含多糖类中药玉竹饮片标准汤剂质量研究

毕霄鹤，吕慧芳，倪凤燕，章军，刘艳，李建恒

(1.河北大学 药学院，河北 保定 071002；2.中国中医科学院 中药研究所，中药鉴定与安全性检测评估重点实验室，北京 100700；3.河北中石油中心医院 药学部，河北 廊坊 065000；4.江西中医药大学 药学院，江西 南昌 330004)

玉竹，又名尾参、地管子、铃铛菜、葳蕤，为百合科多年生草本植物玉竹Polygonatumodoratum(Mill.)Druce的干燥根茎，分布很广.《本草经集注》云：“茎干强直，似竹箭杆，有节”，故有玉竹之名[1-2].玉竹所含化学成分主要有多糖类、甾体皂苷类、高异黄酮类等化合物，其中多糖含量最高，也被视为其药效成分.该药材应用十分广泛，且是药食两用品种，广泛应用于保健品及食疗中.研究表明，玉竹多糖是玉竹的主要有效成分，其具有滋阴补气、生津止咳、延缓衰老、降低血糖、抑制肿瘤、增强免疫力等功效[3-4].

糖类是中药材中普遍存在的成分，如黄芪、枸杞、麦冬、灵芝、人参、桑叶、金樱子等都存在具有生物活性的多糖成分[5].中药多糖具有调节机体免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等生物活性，药效显著且不良反应少[6].但多糖相对分子质量大，结构复杂，稳定性差，且含多糖类药材在储存过程中更易发生霉变、虫蛀等变质现象，使其质量难以控制，药效难以保障，造成“古方虽效，今却无用”的遗憾.欲提高药材质量，除加强药材在道地产区的规范化种植管理外，还可将其单味饮片经提取浓缩制成单味配方颗粒.单味中药配方颗粒是以传统中药饮片为原料，经规范化的提取、分离、浓缩、干燥、制粒等一系列工艺，制成的新型中药饮片剂型，具有方便冲服、剂量精准、性质稳定、易于携带与储存等优点，是国家对中医药行业大力发展与扶持的新型项目[7].如何保障配方颗粒的质量，确定多糖有效成分群剂量以确保准确用药呢？

解决上述问题，需建立中药标准汤剂质量标准来进一步科学规范量化药材质量，保障临床疗效.中药标准汤剂是指按照一定的现代化工艺，采用准确、规范、可靠的试剂和方法制备的现代化中药[8].它具有不同于药材和配方颗粒独特的质量控制优势，与药材相比，标准汤剂能表明制备工艺的影响；与配方颗粒相比，标准汤剂不存在辅料的干扰，更接近传统用药形式.既保留了传统的水煎汤剂形式，又具有用于量化标准的参数，如指标成分的转移率、得膏率等.它可作为一种化学基准，用于指导不同饮片用药形式和临床用药，为中药配方颗粒质量标准提供参比[9].

本文研究的玉竹具有丰富的药理作用，美容养颜且易于获取，其多糖具有多靶向无毒性等优势，对玉竹的研究终将会越来越重视，因此需加强对玉竹的质量评价及质量控制[10].本实验运用科学现代化的技术制备不同产地的12批玉竹饮片标准汤剂，考察多糖组分群的含量、转移率和得膏率范围，并建立其特征指纹图谱，进一步实现质量控制，为玉竹在食品、药品及化妆品领域的发展提供参考标准，为玉竹饮片配方颗粒及其他含有多糖的药材质控提供更多的参考价值.

1 仪器与试药

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器公司，T6新世纪)；BS224S-型1/10万电子分析天平(德国赛多利斯公司)；TGL-16M型台式高速冷冻离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)；XW-80A型漩涡混合仪(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)KQ；PB-10型pH计(Sartorius公司).

无水葡萄糖对照品来自中国食品药品检定研究院，批号为：3D4D-GV52，w(葡萄糖)≥99.5%；甲醇、乙腈为色谱纯(美国Fisher)；水为娃哈哈纯净水；硫酸、苯酚等其他试剂为分析纯.从3个产地收集了共12批玉竹样品，经中国中医科学院中药研究所孙伟副研究员鉴定为百合科植物玉竹Polygonatumodoratum(Mill.)Druce的干燥根茎，其信息见表1.

表1 玉竹样品信息Tab.1 Information of polygonatum odoratum samples

2 方法与结果

2.1 玉竹饮片多糖含量测定

据2015版《中华人民共和国药典》方法进行测定，得到12批玉竹饮片中多糖的含量，以无水葡萄糖(C6H12O6)计，质量分数为 8.1%～14.8%(表2).结果表明，所收集12批玉竹样品均满足2015版药典中玉竹项下规定.

表2 玉竹饮片标准汤剂测定Tab.2 Results of standard decoction of Polygonatum odoratum pieces

2.2 玉竹饮片标准汤剂的制备与测定

2.2.1 标准汤剂的制备

按《中药饮片标准汤剂研究策略》中原则，建立玉竹标准汤剂制备方法.称取玉竹饮片100 g置圆底烧瓶中，煎煮回流2次.一煎先加7倍水浸泡0.5 h，后加热回流1 h，立即过200目(75 μm)筛.二煎加6倍水不浸泡，立即加热回流40 min，趁热过200目(75 μm)筛.合并2次煎煮回流得到的滤液，40 ℃温水浴条件下进行减压浓缩至500 mL，即得.

2.2.2 标准汤剂pH值的测定

取各批次玉竹饮片标准汤剂，测定pH值，平行2次，结果见表2.

2.2.3 出膏率测定

取各批玉竹标准汤剂，摇匀后用移液管精密吸取10 mL，放入恒重蒸发皿中，用水浴蒸干，再在105 ℃烘箱中干燥3 h，干燥完毕立刻取出放入干燥器中冷却0.5 h，然后称重.平行2次，测得出膏率为45.4%～70.1%，计算得到平均出膏率为55.6%，结果如表2.

2.3 玉竹标准汤剂多糖含量测定

2.3.1 对照品溶液的制备

精密称定D-无水葡萄糖30.64 mg，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至接近刻度线，超声，放冷，加水定容，制成每1 mL含0.612 8 mg D-无水葡萄糖的溶液.

2.3.2 40 g/L苯酚的配制

准确称取苯酚4.0 g，用纯净水溶解并定容于100 mL的棕色容量瓶内，避光保存，临用时配制.

2.3.3 供试品溶液的制备

2.3.4 线性关系考察

精密量取D-无水葡萄糖对照品溶液1.5、2.0、3.0、5.0、7.0 mg/mL，分别置于50 mL量瓶中，各加水至50 mL刻度，摇匀.分别精密量取上述溶液2 mL，置具塞试管中，分别加入40 g/L苯酚溶液1 mL，混匀，迅速加入硫酸7 mL，摇匀，置40 ℃水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中放置5 min，取出，以相应试剂为空白，在490 nm波长下测得吸光度，以质量浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得到D-无水葡萄糖的回归方程：Y=10.05X+0.011，R2=0.998.结果表明，D-无水葡萄糖在0.018 4～0.085 8 mg/mL内与其吸光度呈良好线性关系.

2.3.5 精密度实验

取已显色的玉竹标准汤剂供试品溶液，在490 nm下重复测定6次吸光度，计算其RSD为0.1%(n=6)，表明该方法精密度良好.

2.3.6 重复性实验

取同一批的玉竹标准汤剂，平行制备成6份玉竹供试品溶液，按2.3.4项下操作方法，测量吸光度.计算得到玉竹饮片标准汤剂中D-无水葡萄糖的平均质量浓度为4.72 mg/mL，RSD 为2.7%，表明该方法的重复性良好.

2.3.7 稳定性实验

取已显色的玉竹标准汤剂供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、8 h在490 nm下测定吸光度.结果表明，显色后的溶液随着放置时间的延长，吸光度逐步下降，应当在显色后4 h内测定.

人力资源管理工作主要的工作内容，首先企业所有人员的档案管理工作，按照部门将所有的公司员工档案进行合理的储存；其次，是企业员工动态流动的相应人事记录；最后，是对整个企业的工作人员的综合管理及分析应用。在整个人力资源管理工作之中，由于工作内容繁多，企业相应的人力资源管理人员业务水平存在缺陷等情况，都会导致整个企业的人力资源管理体系存在漏洞，从而给整个企业的正常发展带来隐患，对于企业的员工而言，企业的人事工作效率低下，无法迅速为企业的人事运转工作提供高效支撑，从而影响到企业的运行效率。

2.3.8 加样回收实验

取已知多糖质量浓度4.72 mg/mL的玉竹饮片标准汤剂，以多糖含量计按质量比1∶1添加D-无水葡萄糖对照品(1.225 mg)，并平行制备6 份供试品溶液，2.3.4项下操作方法，计算得多糖回收率为 98.3%，RSD 为 2.8%，表明该方法准确度较好.

2.3.9 样品测定

取12批玉竹标准汤剂，按2.3.4项下操作方法，测量吸光度.每个批次平行2 份，结果见表2.

2.4 玉竹饮片标准汤剂转移率

玉竹饮片标准汤剂转移率为

其中，W为玉竹饮片标准汤剂中目标成分的质量(mg)，M为玉竹饮片中目标成分的质量(mg).以D-无水葡萄糖计，计算得多糖的转移率为10.9%～31.7%，平均转移率为21.25%，结果如表2.

2.5 玉竹标准汤剂特征图谱的建立

2.5.1 色谱条件

色谱柱Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相(体积分数)：A-乙腈，B-0.25% 磷酸水溶液，梯度洗脱(0～30 min，5%～23% A;30～40 min，23% ～38% A)；柱温为35 ℃;流速为1 mL/min；检测波长为220 nm，进样量 10 μL.在此条件下，特征图谱能显示较多的信息，见图1.

图1 玉竹饮片标准汤剂特征图谱Fig.1 HPLC specific chromatograms of standard decotion of Polygonatum odoratum pieces

2.5.2 供试品溶液的制备

精密量取玉竹饮片标准汤剂10 mL摇匀，置20 mL量瓶中，加10 mL甲醇，超声处理10 min，用水定容后摇匀，用微孔滤膜过滤，取续滤液即得.

2.5.3 样品测定与分析

取各批玉竹标准汤剂，按2.5.2项下方法制备供试品溶液，再按2.5.1项下色谱条件分别进行测定，得到HPLC 图，如图2.共标定5个共有峰，以2号峰为参照.利用中药指纹图谱相似度评价系统软件(2004A)，时间窗设为0.2，采用中位数法，对各批供试品色谱图进行相似度计算，如表3.结果得到各批玉竹标准汤剂与对照图谱的相似度均大于0.9，表明各批玉竹标准汤剂一致性较好.

图2 12 批玉竹饮片标准汤剂特征图谱Fig.2 HPLC fingerprints of 12 batches Polygonatum odoratum pieces

表3 12批玉竹饮片标准汤剂指纹图谱的相似度Tab.3 Fingerprint similarities of 12 batches of standard decoction of Polygonatum odoratum pieces

3 讨论

本文研究的12批玉竹，尽量遵循多产地、多规格、多批次、多等级的要求，使研究样品的代表性决定标准汤剂的代表性.本文研究的样本其中7批来自于主产区湖南，4批产于河北，1批产于辽宁.湖南是玉竹的道地产区和主产区,栽培面积大，历史悠久，主产于湖南的玉竹又被称做“湘玉竹”，因而本研究选择了较多来自湖南的样品，以期具有更好的代表性.所有样品其质量均符合《中华人民共和国药典》中规定，满足研究的需要.

玉竹饮片中多糖的转移率为10.9%～31.7%，批次间转移率差异较大，造成这种结果的原因可能是玉竹饮片的厚度不同造成的.2015版《中华人民共和国药典》中规定，玉竹的炮制方法为切厚片或段，在制备标准汤剂过程中，薄的玉竹饮片中多糖含量比厚的玉竹饮片提取的更完全，进而导致转移率偏高.经测量与观察，玉竹S2、S9、S10饮片厚度明显较其他批次薄.玉竹饮片的出膏率为45.4%～70.1%，批次间得膏率差异也较大，且得膏率与转移率基本呈正相关，因此推断造成这种结果的原因可能是批次间玉竹饮片的厚度不同造成的，与转移率差异较大的原因相同.在制备标准汤剂过程中，薄的玉竹饮片中多糖比厚的玉竹饮片中提取的更完全，进而得膏率偏高.

在12批玉竹指纹图谱中选取了5个分离度和峰形较好的峰作为共有峰对玉竹进行鉴别和质量控制，后期会对共有峰所代表的成分通过质谱进行进一步明确.

多糖是中药中含量最高的一类成分，其具有广泛的生物活性，包括抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗突变、免疫调节、抗病毒和美容养颜等方面的作用.比如黄芪多糖调节免疫功能作用明显；何首乌多糖降血脂作用显著；忍冬藤多糖可以抗氧化并延缓衰老等[11].多糖药效高且毒副作用小，具有很大的开发潜力.标准汤剂质量标准的制定为多糖的开发利用提供参考标准，规避了因提取不规范造成的药效差异，提供了中药材使用水准.

虽然有关饮片标准汤剂的研究已经有较多的报道，理清了很多关键问题.然而这些研究均是以单体成分为含测指标，主要关注某个或某几个单体成分，忽略了对某一类或几类有效成分群的含量测定.虽然单体成分的含量测定更为准确、方便，但是有效成分群的含量具有更广泛的代表性，与药效的关系也更为密切.因此在标准汤剂的质量标准制定中，不应该忽略有效成分群的含量测定.以玉竹标准汤剂为示范性研究对象，明确其制备方法，建立其质量标准，为玉竹及其他含多糖药材的配方颗粒制备及其质量标准的建立提供了参考.

4 总结

12批玉竹标准汤剂的相似度均大于0.9，均一性较好，质量稳定，本研究采用的苯酚-硫酸法测多糖含量，操作简单，快速，灵敏.方法学考察结果表明，仪器精密度、样品稳定性、重复性的RSD均小于3%.因此，该方法能为玉竹标准汤剂的质量研究及其配方颗粒质量评价提供参考，同时也为含有多糖成分的黄芪、枸杞、麦冬、灵芝等饮片标准汤剂的质量标准研究及其配方颗粒质量评价提供参考.