALDH2基因对多态性与2 型糖尿病患者发生脑梗死有关。但本研究是小样本量研究，可能结果存一定的偏倚性，仍需进一步扩大地区和样本进行深入探讨。