某尿液流水线审核报告流程的验证及改进

陈雅斌，叶玉华，陈 楠，张 立，张志珊，苗 杰△

1.福建医科大学附属泉州第一医院检验科，福建泉州 362000；2.联勤保障部队第九七○医院检验科，山东威海 264200

尿液常规检测主要包括尿液干化学检测和尿液有形成分检测。建立恰当的审核报告流程是实验室尿液检测能够发出正确报告的重要一环。其中复检规则的建立和验证亦是ISO15189实验室认可中体液学领域的重要内容[1]。目前，已经有不少研究针对不同的尿液流水线进行了复检规则的建立和验证[2-4]。日本Sysmex公司的UC3500尿干化学分析仪(简称UC3500)联合UF5000尿液有形成分分析仪(简称UF5000)尿液流水线是新一代产品，正在国内外各大实验室逐步推广，目前研究主要集中于尿路感染的筛查[5-6]，其智能审核的建立和验证亦有1～2篇文献，其中WANG等[7]建立的审核报告流程在6家大型医院，共计3万多例尿液标本中经过验证，显示出良好的临床适用性[8]。为了验证该尿液审核流程是否适用于本实验室，本研究选取了1 300例尿液标本进行审核规则的验证和性能评价，以期为各实验室建立或验证审核报告的流程提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2020年9-11月就诊于泉州市第一医院的门诊和住院患者，以及健康体检人员共1 300例，其中男677例，女623例，年龄9个月至97岁，中位年龄50岁。标本来源于肾内科、泌尿外科、儿科、妇产科、内分泌科、呼吸科、感染科等各个临床科室以及体检中心。

1.2仪器与试剂 UC3500和UF5000为日本Sysmex公司产品。试剂均为原厂配套试剂，且均在有效期内使用。离心机为上海卢湘仪离心机仪器有限公司的TD4N型尿液低速离心机，已经过校准，离心机转速符合规定；显微镜采用日本Olympus光学工业株式会社生产的CX23(升级版)双目显微镜，定期进行保养。

1.3方法

1.3.1仪器检测 按照《全国临床检验操作规程(第4版)》[9]要求，规范留取中段尿液标本10 mL，严格按照标准化操作流程(SOP)在UC3500和UF5000尿液流水线上进行检测。仪器已经过定期校准及性能验证(包括干化学分析仪阴阳符合率、有形成分分析仪精密度、携带污染率、可报告范围等)，符合厂家和ISO15189的规定。确保每日质控在控后再进行尿液标本的检测。每日随机选取30例，记录每例标本UC3500的白细胞酯酶(LEU)、隐血(BLD)、尿蛋白(PRO)以及UF5000的红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)、管型计数(CAST)、病理管型(Path.CAST)、真菌(YLC)等检测结果，所有原始数据均备份留档。

1.3.2人工镜检 尿液流水线检测完毕后离心(400×g，5 min)，弃上清液，留取0.2 mL沉渣重新混匀，取适量混匀后的沉渣滴于载玻片上，并加盖盖玻片。由2名具有主管技师职称的检验师采用双盲法进行人工镜检。先用低倍镜(10×10)观察全片，再用高倍镜(10×40)仔细观察。观察至少20个低倍镜视野，以及10个高倍镜视野，并记录低倍镜下CAST，高倍镜下红细胞、白细胞等有形成分的每视野平均数量。以2名检验师的均值作为最终结果。2名检验师已事先按照ISO15189规定进行人员比对，比对结果符合规定。每份尿液标本均在2 h内完成留取、上机检测、离心镜检工作。

1.3.3审核规则的验证 引用文献[7-8]建立智能审核规则时报道的UF5000的参考范围，RBC、WBC检测项目的等级，以及镜检的阳性标准。以人工镜检结果作为金标准，上述文献中的智能审核规则为依据，分析1 300例标本中触发各审核规则的例数，以及各性能评估指标包括复检率、人工审核率、真阳性率、真阴性率、假阳性率、假阴性率等。并进一步分析假阴性标本中肾脏相关疾病的具体情况。

1.4统计学处理 使用仪器自带软件Labman UriAccess 3.0、Microsoft Excel 2007软件进行统计分析。评价指标包括复检率、人工审核率、真阳性率、真阴性率、假阳性率和假阴性率(漏诊率)。复检率=触发复检规则的标本例数/总标本例数×100%；人工审核率=触发人工审核规则的标本例数/总标本例数×100%；真阳性率=真阳性标本例数/总标本例数×100%；真阴性率=真阴性标本例数/总标本例数×100%；假阳性率=假阳性标本例数/总标本例数×100%；假阴性率=假阴性标本例数/总标本例数×100%。

2 结 果

2.1智能审核规则验证的性能评价 1 300例标本中触发智能审核规则的有558例(42.92%)，其中触发规则1～8的复检率为18.85%(245/1 300)，触发规则9～19的人工审核率为24.08%(313/1 300)，具体触发的各规则例数见表1。以人工镜检结果作为金标准，计算UF5000检测结果和人工镜检结果的符合率。未触发RBC、WBC、CAST人工镜检(规则1～8)的标本共1 055例，真阳性率为17.00%(221/1 300)，真阴性率为55.38%(720/1 300)，假阳性率为4.46%(58/1 300)，假阴性率为4.31%(56/1 300)。

表1 触发智能审核规则情况

2.2假阴性标本分析 56例假阴性标本中43例未触发审核规则，13例触发人工审核规则。肾内科或泌尿外科尿液标本10例，包括未触发审核规则6例和触发人工审核规则4例。假阴性以WBC多见，镜下范围在4～8个/高倍镜。RBC、CAST的假阴性标本其镜检结果均在临界值范围，见表2。

表2 肾内科/泌尿外科假阴性标本分析

2.3审核规则的改进和分析 表1可见各审核规则中镜检规则8、10、14、15符合率为95.00%以上，根据表1情况，以及本实验室的工作需求对审核规则进行修改(表3)。并对改进后的规则重新进行性能评价，结果显示，修改后复检率为16.92%(220/1 300)、人工审核率为16.07%(209/1 300)、真阳性率为19.31%(251/1 300)、真阴性率为55.46%(721/1 300)、假阳性率为4.15%(54/1 300)、假阴性率为4.15%(54/1 300)。修改审核规则后可见54例假阴性标本，其中肾内科或泌尿外科尿液标本8例，为表2中的病例1～8，而病例9、10由于规则15的修改进行镜检。

表3 审核规则修改

3 讨 论

本研究对文献[7-8]建立的审核规则进行了验证，1 300例尿液标本的假阴性率仅为4.31%，符合ISO15189实验室认可的规定和通用评估标准[1，10-11]，说明该审核规则是适用于本实验室的。但在结果分析中发现，虽然复检率为18.85%，但人工审核率却为24.08%。因此，针对验证结论，以及本实验室的实际工作需求，对部分规则进行了修改。

具体修改规则如下。(1)规则8存在以下两种情况时依然选择人工镜检。①CAST≤1.96个/微升(男)或≤1.62个/微升(女)，但该病例为肾脏相关疾病，如肾功能不全，以及高血压、系统性红斑狼疮、糖尿病等可能累及肾脏的疾病[12-14]；②同时出现CAST≥1.96个/微升(男)或≥1.62个/微升(女)。原因在于规则8仅对PRO进行了规定，但并未对CAST进行定义。而在验证中规则8镜检符合率为95.75%，即表明UF5000中CAST的计数结果和人工镜检的符合率极高。因此，本研究认为不需要对每例标本，特别是CAST计数阴性的标本均进行人工镜检，但为了不漏检肾脏相关疾病，对于此类标本还是有必要进行人工镜检。同时对于PRO和CAST双阳性的标本，仍然有因干扰因素的存在而导致假阳性的情况，因此也进行了人工镜检。(2)删除规则10和规则14。这两个规则分别表现为红细胞、白细胞检测项目在UC3500和UF5000上双阳性，但级差较大的情况。在验证中发现仅有17例出现了这种情况，而且符合率为100.00%，虽然也有几例存在干扰因素，但UF5000计数结果依然和人工镜检结果相吻合，因此本研究认为可以不考虑级差问题，直接发放审核报告。(3)规则15对肾脏相关疾病的标本进行了人工镜检。修改原因和规则8类似，UF5000的CAST和人工镜检的符合率极高，因此可以直接放行，但为了避免漏诊肾脏相关疾病，单独定义此类标本进行人工镜检。(4)规则19由人工审核修改为人工镜检。这是出于本实验室的工作需求，笔者认为YLC也是尿路感染的主要病原体之一[15]，且该规则镜检符合率极低，仅为20.83%，YLC的假阳性结果势必会对临床医生的诊疗造成干扰，因此对于所有YLC阳性的标本全部进行复检。(5)其余未修改的人工审核规则，由于UF5000检测结果和镜检结果并非完全一致，因此人工审核时应根据标本具体情况和临床需要决定是否镜检。

采用修改后的审核规则重新对1 300例标本进行统计分析，结果显示人工审核率从修改前的24.08%降低至16.07%，有8%左右的标本直接放行，临床工作量降低。另一方面，修改后的复检率、真阳性率、真阴性率、假阳性率、假阴性率均与修改前持平，并未出现明显波动，其中假阴性率仍然在要求的5%以内，依然是符合ISO15189实验室认可的规定和通用评估标准的。这表明修改后的审核规则在减少工作量的同时并没有导致工作效率下降。因此，本研究认为修改后的审核规则适用于本实验室。然而不同的实验室应根据自己实验室的具体情况，验证并分析适合自己实验室的审核规则。

10例肾内科或泌尿外科的假阴性标本中，在修改审核规则后有2例因触发了修改后的规则15而进行了镜检，避免了漏诊。病例1～8依然被漏诊，但从表2中可以看出，这些漏诊标本的RBC、WBC、CAST均在临界值范围。因此，本研究认为小概率的漏诊可以接受。

综上所述，本研究验证并改进的审核规则，其假阴性率<5%，符合ISO15189实验室认可的规定和通用评估标准，可以应用于本实验室。同时，修改后的审核规则在人工审核率上有所降低，减轻了临床的工作量。本研究为其他实验室验证并改进该尿液流水线审核规则提供了一定的参考资料。