燕山早丰板栗花和栗蓬中总黄酮抑菌试验

王凤春，孙海涛

（1河北省板栗工程技术研究中心 河北迁西 064300；2迁西县板栗产业研究发展中心）

板栗（Castanea mollissima BL.）属壳斗科（Fagaceae）栗属（Castanea）植物，是重要的经济林树种[1]。板栗树是雌雄同株异花植物，板栗花是指板栗花序中的雄性花序，板栗雌雄花的数量差异很大，在实际生产中需要人工疏除大量的雄花序。栗蓬为板栗的总苞。板栗花和栗蓬中均含有大量黄酮物质[2～3]，其具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等药理活性及药用价值[4～7]。随着板栗生产发展的加快，板栗花和栗蓬资源日益丰富，但对其开发利用还很薄弱，造成的浪费日益加重。因此对板栗花和栗蓬中黄酮的开发利用，既具有可观的经济效益，又可解决板栗花与栗蓬资源浪费的问题。本研究以燕山早丰的板栗雄花和栗蓬为原料提取总黄酮，并采用滤纸片法对总黄酮的抑菌活性进行验证，旨为板栗花和栗蓬的药用功能开发利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料及试剂 板栗花、栗蓬分别于2020年6月初和10月底采自河北省唐山市迁西县燕山早丰园区，自然晾干，于电热恒温鼓风干燥箱中40℃避光干燥，经药物粉碎机粉碎、过20目筛后同干燥剂一起装入密封袋中备用。试验用菌为金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肺炎链球菌、绿色链球菌、大肠杆菌和肠炎沙门氏菌6种，均由沈阳药科大学药理实验室提供。试验仪器和设备有药物粉碎机、电热恒温鼓风干燥箱、手提式压力蒸汽灭菌器、超净工作台、恒温培养箱和20目筛。

1.2 试验方法

1.2.1 药敏片制备 取定性滤纸（新华1号），借助打孔器裁制成直径6 mm的圆形小纸片。将圆形小纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中备用，再用单层报纸包住瓶口。经121℃、15～20 min高压消毒后，置于37℃恒温箱中48 h，使其完全干燥。

1.2.2 粗黄酮提取制备 称取燕山早丰的栗花、栗蓬干粉各20 g，放于1 000 mL烧杯内，分别加入500 mL蒸馏水，水烧开煎煮3.0 h，过滤取其上清。滤液浓缩至50 mL后，分别加入50 mL的无水乙醇溶液和5 mL的1.0 mol/L的氢氧化钠溶液，将液体静置16 h后过滤，取其上清。上清液内分别加入10 mL的1.0 mol/L的HCl溶液，静置1 h后过滤，取沉淀即为总黄酮。1.2.3 抗菌药纸片制作 分别取1.2.2制备的栗花、栗蓬总黄酮0.1 g，溶解于盛有1 mL无菌水的5 mL离心管中，移取0.25 mL加入到1.2.1制备的青霉素瓶中，并缓慢翻动圆形小纸片，使各纸片充分浸透药液。同时在瓶口做好标记，置于37℃恒温箱中12 h，干燥后即密封备用。采用同样方法制备青霉素药敏纸片和蒸馏水纸片作为对照。

1.2.4 抑菌方法 在超净台内，用灭菌后的接种环取适量细菌分别在培养皿边缘相对4点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第2点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于培养皿中。先用酒精灯将镊子灭菌，再取药敏片贴到平皿培养基表面。可用镊子轻按药敏片，使药敏片与培养基紧密相贴。将平皿培养基置于37℃恒温箱培养24 h后，观察试验效果。

2 结果与分析

2.1 栗花总黄酮的抑菌作用 栗花总黄酮的抗菌药纸片抑制7种细菌的抑菌环直径见表1，栗花总黄酮的抗菌药纸片对7种细菌的抑菌环直径范围3～6 mm，阳性对照青霉素药敏片的7种细菌的抑菌环直径范围为12～16 mm，而阴性对照蒸馏水滤纸片对7种细菌均无抑制作用，说明栗花总黄酮对7种细菌均具有一定的抑制作用。

表1 栗花总黄酮抑菌试验结果

2.2 栗蓬总黄酮的抑菌作用 栗蓬总黄酮的抗菌药纸片抑制7种细菌的抑菌环直径见表2，栗蓬总黄酮的抗菌药纸片对7种细菌的抑菌环直径范围4～6 mm，阳性对照青霉素药敏片的7种细菌的抑菌环直径范围为11～16 mm，而阴性对照蒸馏水滤纸片对7种细菌均无抑制作用，说明栗蓬总黄酮对7种细菌均具有一定的抑制作用。

表2 栗蓬总黄酮抑菌试验结果

3 结论

燕山早丰的栗花和栗蓬中总黄酮对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肺炎链球菌、绿色链球菌、大肠杆菌、肠炎沙门氏菌和伤寒沙门氏菌7种细菌均具有一定的抑制作用。板栗花中总黄酮对金黄色葡萄球菌和伤寒沙门氏菌的抑制效果较强，对枯草芽孢杆菌和肠炎沙门氏菌的抑制效果次之；栗蓬中总黄酮对绿色链球菌的抑制效果较强，对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的抑制效果次之。板栗花和栗蓬可作为药用材料，并具有良好的开发应用前景。