杜仲、盐杜仲标准饮片制备及其质量评价研究

天津市滨海新区中医医院（300450）刘海

杜仲作为一种名贵的滋补中药材，味甘性温，具有补肝肾、养胎、强筋骨等功效，中医上常将其用于治疗肝肾虛匮、腰膝酸软等病症[1][2][3]。现代医学研究发现杜仲含有黄酮类、木质素类、多糖类等多种活性成分，具有加速细胞代谢、分解胆固醇、利尿清热、广谱抗菌、平衡血压等作用。杜仲炮制品种类较多，其中尤以盐杜仲应用最多[4][5]。杜仲经过盐炙，可以促进其有效成分溶出，有助于强化药效，《中国药典》2015版将盐杜仲正式收录[6][7]。由于中药炮制机制复杂，直接造成了中药饮片与原药材的差异，因此，建立科学合理的中药饮片炮制标准并进行质量评价，在临床上具有重要的实际价值。

1 杜仲标准饮片的标准化研究

收集市面上优质杜仲药材并委托某中药饮片责任有限公司根据标准炮制流程制备杜仲原形饮片、盐杜仲原形饮片各3批，并选取市场上广泛流通的两家主流中药饮片公司制备的不同批次的杜仲、盐杜仲饮片作为参考对象。依次选取普通粉碎、超微粉碎下的杜仲以及盐杜仲饮片粉末各100克，筛分法计算粉末粒径分布，结果显示，与超微粉碎方式相比，普通粉碎方式下杜仲和盐杜仲粉末粒径分布不集中。选取超微粉碎方式下杜仲、盐杜仲饮片粉末样品适量，以近红外光谱、外观颜色、松脂醇二葡萄糖苷含量等方法对粉末均匀性进行研究。以光谱的整体偏差值（S）、粉末总色值（Eab）、松脂醇二葡萄糖苷含量的相对标准差（RSD）作为评价参数。当超微粉碎时间不超过30分钟时，杜仲样品粉末S值、Eab值以及RSD值均随粉碎时间的增加而减少，即粉末粒径越小，流动性更好；当超微粉碎时间控制在45～60分钟范围内时，样品粉末S值、Eab值以及RSD值均有所增大。超微粉碎时间为15、30、45分钟时，盐杜仲样品粉末的Eab值较小；超微粉碎时间为30、45分钟时，盐杜仲样品粉末的RSD值较小；超微粉碎时间为30分钟时，盐杜仲样品粉末的S值较小。即超微粉碎30分钟是杜仲和盐杜仲的最佳粉碎工艺。

2 标准饮片质量保准的建立及样品质量分析

下文主要对委托加工的杜仲盐杜仲样品、对照品以及均匀化工艺得到的饮片的性状、水分、灰分、浸出物等指标进行质量分析研究。杜仲以及盐杜仲饮片的性状特征如下：前者多为丝、块状，外呈灰褐色，可见皱纹、凹槽，内表面呈暗紫色，断面可见细密橡胶丝，味稍苦；后者形同前者，味微咸，盐杜仲饮片折断时胶丝弹性差。以胶丝、石细胞、木栓细胞为观察对象进行显微镜观察结果显示，不同批次的杜仲、盐杜仲饮片显微特征无明显差异。薄层色谱鉴定结果显示，研究所选取的杜仲和盐杜仲饮片（原形饮片、市售饮片、均匀化所得饮片）色谱在相同的位置上显示有相同颜色的斑点。对杜仲和盐杜仲饮片的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、松脂醇二葡萄糖苷含量进行测定，结果显示杜仲及盐杜仲标准饮片的水分含量、总灰分、酸不溶灰分最大阈值依次为13.0%、10.0%和4.0%，杜仲及盐杜仲标准饮片的浸出物含量、松脂醇二葡萄糖苷含量的最小阈值依次为11.0%、0.10%。根据该阈值范围并结合薄层鉴别结果，可以为杜仲和盐杜仲饮片质量评价提供依据。

3 标准饮片HPLC特征图谱分析

①特征图谱方法研究。选用50%浓度的甲醇作为提取溶剂，选用Agilent Zorbax C18（150毫米×4.6毫米，5微米）色谱柱对实验溶液进行分离，检测波长为230纳米，流动相系统为乙腈－0.1%磷酸水溶液系统，柱温条件为30摄氏度。供试品溶液稳定性考察、精密性考察显示供试品溶液在24小时内是稳定的并且仪器精密度良好。②杜仲、盐杜仲标准饮片特征图谱的建立。取杜仲、盐杜仲标准饮片适量，在上述色谱条件下采集杜仲及盐杜仲标准饮片的HPLC谱，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件分析得到杜仲及盐杜仲标准饮片的HPLC特征图谱，该图谱共标定27个共有峰，其中4号、7号、11号、12号峰分别对应京尼平苷酸、绿原酸、京尼平、松脂醇二葡萄糖苷等成分。③杜仲原药材、杜仲和盐杜仲原形饮片以及均匀化饮片HPLC图谱对比研究。在相同的色谱条件下采集HPLC图谱，结果显示，杜仲、盐杜仲原形饮片与均匀化饮片之间的HPLC图谱差异较小，即超微粉碎等工艺不会影响药材的化学性质，可以全面的展示饮片的化学信息。与杜仲原药材HPLC图谱相比，原形饮片和均匀化饮片的4、6、9、10等峰面积明显偏高，且原药材的2号峰消失，新增了33号峰。该对比研究显示杜仲经过炮制以后化学成分发生了变化，这种变化不仅仅体现在化学成分的含量上，也体现在化学成分的种类上。④杜仲、盐杜仲市售饮片与标准饮片HPLC图谱的一致性评价。采集HPLC图谱，并将图谱信息与标准饮片的图谱进行对比，结果显示，市售杜仲饮片与标准饮片峰数量、峰面积差异较小，即杜仲标准饮片具有代表性和适用性。市售盐杜仲饮片与标准饮片总体匹配程度较好，但其中一批次市售饮片与标准饮片相对峰数量减少3个，分析认为与不同厂家、不同批次盐杜仲的炮制火候等因素有关。⑤杜仲炮制过程中化学成分的变化规律。下文重点分析炮制时间对于盐杜仲性状和有效成分的影响。取杜仲、盐杜仲原形饮片适量，依次等分为三份，在200摄氏度下分别炒制3、7、10分钟，得到三批不同的盐杜仲样品，其性状及松脂醇二葡萄糖苷含量见附表。

附表 不同炮制程度盐杜仲样品的性状特征及松脂醇二葡萄糖苷含量

4 稳定性分析

经过强光照射后，杜仲及盐杜仲性状、总灰分、浸出物等成分无明显变化，但水分、松脂醇二葡萄糖苷等含量稍有下降，强光实验表明杜仲及盐杜仲标准饮片需要避光保存。经高温实验后，杜仲及盐杜仲水分明显减少、松脂醇二葡萄糖苷含量略有降低，其余成分变化较小，高温实验表明杜仲及盐杜仲标准饮片需要常温保存。经高湿实验后，杜仲及盐杜仲吸湿增重超过5%，浸出物及松脂醇二葡萄糖苷含量稍有降低，其余成分变化较小，高湿实验表明杜仲及盐杜仲标准饮片需要置于干燥处保存。上述高温、高湿、强光影响因素试验结果表明，杜仲和盐杜仲标准饮片需要置于阴凉干燥处保存。受试验时间等因素的限制，仍需要开展长期试验对杜仲和盐杜仲饮片的稳定性进行研究。

5 讨论

本文开展了杜仲及盐杜仲标准饮片制备及其质量评价研究，包括杜仲及盐杜仲保准饮片均匀化工艺、标准饮片质量标准及市售饮片质量分析、标准饮片HPLC特征图谱研究以及稳定性研究等。受试验时间等因素的限制，仍需要开展长期试验对杜仲、盐杜仲饮片的稳定性进行研究。此外，实验研究发现杜仲蕴含的化学成分随着炮制时间的增加呈动态变化的趋势，为了提升饮片质量评价的精度，亟待制定科学合理、参数明确的炮制规范。