颈动脉超声联合血清微小RNA检测对短期继发脑梗死的诊断价值*

王适达，王海虹，张立娜

河北省保定市第二中心医院：1.功能科；2.神经内科；3.老年病科，河北保定 072750

短期继发脑梗死指缺血性脑卒中，属于脑血管疾病，致病原因有脑部缺氧、血液循环障碍、脑部缺血等，按照临床表现可分为腔隙性梗死、部分前循环梗死、全前循环梗死、后循环梗死[1-3]。有资料证明,动脉栓塞、血栓形成、载体动脉病变堵塞穿支动脉、心肌病等也会导致此病的发生[4]。目前可以通过超声、CT、磁共振(MRI)等对该病进行检查。血液检查具有快速、简便、经济等优点。有研究显示，通过微小RNA检测可以很快地帮助医生判断短期继发脑梗死患者病情严重程度，及时对患者给予正确的治疗，避免不良事件的发生。除此之外，颈动脉超声也可以很好地帮助医生诊断此病，但目前临床工作中关于miR-124、miR-155、miR-23与颈动脉超声联合检测的相关文章较少，本文旨在研究颈动脉超声与血清miR-124、miR-155、miR-23联合检测对短期继发脑梗死的诊断价值及影像学特征，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年6月至2020年6月在本院治疗的58例短期继发脑梗死患者纳入短期继发脑梗死组，其中男28例，女30例；年龄60～74岁，平均(63.65±6.65)岁。选取同期在本院体检的58例健康体检者纳入对照组，其中男29例，女29例；年龄61～75岁，平均(64.6±6.65)岁。两组年龄、性别等一般资料比较，差异无统计意义(P>0.05)，具有可比性。本研究中的研究对象及家属均知情并签署知情同意书，经本院伦理委员会批准。纳入标准：所有短期继发脑梗死患者均经检查后确诊，符合《中国脑梗死中西医结合诊治指南(2017)》[5]中短期继发脑梗死的诊断标准。排除标准：哺乳期、妊娠期女性，精神病患者，脑部创伤患者，合并其他肿瘤患者。

1.2方法

1.2.1颈动脉超声 采用TOSHIBA公司Aplio300型彩色多普勒声像仪进行颈动脉彩超检查，并进行脑部超声检查，使用10 MHz线阵式探头，对短期继发脑梗死患者颈内外动脉、双侧颈总动脉、颅脑部进行检查。观察并判断狭窄的位置，在狭窄处测定血管狭窄程度。狭窄程度判断：≤50%为轻度狭窄，>50%～75%为中度狭窄，>75%～99%为重度狭窄。超声检查：双侧侧脑室扩张，内充满强回声，脑组织内出现强回声区，脑组织受压变薄，中线移位，侧脑室受压变形为脑实质出血；侧脑室下方尾状核头部一个或多个强回声团，冠状位前角出现为脑室出血；硬脑膜带状强回声与颅骨之间显示带状或不规则形无回声，慢性呈低或强回声为血肿。

1.2.2MRI检查 采用西门子1.5T MRI扫描仪进行检查，自旋回波，然后对颅脑部进行扫描。所得图像均由两位经验丰富的心脑血管疾病医生进行阅片。MRI检查表现为血液长T1、长T2信号，弥散像呈高信号，血肿处T1、T2均呈明显高信号，T2周边见线样低信号环的为脑实质出血；MRI检查表现为局部不规则低密度区，脑血管造影处可见不规则且扭曲的血管团为脑室出血；MRI检查表现为T1加权像上呈低信号，周围可形成相对比较明显的水肿带为血肿。

1.2.3miR-124、miR-155、miR-23检测 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测血清miR-124、miR-155、miR-23水平，使用紫外分光光度仪检测所提取的RNA纯度，总RNA纯度鉴定运用聚丙烯酰胺凝胶电泳。利用PCR试剂盒合成cDNA。反转录：14 μL模板RNA、2 μL Enzyme mix，4 μL 5×RT缓冲液补至20 μL，之后将所合成的cDNA放置于温度为-20 ℃冰箱内进行保存。反应体系：8 μL cDNA模板、10 μL SYBRP Green mix、2 μL PCR Primer mix。反应条件：95 ℃ 10 min；95 ℃ 10 s；60 ℃ 1 min；40个循环。以U6为内参，采用2-ΔΔCt方法计算miR-124、miR-155、miR-23水平。miR-124引物序列：上游为5′-GAGGATCTTCATGAGGTAGTCAGT-3′，下游为5′-CTGGCACCACACCTTCTACAATGAGC-3′；miR-155引物序列：上游为5′TAGAAGGCACAGTCGAGG-3′，下游为5′-CAGGAAACAGCTATGAC-3′；miR-23引物序列：上游为5′-GCCTGAGACTCTGCCTTCTG-3′，下游为5′-CAGCTGCATTGGATTTACCA-3′。

2 结 果

2.1颈动脉超声、MRI对短期继发脑梗死患者颈动脉狭窄程度的检出情况 以临床诊断结果作为金标准，与颈动脉MRI检查相比，颈动脉超声检查的检出率升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 颈动脉超声、MRI对短期继发脑梗死患者颈动脉狭窄程度的检出情况[n(%)]

2.2短期继发脑梗死患者颈动脉超声、MRI检查的影像学特征 与MRI检查相比，超声检查出硬膜下出血、脑实质出血、脑室出血、血肿的检出率升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 短期继发脑梗死患者颈动脉超声、MRI检查的影像特征情况比较[n(%)]

2.3短期继发脑梗死组与对照组miR-124、miR-155、miR-23水平比较 与对照组相比，短期继发脑梗死组miR-124、miR-155、miR-23水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组miR-124、miR-155、miR-23水平比较

2.4颈动脉超声、MRI分别联合miR-124、miR-155、miR-23检测对短期继发脑梗死的诊断价值 与MRI联合miR-124、miR-155、miR-23检测相比，颈动脉超声联合miR-124、miR-155、miR-23检测诊断短期继发脑梗死的灵敏度、特异度、准确度更高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 颈动脉超声、MRI分别联合miR-124、miR-155、miR-23检测对短期继发脑梗死的诊断价值比较(%)

如图1所示，超声检查发现短期继发脑梗死患者左侧大脑中动脉及中动脉上干闭塞，左侧大脑前动脉通过软膜支向大脑中动脉区域代偿供血。图2提示MRI检查发现患者脑实质出血，基底核密度稍减低，右侧颞叶脑沟变浅，增强后患者出血位置表现为不同程度的强化。

注：A为左侧大脑中动脉及中动脉上干闭塞；B为左侧大脑前动脉通过软膜支向大脑中动脉区域代偿供血。

2.5miR-124、miR-155、miR-23、颈动脉超声对短期继发脑梗死的诊断价值 ROC曲线分析提示，4项联合检测的诊断价值较高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

注：A为脑实质出血；B为左侧颞叶脑沟变浅。

表5 miR-124、miR-155、miR-23、颈动脉超声对短期继发脑梗死的诊断价值

3 讨 论

短期继发脑梗死是脑血管疾病中最常见的类型，占脑血管疾病的70%，发病人群主要集中在肥胖者、高血压患者、糖尿病患者、中老年人群，其中老年人患病率较高[6]。短期继发脑梗死可以从病因、梗死部位进行疾病分类[7]。其中中期短期继发脑梗死患者多出现四肢瘫、意识障碍、昏迷、应激性溃疡等症状[8-9]。

医学影像学可以扩大疾病在人体的检查范围，目前影像学诊断还在不断发展。MRI是由射频系统、计算机图像重建系统、磁铁系统组成的，分析的方式有灰度像素点、全局图像、灰度定位，能有效区分患者肿瘤组织、炎症信号等[10-11]。曹晓轩等[12]研究发现，通过MRI检查可以帮助医生快速掌握短期继发脑梗死的病理特征，但是MRI检查可能会对部分患者造成一定的不适感。颈动脉超声检查是检测此类疾病最为常见的方法，属于非创伤性检查技术，可以很好地评估大动脉血管病变的程度及血液流动的情况，帮助医生评估病情及判断预后情况[13]。冯锦丽等[14]研究发现，动脉的狭窄程度与该病的发生有明显的相关性，尤其是颈动脉狭窄超出50%的患者其患病率明显增高，证实了颈动脉超声可以用来判断是否存在异常病变。以上结果说明，通过颈动脉超声检查可以很好地检测并由此观察短期继发脑梗死的影像表现，可以很好地帮助医生进行诊断，也可以更快地给出针对性的治疗方案。

miR-124、miR-155、miR-23水平的变化可反映短期继发脑梗死的严重程度，经研究发现miR-124、miR-155、miR-23参与脑梗死的发病过程，显示出炎症的损伤程度。miR-124是一种使巨噬细胞活化和小胶质细胞静止的关键调节剂，可以达到促进康复的作用[15]。miR-124检测为阳性的患者，病死率要高于阴性的患者(在正常值的范围内可促进康复，在疾病状态下该指标不处于正常值范围，而是处于上升状态，故病死率较高)[16]。多项研究发现，miR-124可能参与了疾病的进展及整个病理生理的过程，可影响炎性反应及对细胞凋亡的调控等，对预后同样具有重要的影响[17-18]。而miR-155可调控急性炎症，可以起到一定的免疫抑制作用。王兴萍等[19]研究发现，miR-155的表达量可以反映出机体炎性反应，其中效应性T细胞以及特异性抗体的产生，可以在特异性免疫及固有免疫中起到关键的作用，并参与短期继发脑梗死的炎性反应[20]。颈动脉超声联合血清miR-124、miR-155、miR-23检测短期继发脑梗死的灵敏度、特异度、准确度较高，说明4项联合检测的诊断效能较高[21]。本研究中短期继发脑梗死患者以重度狭窄患者为主，患者分布较为集中，因此需要加大样本量进一步研究。

综上所述，本研究发现颈动脉超声联合血清miR-124、miR-155、miR-23检测对短期继发脑梗死具有较高的诊断价值。