ELISA联合TRUST在梅毒螺旋体感染患者中的诊断效果及效能ROC曲线研究

职建军

(安阳市疾病预防控制中心 人事科，河南 安阳 455000)

梅毒是由梅毒螺旋体感染所引起的性传染疾病，可引起人体多系统损害，破坏正常组织功能，严重威胁着患者的生命安全[1]。梅毒血清学检查对梅毒早期诊断、控制梅毒传播具有重要作用。因此，全面认识和了解梅毒抗体检测对指导临床诊断和疗效观察具有重要意义[2]。临床主要有两类检验方法，即非梅毒螺旋体血清学实验和梅毒螺旋体血清学试验[3]。甲基胺红不加热血清试验(TRUST) 检测属于非梅毒螺旋体血清学实验，试验结果的特异性相对较差，易出现假阳性结果。酶联免疫吸附法(ELISA) 属于梅毒螺旋体血清学试验。为提高临床检测的准确性，本研究以梅毒螺旋体感染患者为对象，探讨ELISA 联合TRUS 对梅毒螺旋体感染的诊断价值。报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2019年1月至2019年10月疑似梅毒螺旋感染患者50例作为研究对象，其中男28例，女22例；年龄25 ～65 岁，平均(32.25±5.53) 岁；病情分期：15例Ⅰ期患者、24例Ⅱ期患者、8例Ⅲ期患者，3例潜伏期患者。所有患者均进行TRUST、ELISA 和TPPA 检验。本研究经医院伦理委员会批准，患者均知情同意。

1.2 方法

疑似梅毒螺旋体感染患者，均经TRUST、ELISE 及联合检测，并以梅毒旋体明胶颗粒检测(TPPA) 作为金标准，确诊前患者均行ELISA 和TRUST 检测，具体方法如下。

ELISA：(1) 仪器与设备。ELISA 试剂盒来源于上海恒远生化试剂有限公司，采用双抗体夹心法检测，为降低检测结果出现的误差，严格按照试剂盒说明操作。(2)检测方法。①检测前患者需空腹8 h 以上，于次日清晨抽取外周静脉血2 mL，采用血液离心仪将标本血液分离10 min，转速为3 000 r/min，取最上层血清备用；②将0.05 mL 的碳酸盐包被缓冲液(pH 值为9.6) 加入血清中稀释；③将稀释后的血液标本置入聚苯乙烯板的反应孔中孵化，每个反应孔中置入0.1 mL 样本并用保鲜膜密封好，在-4℃的环境下进行孵育；④孵育后，取出聚苯乙烯板，清除溶液，用缓冲液反复清洗3 遍，将待检标本置入反应孔中，在37℃恒温箱中孵育60 min，孵育结束后，反复冲洗3 遍；⑤制作阳性及阴性对照孔，将0.1 mL酶标抗体置入反应孔中，进行孵育60 min，孵育后清洗，将0.1 mL TMB 溶液进行孵育30 min，孵育结束后，将0.05 mL 2M 硫酸加入反应孔中进行观察。

检验完毕后进行TRUST 检测，TRUST 试剂盒来源于上海浩然生物技术有限公司。

TPPA 检测：抽取患者清晨空腹外周血2 mL，血清分离后，采用TPPA 试剂盒检测，试剂盒来源于上海浩然生物技术有限公司。

1.3 观察指标

以TPPA 检测结果作为金标准， 对比ELISA、TRUST 及联合检测结果的诊断符合率。比较ELISA 和TRUST 及联合检测的灵敏性、特异性。

1.4 统计分析

采用SPSS 18.0 软件处理，计数资料采用n(%)表示，行χ2检验；计量资料采用±s表示，行t检验；绘制ROC 曲线，分析ELISA、TRUST 在梅毒螺旋体感染患者中的诊断效能，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 ELISA 检测、TRUST 检测及二者联合检测结果的诊断符合率比较

疑似梅毒螺旋体感染患者均经TPPA 检查确诊，确诊49例，确诊率为98.00%。ELISA 检测确诊47例，诊断符合率为95.92%(P＞0.05)；TRUST 检测确诊41例，诊断符合率为83.67%(P＜0.05)；ELISA 联合TRUS 检测确诊49例，与金标准诊断符合率为100.0%(P＞0.05)。见表1。

表1 ELISA检测、TRUST检测及其两者联合检测诊断符合率与TPPA检查结果比较[n(%)]

2.2 ELISA 检测、TRUST 检测及其两者联合检测在梅毒螺旋体感染患者中的诊断效能

ROC 曲线结果( 见图1) 表明：ELISA 联合TRUST用于梅毒螺旋体感染患者中灵敏度、特异度均高于ELISA 和TRUST 单一检测(χ2=5.392、6.782，P=0.021、0.018)。见表2。

表2 ELISA检测、TRUST检测及其两者联合检测在梅毒螺旋体感染患者中诊断效能

图 1 ELISA 检测、TRUST 检测及其两者联合检测在梅毒螺旋体感染患者中诊断 ROC 曲线

3 讨 论

梅毒是一种慢性性传播疾病，可侵犯多个器官，如未及时治疗可引起神经系统、心血管疾病，甚至危及患者生命。梅毒的病原体是梅青螺旋体，梅毒的传染源是梅毒患者，主要传染途径是性传播，其次是胎盘传播、血液传播[5]。梅毒的早期症状不明显，具有藏匿性，因此需要实验室检验进行诊断。早期诊断有利于控制病情的发展和传播，提高治疗效果及预后[6]。

目前，临床对于梅毒的检验以TPPA 方法为主，TPPA 是梅毒血清学检查的梅毒特异性抗体反应，在判定阳性的情况下，需结合其他的检查结果以及临床症状进行综合判断。临床将TPPA 检测结果作为诊断的金标准，但是该方法检测周期较长，价格昂贵，不适合大量样本的筛查[7]。ELISA 是一种新型检测方法，近年来，被广泛应用于临床实验室指标检测中，检测原理是将抗体与酶复合物结合，产生显色反应，通过显色情况判断检测的阳性或阴性结果[8]。该检验方法取样少、便于操作，可实现样本的自动化检验，适用于大量样本的筛查，使用酶标仪做判断可提高检测结果的准确性[9]。ELISA检测方法中双抗体夹心法的临床诊断准确性最高，双抗体夹心法是用特异性抗原制作的酶结合物，具有很高的检验特异性，从而减少假阴性结果，提高临床检验灵敏性。TRUST 检测的灵敏性较低，不使用于早期梅毒的检测中[10]。

本研究中，疑似梅毒螺旋体感染患者均经TPPA 检查确诊，确诊49例，确诊率为98.00%。ELISA 检测确诊47例，诊断符合率为95.92%(P＞0.05)；TRUST检测确诊41例，诊断符合率为83.67%(P＜0.05)；ELISA 联合TRUS 检测确诊49例，与金标准诊断符合率为100.0%，ROC 曲线结果表明：ELISA 联合TRUST 用于梅毒螺旋体感染患者中灵敏度、特异度均高于ELISA和TRUST 单一检测(P＜0.05)，由此说明，ELISA、TRUST 用于梅毒螺旋体感染检测中具有较高的价值，且二者联合检测可获得较高的灵敏度及特异度。

综上所述，ELISA 法联合TRUST 用于梅毒螺旋体感染患者中能获得较高的诊断符合率，二者联合诊断能提高患者诊断效能，指导临床诊疗，值得应用。